沉淀蛋白题库

1、1、 去除蛋白质的方法有哪些？答：(1) 加入与水混溶的有机溶剂；(2).加入中性盐；(3).加入强酸;(4).加入重金属盐;(5).超滤法;(6).酶水解法;(7).加热法.2、 去除蛋白质的意义是什么？答：使结合型药物释放出来，以便测定药物的总浓度；得到较“干净”的提取液，减少乳化；消除对测定的干扰；保护仪器，延长使用期限。3、 沉淀蛋白中加入甲醇或乙腈的目的是什么？答：加入水溶性的有机溶剂甲醇或乙腈，可使蛋白质的分子内及分子间的氢键发生变化而是蛋白凝聚，是蛋白质结合的药物释放出来。4、 ，有机溶剂沉淀蛋白的原理是什么？答：原理是降低水的介电常数，导致具有表明水层的生物大分子脱水，相互聚集

2、，最后析出。5、 用强酸沉淀蛋白的原理是什么？答：酸沉试剂（高氯酸等）原理是，在低于蛋白质等电点的pH条件下，蛋白质阳离子与沉淀剂的阴离子形成难溶性盐而沉淀，蛋白变性而沉淀。6、 常见蛋白沉淀剂的试剂有：甲醇、乙腈、乙醇、丙酮、高氯酸、四氢呋喃、三氯乙酸。（至少写三种）7、 沉淀蛋白的操作步骤：血浆样品解冻，涡流混匀备用。在EP管中，依次加入内标、血浆样品、沉淀试剂，之后涡流混匀，15000 rpm离心5 min，取上清进样分析。8、 用甲醇、乙腈作为沉淀试剂时，血浆与沉淀剂的比例是多少？答：一般用血浆与沉淀剂的比例为乙腈最低1:2（一般1:3以上），甲醇最低1:3（一般1:5以上）。9、 简

3、述沉淀蛋白的注意事项（答案开放，仅供参考）答：（1）涡流混匀一定要充分，至少30 S以上； （2）沉淀试剂量一定要足，沉淀要充分。（3）有时需要考虑溶剂效应，对峰型的影响 （4）热不稳定的药物，离心时需要冷冻离心。 （5）注意操作，防止污染。10、 比较下面沉淀试剂的沉淀效率：甲醇、乙腈、乙醇、高氯酸。答：高氯酸乙腈乙醇甲醇。表1常见沉淀试剂的蛋白沉淀效率沉淀剂上清液pH值沉淀0.5 mL血浆中95%以上蛋白时所需沉淀剂体积（mL）三氯乙酸（10%，W/V）1.42.00.2高氯酸（6%，W/V）1.50.4钨酸2.2-3.90.6焦磷酸（5%,W/V）1.6-2.70.4硫酸铜、钨酸钠5.7

4、-7.31,0氢氧化锌6.5-7.51,5硫酸铵（饱和）7.0-7.72.0乙腈8.5-9.51.0丙酮9-101.0乙醇9-101.5甲醇8.5-9.51.511、 与液液萃取和固相萃取相比，沉淀蛋白的优缺点是什么？（答案开放，仅供参考）答：优点：简单、方便、迅速、提取回收率高、成本低、易于操作缺点：杂质多，对特殊的药物基质效应强。 将待测物稀释，不能达到浓缩的作用，待测物含量低时不适用。 上清比较脏，柱压高，有可能会导致系统堵塞。12、 简述沉淀蛋白的基质效应、提取回收率的操作过程答：提取回收率（RE）：空白基质，加入沉淀试剂后，涡流混匀，离心。在上清中加入一定量的的内标和标系，涡流混匀进

5、样。与QC比较峰面积。基质效应（ME）：加入内标和标系，加入水（代替空白基质），然后沉淀试剂，涡流，进样。与上述RE比较峰面积。13、 沉淀蛋白以后，进LC-MS分析，出现哪些情况，需要考虑将上清液稀释？答：有溶剂效应，峰型不好；响应高，最高点可能会导致系统饱和；基线高，基质效应大（前提是信号响应够）。14、 如果外标响应很高，沉淀蛋白后，响应特别低，怎样判断是共沉淀还是基质效应导致的？答：沉淀空白基质，在上清中加入内标和标系，看响应，如果响应高，那证明是共沉淀，如果仍没有响应，说明是基质效应的影响。15、 二氯甲烷反提的原理是什么？答：二氯甲烷与乙腈的溶解能力比水强，能将乙腈完全从水相中提取出来。二氯甲烷将乙腈提取出来，药物留在上层水相，相当于浓缩。甲醇在二氯甲烷和水中都有一定的溶解，所以反提一般不用甲醇。16、 二氯甲烷反提时，二氯甲烷的量怎么确定？水相在上层还是下层？答：乙腈：二氯甲烷的比例1:3左右。水相在上层。17、 什么药物适合用二氯甲烷反提？答：一些极性大的，在水相的溶解性强的药物。18、 简述二氯甲烷反提的操作流程。答：血浆样品室温解冻后，涡流混匀后，精密取内标、血浆样品、乙腈，混匀，离心。取上清加入二氯甲烷，涡流混合，离心，取上层水相进样。19、 影响沉淀效率的因素有哪些？答：沉淀试剂的选择，沉淀