生物化学问答题

1、1简述分子筛层析的基本原理答：分子筛层析基本原理：凝胶是一种多孔性的不带表面电荷的物质，当带有多种成分的样品溶液在凝胶内运动时，由于它们的分子量不同而表现出速度的快慢，在缓冲液洗脱时，分子量大的物质不能进入凝胶孔内，而在凝胶间几乎是垂直的向下运动，而分子量小的物质则进入凝胶孔内进行“绕道”运行，这样就可以按分子量的大小，先后流出凝胶柱，达到分离的目的。2、一种纯酶含亮氨酸1.65%,含异亮氨酸2.48%，亮氨酸、异亮氨酸的分子量均为131，求最低相对分子量。答：1.6 5%：2.48%=2：3这种纯酶中含2个亮氨酸，3个异亮氨酸。所以(131.18x2)1.65%10015900;(131.1

2、7x3)2.48%/x10015900所以最低相对分子质量为15900。 3、已知某蛋白质有两条肽链组成：能否设计一个试验，用来判断两条肽链之间是以共价键相连的，还是以的非共价键相连。答：加入蛋白质变性剂，比如SDS，然后再用聚丙烯酰胺凝胶跑电泳即可。如果加入变性剂后，电泳条带是2个，就说明两条肽链之间非共价键连接；如果电泳条带是一个，说明两条肽链是非共价键连接。4、一个未知的8肽氨基酸组成为：K2、D、Y、F、G、s、A，此8肽与FDNB反应，酸水解后释放出DNP-A；用胰蛋白酶水解该8肽，得到两个三肽和一个二肽，其两个三肽氨基酸组成分别为K、A、S和G、F、K。 用糜蛋白酶水解该8肽，释放

3、出游离的D和一个四肽和一个三肽，四肽的氨基酸组成是K、S、F、A， 三肽与FDNB反应后；酸水解后释放出DNP-G。根据上述结果分析，写出该8肽的氨基酸序列并说明理由。答：DNS-Ala试剂确定N端第一个氮基酸Ala。胰蛋白酶切割左边精、赖氨酸位点，糜蛋白酶切割左边phe、trp、tyr位点。糜蛋白酶水解产生游离的ASP确定八肽C端-phe-ASP顺序。产物四肽含有phe，phe一定在四肽的C末端确定了，胰蛋白酶水解产物Lys，Ala, Ser,显然Lys一定在C末端，这三肽顺序就确定Ala-Ser-Lys，又由于四肽包含了三肽Lys，Ala, Ser。显然四肽顺序为Ala-Ser-Lys-T

4、yr。现在只剩下2个氨基酸顺序没确定，又胰蛋白酶另一个水解三肽为Gly, Phe, Lys,二这个三肽中的Phe又是必定和ASP相连，Gly和Lys被两个phe夹着，要保证胰蛋白酶水解3,3,2的结果，故八肽顺序为Ala-Ser-Lys-Tyr-Gly-Lys-Phe-Asp。 5、在下列指出条件下，下列蛋白质在电场中向哪个方向移动？人血清蛋白：pH=5.5，pH=3；血红蛋白：pH= 7.07,pH=9.O；胸腺组蛋白：pH=5.0，pH=8.0，pH=lI.5。已知人血清蛋白等电点4.64，血红蛋白蛋白等电点7.07，胸腺组蛋白等电点10.8。 答：人血清蛋白的pH=4.64，在pH=5.

5、5的电场中带负电荷，向阳极移动；pH=3.5的电场中带正电荷，向阴极移动。血红蛋白的pI=7.07，在pH=7.07不带电荷，在电场中不移动；在pH=9.0是带负电荷，向阳极移动动。胸腺组蛋白的pI=10.8，在pH=5.0和pH=8.0时带正电荷，向阴极移动；在pH=1.5时带负电荷，在电场中向阳极移动。6、用胰蛋白酶处理蛋白献得一个7肽，该7肽经盐酸完全水解后获得Met、Thr、Phe、Ala、Pro、Lys各1mol，该7肽与DNFB反应后经盐水解不能得到任何-DNP-氨基酸。该肽用CNBr处理得到一个4肽和一个3肽，4肽经盐酸水解后得到Met、Phe和Thr。该7肽经胰蛋白酶处理也得到

6、一个3肽和一个4肽，4肽氨基酸组成是Ala、Met、Pro和Lys。该7肽经胰蛋白酶处理得到一个6肽和一个游离丙氨酸。根据上述信息确定该7肽的氨基酸序列。答：NH2-tyr-phe-asp-met-gly-arg-phe-COOH 解析：首先，FDNB技术来确定分子的N端肽，因此这种多肽酪氨酸分子的N端，胰蛋白酶在酸性条件下水解多肽的羧基端有Asp，因为Tyr, Phe和Asp为3肽，则第一个3肽:NH2-tyr-phe-asp。然后经糜蛋白酶处理后的多肽羧基链，最后两个-arg-phe-COOH残留。然后，只剩下Met和Gly不确定。又因为arg，phe，gly连在一块，则可以确定第四个是M

7、et，第五个是Gly,所以最后的序列：NH2-tyr-phe-asp-met-gly-arg-phe-COOH8、人肠杆菌基因编码链的序列是：5-CAATGTATGGTAGTTCATTATCCCGGGCGCAAATAACAAACCCGGGTTTC-3,写出该綦因的无义链的序列及它编码的mRNA的序列。预测它能够编码多少个氨基酸的成熟肽。标出该基因上对紫外线高敏感的位点。答: (1)紫外线敏感位点是有两个嘧啶（C或T）相邻时，容易在紫外线下形成嘧啶二聚体。因此有两个相邻嘧啶存在的部位是紫外线敏感的。无意链：5 GAAACCCGGGTTTGTTATTTGCGCCCGGGATAATGAACTACCA

8、TACATTGT 3RNA链：5 ACAAUGUAUGGUAGUUCAUUAUCCCGGGCGCAAAUAACAAACCCGGGUUUC 3 (2) 51/3=17个，（第一读码框）其他两个读码框能读出15个氨基酸。(3)参照1。TC、TT、TCCC这三个是敏感位点。容易形成嘧啶二聚体。9、简述血糖的来源与去路，人体如何维持血糖水平的恒定？答：9答：(1)血糖的来源：食物淀粉的消化吸收，为血糖的主要来源；贮存的肝糖原分解，是空腹时血糖的主要来源：非糖物质如甘油、乳酸、大多数氨基酸等通过糖异生转变而来。(2)血糖的去路：糖的氧化分解供能，是糖的主要去路：在肝、肌肉等组织合成糖原，是糖的贮存形式；

9、转变为非糖物质，如脂肪、非必需氨基酸等；转变成其他糖类及衍生物如核糖、糖蛋白等；血糖过高时可由尿排出。(3)人体血糖水平的稳定：主要要靠胰岛素、胰高血糖素、肾上腺素等激素来调节。血糖水平低时，刺激胰高皿糖素、肾上腺桑的分泌，促进糖原分解和糖异生作用、抑制葡萄糖的氧化分解，使血糖水平升高。当血糖水平较高时，刺激胰岛素分泌，促进糖原合成、抑制糖异生作用，加快葡萄糖的氧化分解，从而使血糖水平下降。10、生物膜流动镶嵌模型的主要论点是什么？答：1、磷脂双分子层构成膜的基本骨架。2、蛋白质分子覆盖、嵌入、贯穿磷脂双分子层。3、磷脂分子和蛋白质分子大多是运动的。11、假定你从一个新发现的病毒中提取了核酸，

10、请用最简单的方法确定：1、它是DNA还是单链还是双链结构？答：紫外吸收法，A260/A280，纯DNA1.8,纯RNA=2.0(或单链DNA)，这样先知道是不是双链DNA，如果不是，就进行地衣酚反应，是RNA则呈鲜绿色，否则就是单链DNA。12、蛋白质变性和核酸变性各有何特点？答：蛋白质变性足空问结构的变化，但是核酸变性是双螺旋结构被破坏，双链解开，但共价键并未断裂的现象，另外蛋白质变性比核酸变性容易，蛋白质变性不可逆，核酸变性可逆。 蛋白质变性：溶解度减小（因为本来外面的亲水基团可能会被隐藏，而本来疏水的在里面的会出来），粘度增加（因为山球状变为松散），空间结构改变，生物活性丧失，易被蛋白酶

11、水解。核酸变性：生物学活性丧失，粘度减小（由线状变为团状），增色效应（因为能引起紫外吸收的碱基本来在里面，现在因为变性暴露出来），如果说他们主要区别的话，应该就是形状，一个轴径比变大，而核酸则由轴径比大变为小。13、如何解释酶活性与pH的关系，假如其最大活性在pH=4或者pH=11时，酶活性可能涉及哪些侧链？ 答：.绝大多数酶的最适宜ph都在7左右，过高过低都会失活，大概能够保持活性的范围在5-9，而胃蛋白酶比较特别，它失活的ph为6以上；羧基和氨基，羧基在酸性环境下浓度较大，氨基在碱性环境下浓度较大。14、简述酶作为生物催化剂与一般化学催化剂的共性及其个性。答：共性：(1)用量少而催化效率高

12、(2)仅能改变化学反应的速度，不改变化学反应的平衡点，酶本身在化学反应前后也不改变(3)可降低化学反应的活化能。个性：(1)催化效率极高 (2)具有高度的专一 (3)酶易失活(4)酶活力可以进行及时有效的调节 (5)酶的作用条件较为温和(6)大多数酶的催化活力往往与辅酶、辅基或金属离子有关，有些酶活力还需要RNA作为辅助因子才行，如端粒酶等。15、简述酶活性部位的概念。可使用哪些主要方法研究酶的活性中心?答：酶分子中能够直接与底物分子结合，并催化底物化学反应的部位，这一部位就成为酶的活性中心。一般认为活性中心主要由两个功能部位组成：第一个是结合部位，酶的底物靠此部位结合到酶分子上；第二个是催化

13、部位，底物的键在此被打断或形成新的键从而发生一定的化学变化。组成功能部位的是酶分子中在三维结构上比较靠近的少数几个氨基酸残基或是这些残基上的某些基团，它们在一级结构上可能相距甚远，甚至位于不同肽链上，而是通过肽链的盘绕、折叠在空间构象上相互靠近；对于需要辅酶的酶来说，辅酶分子或辅酶分子的某一部分结构也是功能部位的组成部分。对ES和EI的X一射线晶体分析，NMR分析、对特定基团的化学修饰、使用特异性的抑制剂和对酶作用的动力学研究等方法可用于研究酶的活性中心。 16、简要说明汁油彻底氧化成CO2。和H2O的过程，并计算1摩尔甘油彻底氧化成C02和H2O净生成多少摩尔的ATP? 答：甘油 + ATP

14、-磷酸甘油 + ADP；-磷酸甘油 + NAD+ NADH?H+ + 磷酸二羟丙酮；磷酸二羟丙酮甘油醛-3-磷酸；甘油醛-3-磷酸 + NAD+ Pi甘油酸1,3-二磷酸 + NADH?H+；甘油酸1,3-二磷酸 + ADP甘油酸-3-磷酸 + ATP；甘油酸-3-磷酸甘油酸-2-磷酸磷酸稀醇式丙酮酸；磷酸稀醇式丙酮酸+ ADP 丙酮酸 + ATP；丙酮酸 + NAD+乙酰辅酶A + NADH?H+ + CO2；然后进入乙酰辅酶A三羧酸循环彻底氧化，经过4次脱氢反应生成3摩尔NADH?H+、1摩尔FADH2、以及2摩尔CO2，并发生一次底物水平磷 酸化，生成1摩尔GTP。依据生物氧化时每1摩尔

15、NADH?H+和1摩尔FADH2 分别生成2.5摩尔、1.5，1摩尔甘油彻底氧化成CO2和H2O生成ATP摩尔数为62.511.531=18.517、什么是糖异生作用？糖异生过程的原料是什么？简述其生理意义。答：A糖异生作用：由简单的非糖前体转变为糖的过程。B糖异生的原料是一些非糖物质：乳酸，丙酮酸，生糖氨基酸，甘油，脂肪酸等物质。C生理意义：(1)空腹或饥饿时利用非糖化合物异生成葡萄糖，以维持血糖水平恒定。(2)糖异生是肝脏补充或恢复糖原储备的重要途径。(3)调节酸碱平衡。 18、为什么说葡萄糖-6-磷酸是各个糖代谢途径的交叉点？答：各个糖代谢（分解代谢与合成代谢），它们的代谢途径中都会出现

16、6-磷酸葡萄糖这个中间代谢物。所以是6-磷酸葡萄糖把各个代谢途径连接了起来。各种糖类的分解，最终必须要转变为6-磷酸葡萄糖，才能进行糖酵解极其后续的三羧酸循环。各种糖类的合成，也是以6-磷酸葡萄糖为最开始的底物或中间底物，经过多个步骤，最终形成各种糖类的。 19、简述血糖的来源和去路。人体如何维持血糖水平的恒定？（与9相同） 答：见9题20、DNA是以什么底物聚合而成的？所有己知的DNA聚合酶有哪些共同特性？ 答：以核苷酸为底物聚合而成的。A需要DNA模板，因此这类酶又称为依赖DNA的DNA聚合酶(DDDP)。B需要RNA或DNA作为引物，即DNA聚合酶不能从头催化DNA的起始C催化dNTP加到引物的3一OH末端，因而DNA合成的方向是5一3。21、简述参与DNA复制的各种酶与蛋白质的作用。答；第一阶段，亲代DNA分子超螺旋的构象变化及双螺旋的解链，将复制的模板展现出来。主要为拓扑异构酶、解旋酶及单链结合蛋白等拓扑异构酶：解开DNA双链的超螺旋解旋酶，解开DNA双螺旋结构单链结合蛋白，解旋后防止DNA再次形成双链。第二阶段为复制的引发阶段，有引物RNA进行53方向的合成。第三阶段为DNA链的延长，在引物RNA合成基础上，进行DNA链的53