血常规基础培训

第一部分血液学基础一、血液的功能和组成1血液的功能机体各组织器官营养成分和代谢产物的载体。人体所需水分、氧及排出二氧化碳的载体。参与人体免疫功能，防止疾病侵袭。2血液的组成血浆血清血小板白细胞血饼红细胞加入抗凝剂，离心，血液自然凝固静置30分钟后的情况血液由有形成分血细胞等和血浆组成。血清血液自然凝固，除去固体部分血饼后所获得的液体部分。血浆血液经抗凝处理，在离心作用后获得的清液部分。除血清所含成分外，还包括蛋白质、凝固因子等成分。血清血浆蛋白质血液凝固因子红细胞血饼有形成分白细胞血小板其他有形成分3血液细胞构成红细胞血液细胞白细胞血小板淋巴细胞单核细胞白细胞嗜中性粒细胞粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞1红细胞形态和功能78UM08UM22UM红细胞模型图扁圆状结构，中央凹陷，细胞内无核、柔软，可进入比本身直径更小的毛细血管，平均直径78M。内含血红蛋白，富含铁元素，容易氧化。负责将氧气输送致全身，并将二氧化碳收集至肺部排出。红细胞的成熟红系原红细胞早幼中幼晚幼网织成熟祖细胞红细胞红细胞红细胞红细胞红细胞正常情况下，红细胞起源于骨髓中红系祖细胞，后者在促红细胞生成素的作用下，分化为原红细胞，经数次有丝分裂而依次发育为早幼、中幼、晚幼红细胞，后者已丧失分裂能力通过脱核而成为网织红细胞进入外周血。由网织红细胞再发育成为完全成熟的红细胞。从早幼红细胞开始，已能利用铁蛋白和原卟啉合成血红素，后者再与珠蛋白肽链结合而成为血红蛋白，幼红细胞越趋向成熟，合成的血红蛋白越多，直到网织红细胞阶段仍能合成少量血红蛋白。一般外周血中网织红细胞的含量不超过1，网织红细胞中仍残留有RNA，由此可通过流式细胞检测技术进行检测。网织红细胞越成熟，DNA含量越低，由此可计算出网织红细胞成熟程度。2白细胞白细胞的分类小型白细胞淋巴细胞二分类大型白细胞其他白细胞小型白细胞淋巴细胞三分类中型白细胞单核细胞、嗜酸性、嗜碱性粒细胞大型白细胞嗜中性粒细胞淋巴细胞单核细胞五分类嗜中性粒细胞粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞形状和功能球状结构，细胞内有核，直径715M。产生人体免疫机能，直接攻击外来细菌或产生抗原抗体反应。单核细胞情报通信侦察T型淋巴细胞细胞性免疫B型淋巴细胞体液性免疫直接攻击产生病源体包围抗体嗜酸性粒细胞协助产生抗体。3血小板血液中的有形成分，体积较小，参与凝血和止血。4血液检测的意义和检验学科的分类在生理情况下，人体内血液各种成分的质和量，反映了机体正常新陈代谢和内外环境的平衡。在病理情况下，血液成分质和量的变化，除了反映造血系统的病变以外，还能直接或间接地提示全身或局部组织器官的病变。生物化学和免疫学检验主要检验血浆中的成分。血液学检验主要检验与临床止血和凝血相关的各种血小板因子、凝血因子、血管因子等项目。血液一般检验主要检验血液中有形成分的质和量。5血液一般检验的方法传统方法以手工操作、普通光学显微镜、计数板等简单器材为主要检测手段。现代方法以血液自动分析仪为主要标志。随着细胞化学、组织化学、位相显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、同位素示踪技术、单克隆抗体等现代技术的运用，血液学研究不断得到新的发展。到20世纪90年代，综合光学、电学、细胞化学原理的血液分析仪代表了当今血液一般检验技术的发展趋势。、血液一般检验的目的和内容1血液一般检验的目的以现代血液学理论为基础，以常用的实验方法为手段，联系临床实际，为临床疾病的初步诊断和疗效观察提供客观依据。2血液一般检验的内容对血液中的有形成分和血液细胞的数量、质量和外观形态进行检测。3血液一般检验的检测项目1白细胞检测WBCWHITEBLOODCELLCOUNT白细胞计数单位体积全血白细胞数，103/L或109/L。LYMLYMPHOCYTECONCENTRATION淋巴细胞占白细胞百分率。LYMLYMPHOCYTECOUNT淋巴细胞计数单位体积全血淋巴细胞数，103/L或109/L。MONOMONOCYTECONCENTRATION单核细胞中间细胞MID占白细胞百分率。MONOMONOCYTECOUNT单核细胞中间细胞MID计数单位体积全血单核细胞数，103/L或109/L。GRANGRANULOCYTECONCENTRATION粒细胞占白细胞的百分率。GRANGRANULOCYTECOUNT粒细胞计数单位体积全血粒细胞数，103/L或109/L。NEUNEUTROPHILCONCENTRATION嗜中性粒细胞占白细胞百分率。NEUNEUTROPHILCOUNT嗜中性粒细胞计数单位体积全血嗜中粒细胞数，103/L或109/L。EOSEOSINOPHILCONCENTRATION嗜酸性粒细胞占白细胞的百分率。EOSEOSINOPHILCOUNT嗜酸性粒细胞计数单位体积全血嗜酸粒细胞数，103/L或109/L。BASOBASOPHILCONCENTRATION嗜碱性粒细胞占白细胞的百分率。BASOBASOPHILCOUNT嗜碱性粒细胞计数单位体积全血嗜碱粒细胞数，103/L或109/L。2红细胞检测RBCREDBLOODCELLCOUNT红细胞计数单位体积全血红细胞数106/L或1012/L。HGBHEMOGLOBINCONCENTRATION血红蛋白单位体积全血血红蛋白浓度G/L。HCTHEMATOCRIT或PCVPACKEDCELLVOLUME红细胞比积全血红细胞相对容积比。MCVMEANCORPUSCULARVOLUME红细胞平均容积全血单个红细胞的平均比积FL11015升。MCHMEANCORPUSCULARHEMOGLOBIN红细胞平均血红蛋白浓度单个红细胞平均血红蛋白含量，PG11012克。MCHCMEANCORPUSCULARHEMOGLOBINCONCENTRATION平均红细胞血红蛋白浓度G/L。RDWREDBLOODCELLVOLUMEDISTRIBUTIONWIDTH红细胞体积分布宽度。RDWCVRDWCOEFFICIENTOFVARIATION红细胞体积分布宽度变异系数。RDWSDRDWSTANDARDDEVIATION红细胞体积分布宽度标准偏差FL。HDWHEMOGLOBINDISTRIBUTIONWIDTH红细胞血红蛋白分布宽度。3血小板检测PLTPLATELETCOUNT血小板计数单位体积全血血小板数，103/L或109/L。MPVMEANPLATELETVOLUME平均血小板体积全血血小板平均体积，FL11015升。PCTPLATELETOCRIT血小板压积血小板相对容积L/L或。PDWPLATELETVOLUMEDISTRIBUTIONWIDTH血小板体积分布宽度；PLCRPLATELETLARGECELLRATIO大血小板比率体积12FL的血小板比率。4网织红细胞检测RETRETICULOCYTECOUNT网织红细胞计数单位体积血液中网织红细胞的数量，104/L或1010/L；RETRETICULOCYTECONCENTRATION网织红细胞百分率网织红细胞占成熟红细胞的百分率；MRV或MCVRMEANRETICULOCYTEVOLUME网织红细胞平均体积；HFRHIGHFLUORESCENTRETICULOCYTECONCENTRATION高荧光率网织红细胞占网织红细胞的百分率；MFRMIDDLEFLUORESCENTRETICULOCYTECONCENTRATION中荧光率网织红细胞占网织红细胞的百分率；LFRLOWFLUORESCENTRETICULOCYTECONCENTRATION低荧光率网织红细胞占网织红细胞的百分率；RMIRETICULOCYTEMATURATIONINDEX网织红细胞成熟度指数高荧光率网织红细胞与中荧光率网织红细胞之和与低荧光强度网织红细胞的比值；RMIHFRMFR/LFR100RPIRETICULOCYTEPROOFREADINGINDEX网织红细胞成熟校正指数RPIRETHCT/0451/1045HCTRDWRRETICULOCYTEDISTRIBUTIONWIDTH网织红细胞分布宽度；HCRRETICULOCYTEHEMOGLOBINCONCENTRATION网织红细胞血红蛋白浓度；MCHCRRETICULOCYTEMEANCORPUSCULARHEMOGLOBINCONCENTRATION网织红细胞平均血红蛋白浓度；HDWRRETICULOCYTEHEMOGLOBINDISTRIBUTIONWIDTH网织红细胞血红蛋白分布宽度；MOXIMEANPEROXIDASEINDEX平均过氧化物酶活性指数；LIIOBULARITYINDEX分页核指数。4血液分析项目参考值及临床意义1白细胞检测项目单位参考值临床意义WBC109/L45110增加生理性新生儿、妊娠末期、分娩期、饭后等。病理性大部分化脓性细菌所引起的炎症、尿毒症、严重烧伤、传染性单核细胞增多症、白血病、急性出血、组织损伤等。LYM2040增加百日咳、传染性单核细胞增多症、腮腺LYM109/L1540炎、结核、传染性肝炎等。减少多见于传染性疾病的急性期、放射病、细胞免疫缺陷等。MONO410增加结核、伤寒、亚急性心内膜炎、疟疾、MONO109/L0208单核细胞白血病、急性感染恢复期等。NEU5462增加急性化脓性感染、粒细胞性白血病、急NEU109/L27性出血、溶血、手术后、尿毒症、酸中毒、急性汞和铅中毒等。减少伤寒、副伤寒、疟疾、流感、化学药物、X射线和镭照射、化疗、再生障碍性贫血、粒细胞缺乏症等。EOS13增加变态反应、寄生虫病、某些皮肤病、手EOS109/L0045术后、烧伤等。减少伤寒、副伤寒、应用肾上腺皮质激素后等。BASO01增加慢性粒细胞性白血病、嗜碱性粒细胞白BASO109/L002血病、何杰金病、癌转移、铅中毒等。2红细胞检测项目单位参考值临床意义RBC1012/L男性4358增加生理性新生儿、高原居住者。女性3853病理性真性红细胞增多症等。减少各种贫血、白血病、各种急慢性失血等。HGBG/L男性126174临床意义见红细胞计数。一般情况下血女性117161红蛋白浓度与红细胞数有一定的比例关系，二者对贫血诊断有帮助。HCTL/L男性037051增加大面积烧伤、体外循环脱水等。女性035047减少各类贫血时随红细胞的减少而有不同程度的降低。MCVFL80100MCHPG2735临床意义见贫血形态学分类MCHCG/L310370RDWCV116140是反映红细胞大小的客观指标，增加RDWSDFL390460见于缺铁性贫血、营养不良性贫血。贫血的形态学分类1WINTROBE分类法分类依据MCV、MCH、MCHC这三个参数是否正常为依据。类型MCV80100MCH2735MCHC310370常见疾病大细胞性贫血10035310370巨幼细胞贫血、非巨幼细胞性大细胞贫血正常细胞性贫血801002735310370急性失血性贫血、溶血性贫血、症状性贫血、再生障碍性贫血单纯小细胞性贫血50个/小时故障率因仪器自身因素发生堵孔2，电路部分，真空系统，管路系统，机械部分等故障率很低，耐用性强并有自身诊断功能数据库病人样本储存100个以上，最好能进行简单的统计处理，报告打印方式可选择质控质控文件应大于5个，一般采用XB质控并显示LEVERYJENNINGS图形检测参数检测参数在15个以上，白细胞三分类以上并至少能显示、打印WBC、RBC、PLT等三种以上的直方图抗干扰能力抗干扰能力强，环境适应能力强售后服务销售商有较强的营销、技术服务、维修能力2用户情况大型医院高档次、白细胞五分类的仪器较符合这类医院的情况，三级以上有的用户甚至要求仪器具有网织红细胞、巨幼细胞等检测功能。中型医院高质量的白细胞三分类仪器较符合这类医院的要求。小型医院普及型仪器可以满足这类医院的需要。对医院情况的了解还应包括医院的床位数、门诊量、现有仪器的情况以及医院的经济能力等。七、血液细胞分析仪的种类和规格血液分析仪种类繁多。根据细胞计数原理大致可分为电阻抗法；光散射法；电阻抗激光法；电阻抗射频法；电阻抗激光射频组织化学法。根据白细胞分类可分为无白细胞分类；白细胞两分类；白细胞三分类；白细胞五分类。在我国，有不少医院已经使用了相当先进的仪器进行血液一般检测。到目前为止，有各种型号、各种档次共二十多个系列的血液分析仪正在临床使用之中。血液细胞分析仪的最新应用一、概述血液分析仪从面世至今已经有50年的历史了。在我国，各种型号的血液分析仪广泛应用于医院检验科之中。血液分析仪的功能，主要包括血细胞计数和分类,网织红细胞计数等内容。随着现代物理学、化学、生物学及电子技术不断发展并应用于细胞分析，结合计算机技术、自动化控制技术，现代血液分析仪在性能、准确性及适用性方面均取得了长足的进步。各大血液分析仪制造商均投入大量的资金和技术力量,开发更先进,多功能的血液分析仪，而立足点主要集中在正常标本的准确性、异常标本检出灵敏度以及准确定量、分析自动化及环保安全、数据处理与联网输出等方面。血液分析仪按照试剂添加的方法可分为半自动和全自动两种。而实际工作中，人们更多地是按照白细胞分类将血液分析仪分为不分类、二分群（大细胞、小细胞群）、三分群（大、中、小细胞群）和五分类（淋巴、单核、嗜中性、嗜酸性、嗜碱性细胞）。一般来说，不分类和二分群仪器多为半自动，而三分群和五分类仪器则多为全自动。半自动二分群全自动三分群全自动五分类幼稚、异常标本测定基本原物理原理化学原理化学原理理电阻抗电阻抗电阻抗激光散射光射频（高频波）特异性溶血酶/颗粒染色核酸染色检测信号细胞体积细胞体积细胞体积细胞体积和内部结构内部结构排除干扰增强特异性核酸DNA/RNA染色WBC大小分群WBC大中小分群WBC五分类EO/BASOEO/5DIFF幼稚白细胞RBCRBCRBCRETNRBC测量项目PLTPLTPLT异常PLT（PLT凝集、巨大PLT、细胞碎片）在50年代初，美国的WHCOULTER先生发明了粒子计数的专利技术，即根据血细胞的非传导性以对电解质溶液中细胞颗粒通过计数小孔时所测的电阻变化来反应细胞的大小，被称为电阻抗原理或库尔特原理。自此，血细胞计数通过该原理的应用而实现了自动化，并在此后的几十年间血液分析仪的均以此作为核心检测原理。时至今天，市场上在供应和使用的所有半自动、全自动三分群血液分析仪检测红细胞、血小板、白细胞分群均按照电阻抗原理通过细胞大小来区分并计数。当然，不同仪器在自动化程度、参数、定量计数、检测速度等方面均有不同以适应不同实验室的实际需求。除了半自动和全自动之分以外，不分类仪器可提供78项参数，而半自动二分群仪器可提供15项参数，全自动三分群仪器更可提供1819项参数及WBC、RBC、PLT三个直方图和各种报警信息。在分血定量技术上，一般大型、快速的三分群仪器均采用精确耐磨、取中段血的旋转阀分血，如SYSMEXK4500、KX21N、ABBOTTCD1700等；而小型仪器多采用小血量的注射器或蠕动泵分血，如BECKMANCOULTERACTDIFF2、SYSMEXPOCH100I、ABXMICROS60等。检测速度方面，适合小标本量实验室的仪器，如SYSMEXPOCH100I、ABBOTTCD1200每小时检测约2530个标本，而市场上速度最快的三分群仪器SYSMEXK4500每小时可达80个标本，且可配置自动进样装置以满足大标本量实验室的需求。此外，为了满足实验室对操作方便性的要求，国产的迈瑞BC2000、日本SYSMEX的POCH100I、KX21N均可以实现全中文操作，使得操作人员更加方便地操作使用仪器。由于人体白细胞一共5种，即淋巴、单核、嗜中性、嗜酸性、嗜碱性，二分群和三分群均是以细胞大小作为区分的标准。正常人群情况下，嗜中性细胞和淋巴细胞最多且相差较大（其它三种相加也不超过10），二分群即以此相分。而三分群是通过溶血素的脱核作用使细胞体积缩小，由此使单核细胞体积落在淋巴和嗜中性细胞之间，即俗称的“三分类”。这种以细胞大小区分白细胞的方法并不精确，嗜酸性细胞和嗜碱性细胞在大细胞群中不能准确区分。SYSMEX公司的三分群仪器通过特殊的溶血素作用使其相对缩小而分入中间群细胞中，比起其他仪器在一定程度上提高了嗜酸性、嗜碱性细胞异常时的直方图图形鉴别灵敏程度，但是还不能根本解决。而且，中间群细胞中往往混有异型淋巴和幼稚粒细胞，使得实验室必须对报警的标本保持相当高复检率，否则即可能造成漏诊。为了精确定量地检测白细胞的五种成分，各种五分类血液分析仪开始采用不同于三分群仪器的检测原理以探明除了细胞体积大小以外的信息，如形态、内容物含量、密度等，从而能够取得准确的分类结果。这些新的分类原理，主要包括物理学原理、化学原理和细胞生物学原理。在物理学原理中，除了电阻抗原理之外，用的最多的是光散射技术，以及高频波技术（也有称射频波）。BECKMANCOULTER公司通过以上各种物理方法的综合运用来检测白细胞五项分类，称为VCSO技术（VOLUNE，CONDUCTIVITY，SCATTER,OPACITY）。而ABBOTT公司则除了采用电阻抗原理检测白细胞总数以外，还通过不同角度的散射光技术对五项分类进行检测，称为多角度偏振光散射分类（MAPSS）技术。而SYSMEX公司在采用电阻抗原理、射频技术、光散射技术以外，为了提高在白细胞中比例最小的嗜碱性细胞的分类准确性，在白细胞分类检测通道以外还单独设置了嗜碱性细胞检测通道，通过特异性的化学溶解方法只保留嗜碱性细胞，再通过不同角度的光散射法检测。对于另外一种比例很小的嗜酸性细胞，还在分类通道中加入细胞颗粒染色以提高光散射信号的辨识能力。BAYER公司在五分类仪器中，除了光散射法以外，也加入了过氧化物酶染色技术进行细胞分类，对于嗜碱性细胞也设置了单独的检测通道和特殊溶解技术。对于正常五项分类结果准确性，各大血液分析仪厂家关注的焦点主要是数目最少的嗜酸性和嗜碱性细胞。此外，对于外周血中的幼稚成份，过去还依赖于显微镜镜检。然而，一般血液分析仪对异常标本报警的灵敏度有限，常常造成漏报。或者为了减少这种情况而提高阳性报警率（通过降低仪器报警的阈值），提高了复片的比例从而造成假阳性率偏高，失去了过筛的意义。甚至在实际工作中，由于人手不足或责任心不强，对于一些阳性报警的标本没有认真复片，或限于经验的不足无法准确进行细胞形态学的观察造成漏诊。鉴于以上这些问题，近年来有制造商开始致力于通过化学染色方法对幼稚成份的标本进行自动化检测，这相对于一般的阳性报警（即提供一种可能性）要进步了很多。对于红细胞系统，各大厂家都有仪器进行网织红细胞检测，提供定量的参数甚而可以对其成熟度作进一步的分类。但是，网织红检测功能也有半自动和全自动之分，即标本需要手工添加染色试剂处理后上机或是直接通过仪器染色检测。对于更幼稚的红细胞系统，有核红细胞，目前也有仪器通过核酸染色进行检测。如SYSMEXXE2100,ABBOTTCD4000。在白细胞中，幼稚成份根据形态学的不同包括原始细胞、核左移细胞、幼稚粒细胞、异常/异型淋巴等。SYSMEXXE2100通过单独的幼稚细胞检测通道并采用特异性的化学溶解法保留幼稚细胞，破坏其他细胞，再通过射频技术、电阻抗原理进行检测，各种幼稚白细胞的检测灵敏度大大提高。而在分类通道中，核酸荧光染色的应用使幼稚粒细胞的定量测定成为现实。BAYERADVIA120则通过过氧化物酶染色技术可以区分出大的未染色细胞（主要为原始、异淋细胞）。尽管技术的进步使血液分析仪检测的参数越来越多，对异常标本的检测、报警能力也越来越强，但是所有制造商仍然宣称仪器在实验室内起的是过筛作用，仪器提供各种报警信息（FLAG）供操作人员镜检复核。能否有效检测包括幼稚细胞在内的所有细胞，是今后血液分析仪的一个发展方向。血液分析仪发展的另一个趋势是面对大型实验室和小型实验室的不同需求来发展。针对大型医院，仪器的处理速度可超过100个标本/小时，配备自动进样装置，且可以实现不同检测模式的标本（如CBC、CBCDIFF、RET等）之间仍选进样，如SYSMEXXE2100每小时可以处理150个标本，BAYERADVIA120每小时处理120个标本，BECKMANCOULTERLH750每小时处理105个标本。这些大型的血液分析仪，都可以配置自动推片染色装置以实现玻片制备和标本染色的全过程自动化。而试验室网络化管理的发展，也要求这些血液分析仪具备数据输出联网的功能，他们的数据操作系统一般均为WINDOWNT或2000平台。反之，针对小型医院血液分析自动化的需求，也有小型化的仪器面世。ABXPENTRA60是每小时处理60个标本的五分类仪器，适合于我国县级基层医院的需求。SYSMEX新推出的POCH100I三分类仪器速度约28个/小时，但是具备鞘流技术、中文显示、数据联网等功能，可以为基层医院或临床科室床边诊断所有。综上所述，随着血液分析仪的不断发展，新仪器不断叠现，实验室工作人员有必要了解掌握血液分析仪的基本分析技术和原理，提高血液分析仪在临床试验室诊断中的应用水平，更好地为临床第一线服务。二、仪器的分析技术血液分析仪所能检测到的血液学参数，主要为红细胞、血小板、白细胞、血红蛋白，以及通过对红细胞脉冲经计算机计算累计而得来的红细胞压积，以及由此计算得到的MCV、MCH、MCHC。以上8个参数，统称全血细胞计数（COMPLETEBLOODCOUNT），或简称CBC。对于二分群、三分群仪器测得的白细胞参数，再有小细胞、大细胞的数目和百分比，或小、中、大细胞。而五分类仪器则准确定量地提供了白细胞的五项分类参数，包括数目和百分比，也称DIFF。此外，高档血液分析仪还可提供一些幼稚细胞的参数，如网织红细胞数目、百分比及成熟度分类；有核红细胞数目、百分比；幼稚白细胞的一些定量参数等。为了去繁就简地归纳出各种血液分析仪采用的分析技术，本章节为红细胞/血小板系、白细胞系、血红蛋白三部分来阐述。、红细胞、血小板系分析技术、电阻抗原理电阻抗原理是目前血液分析仪采用最广泛的一项分析技术，所有的二分群、三分群仪器检测RBC、PLT、WBC都是以此为基础，而大部分五分类仪器检测RBC、PLT也是如此。1、电阻抗原理解释该方法将细胞视为一种绝缘体，将其悬浮于电解质溶液中，当其通过检测小孔时测得其电阻的变化。一般电阻大小与体积大小是呈正比的，由此便识别出血小板和红细胞。2、以电阻抗原理为基础的改良技术电阻法作为最为普遍接受的分析方法，应用于血液分析仪中。但是，要得到更加精密、准确的红细胞、血小板信息，仍有一个问题需要解决，即细胞重合、回流、偏心通过带来的误差问题。当稀释的血细胞通过检测小孔时，理想的情况是要求各个细胞能够一个一个地经过小孔正中以测得准确的细胞个数。但实际上往往有两个以上的细胞同时通过小孔，这种现象即称为重合。细胞浓度越大，重合的几率越大，由此带来的计数误差也越大。为了修正重合误差，大多数血液分析仪对不同浓度的标本进行检测后绘出仪器本身所固有的重合误差曲线并计算出重合校正公式（或称重叠校正），仪器的电脑会对检测结果进行校正。此外，血细胞经过检测小孔后，有时也会产生回流，尤其是当体积较大的红细胞发生回流时，很容易造成对其后通过小孔的细胞脉冲造成干扰，这种情况尤其对血小板影响较大。一些制造商的仪器中，在红细胞计数小孔内侧安装一块带孔的挡板，其孔径略大于检测孔径，位于检测孔后方感应区之外，检测时细胞通过检测孔后穿过挡板小孔，回流的影响即被挡在挡板之外。这种装置成为VONBEHENS装置。该方法效果较好，但是增加了检测结构的复杂程度并使排堵和维护保养难度增加。另外一种技术称为扫流技术（SWEEPFLOW），应用于BECKMANCOULTER的血液分析仪上。扫流技术是在红细胞计数小孔后面加载一股稳定的液流，使得红细胞在通过小孔后迅速被冲走，从而防止其回流到感应区产生干扰脉冲。对于上述重合、回流、偏心产生的误差，一种比较全面的解决方法是鞘流技术（也有称液路聚焦、水动力聚焦）。该原理是将细胞流用鞘状的不含细胞的鞘流液包裹起来，使其在这种状态下通过检测孔，从根本上防止了重合误差和回流、偏心通过的发生。早在1968年，柏林自由大学的THOM等人利用此物理原理发明了鞘流法。但由于这种方法要求复杂精密的流体回路设计，直到1980年才由SYSMEX公司（当时的名称为TOA）实现鞘流方法的自动化并应用到血液分析仪。鞘流方法除了能够避免上述误差发生以外，鞘流结构本身也使检测部件的保养变得方便，而且大幅度提高了直方图的分辨率，不论是红细胞和血小板之间的鉴别，还是红细胞本身大小的变化，都显示得更加清晰。、二维光散射原理随着激光技术的出现，有仪器开始采用新的检测技术分析红细胞和血小板。通常在光学测定前，首先用低渗透溶液对红细胞、血小板进行球状化的处理。由于细胞内渗透压高于试剂的渗透压，液体透过细胞膜进入其内部，从而使红细胞由原来的双凹圆盘状充盈为球状，然后通过戊二醛固定。通过球形化的处理，细胞经过检测区时不论何方向其光散射的信号都是相同的。光学系统的光源过去一般采用气体激光。如TECHNICONH3采用波长6328NM的红色氦氖激光,ABBOTTCD3700采用氩离子激光。90年代，半导体激光作为一种固体光源开始应用于血液分析中，其在工作寿命、适应范围、环保节能等方面均较气体光源有较大进步，如SYSMEXXE/XT系列、BAYERADVIA120等。以BAYER的五分类仪器为例，当血细胞经过检测区时，光学信号感应器接受低角度（23度）和高角度（515度）的前向散射光信号。根据前向角转换能量大小，可以测量出细胞体积和总数，并由此绘制红细胞和血小板的直方图；而根据激光束散射角，得到单个红细胞血红蛋白浓度并反映血红蛋白浓度的变化情况,得出MCV、MCH、MCHC值。、核酸染色技术通过光学技术，可以在一定程度上改善电阻抗原理仅仅判断细胞体积所带来的局限性，提高了红细胞和血小板的准确性。而现代生物染色技术的发展，使更加特异性的核酸染色法与光学技术结合成为可能。SYSMEXR3500网织红细胞分析仪采用氩离子激光和AURAMINEO（碱性槐黄O）核酸染料，氩离子激光束照射在经过染色的细胞上，激发出荧光信号和前向散射光，分别反映细胞内部核酸多少和外部体积大小。由此绘制的散射图上，可以清晰的分辨出光学红细胞、网织红细胞、血小板的区域。在SYSMEXXE2100血液分析仪上，检测血小板的方法增添到两种。仪器的红细胞和血小板检测通道采用鞘流电阻原理，常规标本即以此为检测手段。当一些特殊标本混有大型血小板或小球性红细胞时，二者之中会有一部分具有相同的体积使电阻法无法准确区分，仪器还可以使用光学染色法检测。此时采用的光源为633NM波长的半导体激光束，染料为PLYMETHINE和OXAZINE。血小板由于体积较小，但颗粒中存在有少量RNA，被染料轻微着色而激发出荧光，此时得到的血小板结果更加可信。、网织红细胞、有核红细胞分析网织红细胞是晚幼红细胞脱核后与成熟红细胞之间的过渡细胞，是反映骨髓造血功能的重要指标。目前用自动分析仪进行网织红细胞分析的技术已经取得很大进展。（1）半自动网织红分析由于五分类血液分析仪的发展，有制造商开始尝试采用其白细胞五分类技术来分析网织红细胞。如BECKMANCOULTERSTKS、HMX，ABBOTTCD3700、3500R等。以库尔特方法为例，首先使用一种漂洗液使红细胞中的血红蛋白溢出成为“影细胞”减少对检测的干扰，然后再加入新亚甲兰染料对网织红内的RNA进行染色。经过预处理后的标本通过仪器VCS（后文详述）原理进行检测。由此法得到的网织红参数准确性较目视法有了很大的进步，但仍然存在着手工误差因素，且费时较长。（2）全自动网织红分析在20世纪80年代初，SYSMEX公司便开发出了专用的激光流式原理检测网织红的仪器，自第一代R1000至近已经发展到大型R3500、小型R500等系列化的仪器。90年代，随着五分类仪器技术日臻发展，出现了内置式的全自动网织红检测功能。一般均采用激光流式原理和细胞化学染色，如SYSMEXXE2100、XT2000、BECKMANCOULTERGENS、BAYERADVIA120、ABBOTTCD4000等，并可以实现不同标本检测CBC、DIFF、RET检测模式。另外一个突破是，除了进行自动的RET数目和百分比计数外，还可以通过核酸染色得到的荧光信号强度区分低、中、高荧光强度的网织红（LFR、MFR、HFR）。由于幼稚的网织红荧光信号较强，MFR和HFR之和即反映未成熟网织红的一个有用参数。此外，还有仪器可以提供网织红平均体积（MCVR）、网织体积分布宽度（RDWR）、网织血红蛋白分布宽度（HDWR）等参数给临床治疗监测提供参考。（3）全自动有核红细胞分析有核红细胞作为幼稚的红细胞在治疗监测和鉴别诊断时有重要临床意义。而且，有核红细胞体积与淋巴细胞相仿或略小，大多数仪器对这样的标本往往会误计，这样不但漏报了病理标本，而且造成白细胞（淋巴细胞）结果假性升高。随着五分类仪器的出现，仪器报警系统开始可以提示其存在的可能性，供操作人员镜检复核。真正采用染色手段来自动化地定量检测有核红细胞的功能，出现在SYSMEXXE2100和ABBOTTCD4000上。以SYSMEXXE2100为例，仪器单独设置检测有核红细胞的通道，特殊的溶血素将红细胞完全破坏，有核红细胞被裸核并收缩，而白细胞被保留。核酸荧光染色POLYMETHINE对标本染色后，白细胞细胞核和胞质内核酸的染色总量远大于同样被染色但被收缩的有核红细胞，通过半导体激光照射后荧光信号和前向散射光信号均有区别。由此准确计得有核红细胞数目及占白细胞的比例。、白细胞系分析技术、白细胞二分群、三分群分析在白细胞二分群、三分群仪器中，电阻抗原理作为基本技术将白细胞按照体积大小分群。电阻抗原理与检测红细胞血小板时基本相同，只是在检测白细胞时，需要加入特殊的溶血素破坏红细胞，以消除其对白细胞的干扰。仪器在提供白细胞分群的结果外，还自动绘制成白细胞体积分布的图形，称为直方图。直方图通过感应区检测到的每个细胞的脉冲累计得到，并根据其脉冲大小所对应的体积大小被分类储存到相应的体积通道上。、白细胞五分类分析由于电阻抗原理的局限性，二分群、三分群仪器都无法准确地检测出淋巴、单核、嗜酸性、嗜碱性、嗜中性细胞。为了能够从细胞体积大小到内部结构全面分析细胞并得到准确的白细胞分类结果，各大厂家自80年代开始采用各项技术联合应用于血液细胞的分析，各种型号的五分类仪器相继问世。总的来说，白细胞五分类技术可以归纳为物理原理（电阻抗、散射光、高频波/射频等）、化学原理（特异性溶血、普通颗粒染色、酶染色、核酸染色）。各制造商一般均采用上述所列的数种技术综合应用于五分类分析。1容量、电导、光散射（VCS）技术BECKMANCOULTER公司（当时的COULTER公司）于1987年开始将VCS技术应用于五分类仪器，并在此后一直以此为核心技术沿用至今，如目前在实验室被使用有STKS、MAXM、HMX等。V（VOLUME）代表体积，即电阻抗原理检测细胞体积大小。C（CONDUCTIVITY）代表电导率，即高频波穿透过细胞时的传导性，检测细胞内部结构如细胞核与细胞浆的比例。S（SCATTER）代表散射光，即气体激光（氦氖）的光束在感应区扫描每一个细胞由此得到的细胞光散射特性，检测细胞内部结构如核分叶情况、核的形态等。此类仪器在一个白细胞检测通道上采用三种物理方法分析细胞，得到的三方面信号综合成三维图像分析。由于两种细胞之间极少会在三方面信号均完全相同，VCS技术便做到了对白细胞的准确分类。在BECKMANCOULTER最新型号的GENS上，VCS技术又在原有的基础上增加了一个信号，即经过校正的传导性OPACITY（不透明性），反映细胞内部核的大小、核和浆的密度及核/浆比。该信号不易被细胞体积所干扰，可以更加准确地区分出异型淋巴和正常淋巴。2多角度偏振光散射白细胞分类技术（MAPSS）ABBOTT公司在检测五分类时，也多采用物理学的原理。与COULTER公司不同的是，在ABBOTTCD3700和CD3200五分类仪器上，气体激光（氩离子）激发出的光束照射在液路聚焦流路内的白细胞上，仪器在四个角度搜集散射光信号O、10、90、90消偏振，分别反映细胞大小、细胞复杂性、细胞内部颗粒和细胞分叶情况、核浆比等。仪器第一步通过1O、90测得单核和多叶核细胞；第二步通过0、10按大小、内部复杂情况不同测得嗜碱、淋巴、单核；90、90消偏振将分叶核细胞区分为中性分叶核和嗜酸性分叶核。此外，CD3700为了消除抵抗性红细胞对白细胞总数的影响，还单独采用了电阻抗方法测白细胞总数，并与散射光的结果相复核以求得更准确的结果。（3）光散射和过氧化物酶染色技术在BAYERADVIA120五分类检测技术中，除了采用光散射信号以外，还加入了过氧化物酶染色的技术以提高分类的准确性。白细胞分类检测通道内，稀释液内加有髓过氧化物酶（MPO）的底物过氧化氢和色原，可使含MPO的细胞胞浆呈现深色沉淀。由于嗜中性细胞MPO为强阳性,嗜酸性细胞更强,单核细胞为弱阳性,淋巴细胞为阴性，嗜碱性细胞亦为阴性（另外检测通道检测）,通过卤素灯光散射和细胞化学染色，得到吸光率（过氧化物酶反应强度）和光散射信号（细胞大小），在散点图上区分出白细胞的分类结果。而在嗜碱性/核叶LOBULARITY通道上，用一种PH值低的表面活性剂溶液,将嗜中性、嗜酸性、淋巴和单核细胞的胞膜溶去,剩下裸核嗜碱性细胞则不受影响被保留，然后通过半导体激光照射,分别由低角度05和高角度515散射光反映细胞大小和细胞的核叶及大小。嗜碱细胞未被溶解,体积大,核叶多,核大,在散点图低角度和高角度散射光均强,可明显与嗜中性细胞PMN、单核MN区分开。（4）核酸染色和半导体激光流式原理最新推出的XE2100、XT2000I/1800I系列仪器上，散射光转而采用侧向信号用以反映细胞内部信息（主要是颗粒的复杂性）。试剂中还增加了特异性针对DNA/RNA染色的荧光染料POLYMETHINE聚次甲基染料。激光照射后产生荧光信号，和侧向散射光一道绘制成二维散点图进行白细胞分类。另外，针对数目最少的嗜碱性细胞，仪器都单独设置检测通道。酸性溶血素把除了嗜碱性细胞以外的白细胞脱核，红细胞被彻底溶解。然后通过前向和侧向散射光检测嗜碱性细胞。白细胞总数也由此通道测得，由于与白细胞分类通道独立而可以采用强烈溶血素，使得部分红细胞溶解不全的标本也可以得到准确的白细胞总计数。、幼稚白细胞分析白细胞中的幼稚成份在临床上具有显著意义。过去，此类标本主要依靠人工镜检。随着血液分析仪检测技术的发展，仪器对于幼稚白细胞的报警提示越来越灵敏。BECKMANCOULTER的VCS技术使用三种技术对白细胞进行检测并且绘制成三维图形，在正常细胞之外会出现异常细胞的报警区域，如髓细胞、未成熟粒细胞、杆状核细胞、异形淋巴等。通过一些特异性的化学手段，五分类仪器还可以进行幼稚白细胞的定量检测。如BAYERADVIA120采用的过氧化物酶染色原理，使体积较大而未染色的幼稚白细胞单独分群，报为LUC，镜下复检多为原始细胞和异常淋巴。而SYSMEXXE2100采用核酸荧光染色后，根据细胞成熟度的不同可以体现在其荧光信号的强弱上，其白细胞分类通道出正常细胞分类外，还有两个幼稚白细胞的定量参数IG（幼稚粒细胞）和OTHER（原始细胞/异常淋巴）。有一种观点认为再先进的血液分析仪都是过筛的工具。因此，只要仪器报告有幼稚细胞，便应该镜检复核。此时的问题是，（1）仪器是否能够非常灵敏地检测出幼稚细胞的存在。（2）仪器是否能否提示何种幼稚细胞。此时，幼稚细胞的数目并不重要，而能够把早期患者外周血内存在的极少量幼稚细胞检测出来，避免漏诊、误诊的发生，则为问题的关键。在这方面，SYSMEXXE2100设置了单独的幼稚白细胞检测通道。幼稚白细胞较成熟白细胞细胞膜表面脂类少，氨基酸较易进入细胞内。因此，当其与含有氨基酸和表面活性成分的溶血素作用时，氨基酸首先进入幼稚白细胞内，从而延迟了表面活性成分的作用，而成熟白细胞则与红细胞一起被溶解。通过化学处理后的血样，再通过射频（检测细胞内部结构复杂度）、电阻抗（检测细胞大小）原理即可极其灵敏地测得幼稚白细胞，并提供其细胞分布的散点图。、血红蛋白分析技术血液分析仪分析血红蛋白的技术相对简单，几乎所有仪器采用的原理基本相同，即比色法。稀释后的血液加入溶血素后，红细胞被溶解并释出血红蛋白并与试剂结合形成血红蛋白衍生物。仪器再在检测通道内用特定的波长进行比色，通过吸光度的变化来反映血液内血红蛋白的含量。不同仪器其溶血素中配方会有不同，其吸收光谱各异，但最大吸收光谱均接近540NM。大多数厂家溶血素中均含有氰化钾，和血红蛋白作用结合后形成氰化血红蛋白。需要注意的是ICSH推荐的是手工氰化高铁血红蛋白法，仪器方法吸收光谱与之有所不同，但是校准必须以ICSH推荐方法为标准。近年来，出于环保和废弃物处理的考虑，有部分血液分析仪开始采用不含氰化物的溶血素检测血红蛋白。最早开发的是SYSMEX的十二烷基磺酸钠方法，不含氰化物且结果与ICSH结果有良好的相关性。目前SYSMEX所有全自动血液分析仪均已经采用试剂无氰化技术，而其他制造商也在相继开发环保试剂，这是血红蛋白检测技术的一个显著的趋势。三、仪器的应用实例本节以SYSMEXXE2100五分类血液分析仪为例做血液分析技术的应用介绍。作为全球领先的血液分析仪器制造商，SYSMEX在20世纪90年代中期已经能够生产半自动二分群、全自动三分群、全自动五分类及全自动网织红分析仪的系列化产品以满足不同层次用户的需求。但随着实验室对标本处理能力的要求越来越高，同时希望筛选效率更高，并要求网络化远程诊断及数据传输，SYSMEX于90年代末期开始研制面向二十一世纪的新一代血液分析仪。XE2100全自动血液分析仪作为具有最快处理速度、最佳检测性能的产品，于2000年上市并引入中国，目前已在国内近50家省级、医科大附属医院的实验室内运转（截至2003年4月）。XE2100由于采用了非常先进的检测原理和分析技术，具备了其他五分类血液分析仪所不具备的独特优势最快的测定速度每小时测定150个标本。独特的可选式PLT双方法检测技术除采用鞘流电阻抗原理检测RBC/PLT以外，XE2100更具有激光染色形态检测技术得到更准确的PLT结果最新激光检测技术及荧光核酸染色方法XE2100不仅在白细胞分类方面，而且在NRBC有核红细胞、RET网织红细胞测定方面均应用了半导体激光流式细胞检测技术，同时结合细胞化学荧光染色，使细胞分析的准确度和灵敏度有了极大的提高。多通道高精度检测具有单独的WBC/BASO、DIFF、NRBC、IMI、RBC/PLT、HGB、RET检测通道和专用试剂，使分析精度达到前所未有的高度。全新的血液学检测参数NRBC、HPC、IG、IMR等定量参数及IMI检测功能为临床提供一般血液分析仪所不具备血液分析信息。灵活的检测模式和真正随机进样分析CBC、DIFF、NRBC、RET七种检测模式灵活组合，满足临床不同标本检测要求，并节约试剂成本；真正随机进样分析功能可实现完全无人化的操作。强大的网络功能WINDOWSNT操作系统，可与实验室及医院的局域网、国际互联网的连接，为实现远程技术服务、在线质控等功能提供软件支持。灵活的系统扩展能力可双机连接，或与全自动网织红分析仪、全自动推片染色机连接成实验室全自动检验流水线。二、检测原理1RBC/PLT分析RBC/PLT检测通道双鞘流法结合电阻抗原理红细胞/血小板仍采用经典电阻抗原理检测，浮动界标技术进行直方图解析。双鞘流（前鞘流和后鞘流）使流经检测部的RBC/PLT保证逐个通过，彻底避免细胞并列通过、侧向通过、细胞回流重复通过带来的检测误差。2WBC分析采用专用WBC/BASO和WBCDIFF检测通道、半导体激光流式细胞原理结合细胞化学荧光染色技术（1）半导体激光流式细胞技术。新型半导体激光采用633NM激光束进行细胞检测，半导体激光较老一代的气体（氦氖、氩气）激光相比具有工作寿命长、体积小、启动快、耗电省、功率小的优点，从而降低使用成本并方便维护保养。通过采用流式细胞技术，仪器对每个通过检测部位的细胞或颗粒进行逐个分析，具有检测速度快、测量指标多、数据采集量大、对所测细胞或颗粒可以进行分选等多项特点。（2）单独的WBC/BASO和WBCDIFF检测通道及DNA、RNA荧光染色、专用的BASO试剂，使XE2100获得非常准确的WBC总数和分类结果。另外，IG（未成熟粒细胞）、和OTHER（相当于原始细胞和异常淋巴细胞）、提供了准确的异常细胞参数。激光获得的荧光信号、散射光信号绘制成WBC/BASO、WBCDIFF两个散点图，通过适应性簇分析系统ACAS进行结果分析，从而获得准确、可靠的检测结果。WBCDIFF检测通道加入特殊的WBC分类溶血剂和聚次甲基荧光染色液，采用半导体激光流式细胞检测，获得WBCDIFF散点图并得到新的检测参数IG和OTHER。WBC/BASO检测通道专用的BASO溶血剂使嗜碱性粒细胞保持原来的形态，其他细胞溶解或萎缩，经半导体激光流式细胞检测，得到WBC/BASO散点图。（3）IMI幼稚白细胞检测采用专用IMI检测通道和专用幼稚细胞试剂、RF（射频）/DC（电阻抗）原理采用专用的幼稚细胞溶血素破坏成熟细胞，保持幼稚细胞原有形态，通过射频与电阻抗方法将其检测出来，并绘制成单独的IM散点图，其检测灵敏度较一般五分类的幼稚细胞提示有了很大的提高。在此通道中，可以得到HPC（外周干细胞）、的参数，与FCMCD34细胞有良好的相关性，应用于白血病患者的自身干细胞移植的外周干细胞监测。3NRBC（有核红细胞）分析NRBC检测通道采用半导体激光流式原理和DNA/RNA染色技术。虽然一般的五分类仪器均由NRBC提示，但NRBC往往当作小淋巴细胞计数而被忽略，而同时WBC的结果也不准确。XE2100采用单独的NRBC检测通道，并使用NRBC溶血素溶解成熟红细胞、白细胞膜破坏打孔，聚次甲基染色液对有核红细胞和白细胞进行核酸染色，经半导体激光流式细胞检测，得到准确的NRBC、及NRBC散点图。4RET（网织红细胞）分析RET网织红细胞检测通道采用半导体激光流式原理和荧光染色技术。内置的全自动网织红细胞检测采用了两种荧光染色液POLYMETHINE和OXAZINE进行DNA和RNA染色，经半导体激光流式原理检测，得到RET散点图，并得到新的检测参数IRF、PLTO当电阻抗检测RBC/PLT出现异常提示时，可选择进行激光形态检测血小板PLTO，以准确测定混有大血小板、血小板凝集块、小红细胞、红细胞碎片、白细胞碎片的异常标本的血小板数量。5HGB检测HGB检测通道SLSHGB无氰化物方法测定原理亚铁血红素中的FE