抗肿瘤药物研究及新药筛选ppt课件

.,抗肿瘤药物研究及新药筛选,赵万洲博士南京凯基生物科技发展有限公司2009.10.30,.,提纲,化疗药物的发展肿瘤的药物治疗抗肿瘤新药的发现和治疗靶点抗肿瘤药物筛选及评价,.,化疗药物的发展,近代肿瘤化疗学始于20世纪40年代。50年代通过动物筛选化疗药物发现了5FU、MTX、CTX等，化疗学有了发展。60年代认识到肿瘤细胞动力学及化疗药药代动力学的重要性。大部分目前所用的抗癌药已发现，有急淋、HD、睾丸癌等可化疗治愈。,.,70年代形成肿瘤内科学，更多肿瘤有了比较成熟的化疗方案。80年代研究以生物反应修饰剂等药物来提高化疗疗效，探索抗药性产生的原因，5%肿瘤患者可治愈。90年代新抗癌药进入临床，多药耐药基因发现，生物治疗，基因治疗辅助治疗改善等，疗效进一步提高。,.,.,1、细胞毒类抗肿瘤药2、以细胞信号转导分子为靶点的抗肿瘤药物3、肿瘤新生血管生成抑制药物4、肿瘤耐药逆转剂5、分化诱导剂6、基因调节药物7、单克隆抗体药物,肿瘤的药物治疗,.,a、拓扑异构酶抑制剂b、胸苷酸合成酶抑制剂c、铂类抗肿瘤药物,1、细胞毒类抗肿瘤药,.,原理：真核细胞DNA拓扑异构酶（Topo)是生物体内及其重要的细胞核内酶，参与DNA复制、转录和修复等所有关键的核内过程。DNA拓扑异构酶已成为重要的抗肿瘤药物研究新靶点。拓扑异构酶抑制剂已成为高选择性抗肿瘤药物研究的一个主攻方向。代表药物：喜树碱类化合物对S期的毒性作用，这一作用需共价TopoIDNA复合物的形成和DNA复制。TopoI抑制剂诱导的细胞凋亡而非DNA断裂是引起细胞最终死亡的原因。,a、拓扑异构酶抑制剂,.,原理：胸苷酸合成酶（TS）把单磷酸脱氧尿嘧啶（DUMP）转换成单磷酸胸腺嘧啶（TMP），在DNA复制和细胞生长过程中起着关键作用。是已知抗肿瘤药物的重要有效靶点之一。胸苷酸合成酶抑制剂导致了DNA断裂从而导致细胞死亡。代表药物：培美曲塞它是一种结构上含有核心为吡咯嘧啶基团的抗叶酸制剂，通过破坏细胞内叶酸依赖性的正常代谢过程，抑制细胞复制，从而抑制肿瘤的生长。体外研究显示，培美曲塞能够抑制胸苷酸合成酶、二氢叶酸还原酶和甘氨酰核苷酸甲酰转移酶活性，这些酶都是合成叶酸所必需的酶。一旦培美曲塞进入细胞内，它就在叶酰多谷氨合成酶的作用下转化为多谷氨酸的形式。多谷氨酸存留于细胞内成为胸苷酸合成酶和甘氨酰胺核苷酸甲酰转移酶的抑制剂。多谷酸化在肿瘤细胞内呈现时间-浓度性过程，而在正常组织内浓度很底。多谷氨酸化代谢物在肿瘤细胞内的半衰期延长，从而也就延长了药物在肿瘤细胞内的作用时间。,b、胸苷酸合成酶抑制剂,.,原理：铂络合物产生抗肿瘤活性的原因，是由于其与肿瘤细胞DNA结合，从而干扰DNA的复制，抑制肿瘤细胞的分裂。代表药物：顺铂和奥沙利铂,c、铂类抗肿瘤药物,.,a、蛋白酪氨激酶（PTK）抑制剂b、表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂C、法尼基转移酶抑制剂,2、以细胞信号转导分子为靶点的抗肿瘤药物,.,原理：PTK是一组酶系，能催化ATP上的磷酸基转移到许多重要的蛋白质的酪氨酸残基上，使其残基磷酸化，从而激活各种底物酶，通过一系列反应影响细胞的生长、增殖和分化。代表药物：依马替尼依马替尼一种抑制Bcr-Abl酪氨酸激酶的蛋白酪氨酸激酶抑制剂，Bcr-Abl酪氨酸激酶是CML中由费城异常染色体引起的异常酪氨酸激酶。它能抑制Bcr-Abl阳性细胞系和费城染色体阳性CML新鲜白血病细胞的增殖并诱导其凋亡。,a、蛋白酪氨激酶（PTK）抑制剂,.,原理：通过扩散进入肿瘤细胞，与EGFR的胞内段激酶结合区结合，从而抑制EGFR受体的磷酸化，阻断受体下游信号通路的传导，发挥抗肿瘤作用。代表药物：吉非替尼研究表明吉非替尼的作用通过上调P27KIP1和P21CIP/WAF1的表达，导致细胞G1期阻滞或诱导细胞凋亡。,b、表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂,.,.,原理：法尼基转移酶是近年来发现的与Ras蛋白异戊二烯化修饰密切相关的一种必需酶。抑制法尼基转移酶活性，阻止Ras蛋白的活化，可以有效地抑制肿瘤细胞的增殖代表药物：替匹法尼,c、法尼基转移酶抑制剂,.,原理：原发肿瘤的生长和转移是依赖于新生血管生成的，开发和研究能够破坏或抑制血管生成、有效地抑制肿瘤生长和转移的药物（称为TA抑制剂），是新型抗肿瘤药物研究的活跃领域之一。代表药物：angiostatin和endostatinAvastinEndostatin可直接与血管内皮细胞受体结合抑制内皮细胞的增生；可与肝素样的硫酸蛋白结合，抑制血管生成；可抑制VEGF等血管生长因子，从而抑制内皮细胞的增殖与肿瘤的生长；可抑制抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-x1,促使血管内皮细胞凋亡加速。,3、肿瘤新生血管生成抑制药物,.,.,.,原理：根据肿瘤耐药的特点可分为原药耐药(PDR)和多药耐药(MDR)两大类。前者只对诱导药物产生耐药性而对其它药物不产生交叉耐药性，如抗代谢药甲氨蝶呤(MTX)，5-氟尿嘧啶(5-Fu)等；后者则是指肿瘤细胞一旦对某种化疗药物产生耐药性，同时对其它结构上无关、作用机制各异的药物也产生交叉耐药性，这是一种独特的广谱耐药现象。许多天然来源的抗肿瘤药物如秋水仙碱、紫杉醇等及蒽环类抗癌抗生素如阿霉素、柔红霉素都极易发生MDR。肿瘤耐药产生的可能原因是药物代谢障碍、DNA修复机制障碍、DNA多聚酶活性改变等。另外，耐药是凋亡抑制的表现。一些与凋亡抑制相关的癌基因(如bcl-2,bcr/abl,NF/KB等)的表达产物可阻断或阻碍多种因素(如化疗药物、辐射、激素等)诱导的肿瘤细胞凋亡，产生耐药性。研究表明MDR的产生是由于细胞内药物积聚发生障碍，此后研究证实细胞内药物积聚降低的同时，有一分子量约为170000细胞膜蛋白过度表达，称之为P-糖蛋白(Pgp)代表药物：钙拮抗药（维拉帕米及其衍生物）、钙调蛋白拮抗药（包括氯丙嗪等吩噻嗪类衍生物）、环孢素类（环孢素及其衍生物PSC833，SDZ280-466等）及抗雌激素类化合物（他莫昔芬）等。,4、肿瘤耐药逆转剂,.,EXTRACELLULARINTRACELLULAR,ATP,PGP170ATP,Drug,Drug,PlasmaMembrane,.,环胞菌素A(CsA)是一种从真菌属中提取的天然药物，具有选择性的免疫抑制功能，广泛用于器官移植后的抗排斥反应及治疗免疫性疾病。它能竞争性的和Pgp结合，阻断Pgp泵出药物的功能，提高胞内药物浓度，从而对抗MDR，通过进一步研究表明，CsA的作用机制并非单一，除了通过结合Pgp而调节药物浓度外，还可通过与细胞内，靶结构之间的相互作用而增加化学敏感因子自身的细胞毒性。CsA在MDR中可调节药物的运输，使抗癌药在细胞内积累增加，外排减少，从而增加抗肿瘤药物的敏感性。,.,原理：通过诱导肿瘤细胞凋亡达到肿瘤缩小、消退的目的已成为当今肿瘤治疗的研究热点。促进恶性细胞向成熟分化的抗癌药物称分化诱导剂。代表药物：维A酸类化合物咪唑衍生物利阿唑,5、分化诱导剂,.,维A酸类化合物维甲酸类化合物(Retinoicacids)在调控细胞生长、分化、凋亡等生命活动中起重要作用。其在体内的生理活性代谢产物包括全反式维甲酸(ATRA)、13-顺维甲酸(13-cis-RA)和9-顺维甲酸(9-cis-RA)，它们可通过核维甲酸受体(RAR)结合于DNA应答元件，从而调节靶基因的转录。,.,Rightnowwelumppatientstogetherandtreatthemwiththesamedrugsandthendealwiththeirvariableresponsetotreatment.Wereessentiallytreatingdifferentdiseaseswiththesamemedicine.”RichardKlausner,1997,.,a、反义药物b、Decoy核酸C、RNA干扰,6、基因治疗,.,a、反义药物反义药物又称反义寡核苷酸药物（AODNs），是指人工合成长度为1030个碱基的DNA分子及其类似物。根据核苷酸杂交原理，反义药物能与特定的基因杂交，在基因水平上干扰致病蛋白质的产生过程。AODNs可以与其靶RNA链互补结合，形成RNA-DNA杂交双链。形成的杂交双链可以被RNA酶H识别并消化RNA链，由此释放出的AODN可以继续与靶RNA链结合，最终导致编码基因沉默。由此可推RNA酶H过多表达可增强各种AODNs效应，反之RNA酶H受抑则降低其作用。有些AODNs并不能激活RNA酶H，相反与翻译元件竞争空间因此可抑制RNA翻译。另外，AODNs如果和mRNA结合可作用于内含子外显子接合处以中断其拼接过程。AODNs还可以占领校正RNA细胞内定位的蛋白RNA作用序列，从而扰乱RNA运输，药物：Vitravene,a、反义药物,.,.,Decoy核酸是与靶转录因子具有高亲和性的双链寡聚核酸,通过竞争性抑制转录因子与调控区域的结合,调控转录来改变下游基因的异常表达,从而抑制肿瘤恶性增殖.体外筛选结合转录因子AP2的decoy核酸药物,结果K102对多种肿瘤细胞生长有显著的抑制作用,在异植人肿瘤细胞NCIH460的裸鼠模型中,静脉注射高中低三剂量组的decoy核酸K102,抑瘤率分别达71.8%、64.4%及57.3%.通过凝胶阻抑试验,验证了K102与转录因子产生特异性结合.实验结果为decoy核酸转录调控药物的研究提供了依据。,b、Decoy核酸,.,DesignoligoswhichcanspecificallybindtothetranscriptionfactorJUN/ATFandblockdownstreanmultipleoncogenesexpression,.,RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是由双链RNA(double-strandedRNA，dsRNA)引发的转录后基因静默机制.RNAi是真核生物中普遍存在的抵抗病毒入侵、抑制转座子活动、调控基因表达的监控机制。由于RNA干扰是针对转录后阶段的基因沉默，相对于传统基因治疗对基因水平上的敲除，整个流程设计更简便，且作用迅速，效果明显，为基因治疗开辟了新的途径。其总体思路是通过加强关键基因的RNAi机制，控制疾病中出现异常的蛋白合成进程或外源致病核酸的复制及表达。,c、RNA干扰,.,单克隆抗体(单抗)药物就是通过淋巴细胞杂交瘤技术或基因工程技术制备的抗体。起初用于诊断剂或检测剂，后来用于治疗肿瘤、病毒性感染、心血管病以及其它疾病。治疗肿瘤的优越性：（1）单抗药物对肿瘤细胞的选择性杀伤作用（2）单抗药物具有更高的疗效（3）单抗药物对肿瘤相关靶点的特异性作用其研究重点主要集中在将抗体与化学药物、酶、放射性核素、毒素和生物诱导剂等耦联后直接杀伤肿瘤或者利用抗体促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管生成等方面。目前，国际上与肿瘤治疗相关的抗体研究主要集中在将抗体与耦联物作用后直接杀伤肿瘤细胞，利用抗体促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管生成等方面。,7、单克隆抗体药物,.,.,代表药物：曲妥珠单抗（trastuzumab，Herceptin）Trastuzumab为靶向结合HER2的人IgG1类单抗，HER2为酪氨酸激酶受体，在约20%25%的进展期乳腺癌患者过表达。HER2分子具有以下的特点，因此成为乳腺癌治疗的靶分子：HER2的表达水平与乳腺癌的发病机理及预后相关；肿瘤的HER2表达水平及基因拷贝数远高于正常组织，有效的减轻了HER2靶向治疗药物的毒性；HER2表达阳性的肿瘤细胞比例很高，而且在肿瘤细胞表面高表达，因此在患者体内可以靶向大多数的肿瘤细胞；HER2在原发肿瘤及转移灶均有表达，因此HER2靶向治疗对原发及转移病灶均有效。,.,曲妥珠单抗（trastuzumab）的作用机制：抑制受体信号传导。HER2可以活化多种信号传导通路，包括PI3K、MAPK等。Trastuzumab减少了这些信号通路的传导，将细胞阻滞于调定点，诱导细胞凋亡。受体信号传导的降低是由于trastuzumab介导的HER2受体内化及降解。通过调节p27kipl阻滞细胞于G1调定点。Trastuzumab处理的细胞被阻滞于G1调定点，细胞增殖减少。细胞阻滞于G1调定点与细胞周期依赖的激酶抑制蛋白p27kipl相关。诱导细胞凋亡。体内研究表明trastuzumab可以诱导乳腺癌细胞凋亡，凋亡的发生与Ki67的表达无关。抑制血管形成。高表达HER2的肿瘤细胞新生血管及VEGF的表达显著增加。体内研究结果显示trastuzumab处理后，乳腺癌肿瘤体积减小，微血管密度降低；体外研究表明trastuzumab处理后，内皮细胞的迁移能力下降。抑制DNA修复。体外研究显示可与许多化疗药物产生协同效应。Trastuzumab或联合化疗药物促进DNA损伤，并抑制DNA的修复，最终导致细胞凋亡。,.,.,抗肿瘤新药发现,.,Mathematicalmodel,CellBiology,Targetselection,Drugdesign,(Pre)clinicaltesting,.,Howmanydrugtargetsarethere?,8,000targetsofpharmacologicalinterest,ofwhichnearly5,000couldbepotentiallyhitbytraditionaldrugsubstances,nearly2,400byantibodiesand800byproteinpharmaceuticals.,.,DrugTarget:Enzymes,.,DrugTarget:EnzymesII,.,DrugTarget:EnzymesIII,.,DrugTarget:EnzymesIII,.,DrugTarget:ReceptorsI,.,DrugTarget:ReceptorsII,.,DrugTarget:ReceptorsIII,.,DrugTarget:ReceptorsIII,.,DrugTarget:Ionchannels,.,DrugTarget:Transportproteins,.,DrugTarget:DNA/RNAandtheribosome,.,DrugTarget:Targetsofmonoclonalantibodies,.,DrugTarget:Variousphysicochemicalmechanisms,.,抗肿瘤药物的筛选和评价,抗肿瘤药的临床前药理研究包括药效学和毒性研究两部分抗肿瘤药物药效学需研究内容：体外抗肿瘤试验体内抗肿瘤试验评价药物的抗癌活性时，以体内试验结果为主，同时参考体外试验结果以做出正确的结论。,.,体外抗肿瘤活性试验,目的：对候选化合物进行初步筛选；了解候选化合物的抗瘤谱；为随后进行的体内抗肿瘤试验提供参考，如剂量范围、肿瘤类别等。,.,体外抗肿瘤活性试验常用方法,体外试验常用方法有：染料排斥法四氮唑盐还原法阿拉马蓝法磺酰罗丹明染色法集落形成法生长曲线测定法。药物与细胞共培养时间一般为48-72小时，贴壁细胞需先贴壁24小时后再给药。试验应设阳性及阴性对照组，阳性对照用一定浓度的标准抗肿瘤药，阴性对照为溶媒对照,.,体外抗肿瘤活性试验常用方法,染料排斥法（dyeexclusionassay）试验原理：活细胞有排斥某些染料如伊红、台盼蓝、苯胺黑等的能力，而死细胞由于膜完整性的破坏，可被着色。因此培养的肿瘤细胞中加入这些染料，一定时间后，对着色和未着色的细胞进行计数，即可算出被杀死的细胞比例。方法要点：向一定容积的待检细胞悬液加入定量的某种染液，最常用的是0.4%台盼蓝液，混匀，室温染色5-15min，将已染色的细胞悬液滴加至血细胞计数板，直接在光镜下计数活细胞数和细胞总数。观测指标：按（未染色细胞数/细胞总数）X100%计算活细胞率，对照组活细胞率应在90%以上。根据活细胞率计算受试样品的半数致死剂量（IC50）作为药物抗肿瘤活性的指标。,.,体外抗肿瘤活性试验常用方法,阿拉马蓝法（alamarblueassay）试验原理：非荧光性蓝色底物阿拉马蓝可被活细胞中的线粒体内的NADPH相关的脱氢酶类还原为强荧光性粉红色底物，采用微培养板自动读数仪在激发与发射波长分别为530nm和590nm处读取荧光强度值，与活细胞数呈良好的线性关系。方法要点：细胞经受试样品处理后，加入10-20ul阿拉马蓝染液，继续培养一定时间，用微培养板自动读数仪在激发与发射波长分别为530nm和590nm处读取荧光强度值。观测指标：根据荧光强度可以计算细胞生长抑制率，适当时可进一步计算IC50值。,.,体外抗肿瘤活性试验常用方法,集落形成法（clonogenicassay）试验原理：克隆原细胞具有持续增殖能力，当单个细胞分裂6代或6代以上时，其后代所组成的群体(集落)便含50个以上细胞。通过集落计数可对克隆原细胞作定量分析。它反映了单个细胞的增殖潜力，故能较灵敏地测定抗癌药的活性，日前被认为是一种较理想的检测方法。方法要点：将浓度为500个细胞/ml的对数生长期细胞悬液2ml种至35ml的培养皿，并加受试样品适量，培养7d或更长时间，姬姆萨染色，解剖显微镜下计数含50细胞以上的集落。观测指标：根据集落数计算集落形成率，对照组集落形成率不应低于40%，再计算用药组的集落形成抑制率，根据情况可进一步采用Logit法计算受试样品的IC50值。集落形成率=集落数/细胞接种数X100%集落形成抑制率=（1-用药组集落形成率）/对照组集落形成率X100%,.,体外抗肿瘤活性试验常用方法,生长曲线测定法（growth-curvedetermination）试验原理：在最适条件下，肿瘤细胞在培养液中呈指数生长，如取细胞数的对数与培养时间作图可得一条直线，故称此时为对数生长期。随着细胞密度不断增高，由于代谢产物的积聚及营养物的消耗，细胞生长逐渐减慢以致停止，此时称高坪期或稳定期。因此药物对细胞生长的影响可通过生长曲线反映出来。方法要点：将浓度为10000个细胞/ml的对数生长期细胞悬液按每瓶5ml种至25ml的培养瓶，或按每孔100微升种至96孔板，并加受试样品适量，培养后分别于即刻和1、2、3、4、5、6、7d进行检测。前者可采用台盼蓝染色计数活细胞，后者可采用MTT法或SRB法读取OD值，并据此进行作图与计算。观测指标1、倍增时间(TD),将实际生在曲线进行直线回归求出0和t时刻的理论细胞数N0和Nt，据此计算：TD=0.301t/（logNtlogN0）；2增殖细胞杀伤率（%）=(N0N0)/N0100%；3细胞生长饱和密度（Ns），代表高坪期每毫升细胞数的均数。,.,体外抗肿瘤活性试验常用方法,磺酰罗丹明染色法（sulforhodamineBassay）试验原理：SRB是一种蛋白质结合染料，粉红色，可溶于水。SRB可与生物大分子中的碱性氨基酸结合。其在515nm波长的OD读数与细胞数呈良好的线性关系。故可用作细胞数的定量。MTT法的一个缺点是OD值可随放置时间而变，而SRB法无此现象。因此更适用于进行大规模的试验。方法要点：用10%冷三氯乙酸与4固定已经受试样品处理的细胞1h，洗涤，干燥；加入4mg/mlSRB液100微升/孔染色15min，1%冰醋酸洗涤，干燥；最后加入150微升/孔的Tris溶液，在酶标仪上与515nm波长处检测OD值。观测指标同MTT法。另外，NCI目前采用以下指标评价化合物的体外抗肿瘤活性。测定的OD值包括对照组、加药组及加药时的细胞的OD值C、T、和T0。据此计算：生长抑制率（%）=（TT0）/（CT0）100%；细胞死亡率（%）=（TT0）/T0100%。按生长抑制率或细胞死亡率对样品浓度绘出量效关系曲线图，并求出：GI50，即生长抑制率为50%时的样品浓度；TGI，即生长抑制率为100%时的样品浓度：LC50，即细胞死亡率为50%时的样品浓度。,.,体外抗肿瘤活性试验常用方法,四氮唑盐还原法（tetrazolinmsaltreductionassay）试验原理：四氮唑MTT,3-(4,5-dimethylibiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide是一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的甲月替(formazan)，而死的细胞则无此功能。用二甲基亚讽(DMSO)溶解甲月替后，在一定波长下用酶标仪测定光密度值，即可定量测出细胞的存活率。方法要点：受试样品处理细胞结束后，加入5mg/mlMTT液20微升/孔，继续培养四小时。再加三联液并培养过夜。在酶标仪上于570nm波长处检测OD值。观测指标直接指标为96孔板上各被测孔的OD值；然后按公式（对照组OD值-治疗组OD值）/对照组OD值100%计算出相应的细胞生长抑制率；剧情况可进一步采用Logit法计算50%生长抑制浓度IC50值。,.,体外抗肿瘤活性试验,体外筛选方法的优点：操作简单用药量少取材可直接用于人体肿瘤得出结果快速,.,Case:Activityof20compoundsonthegrowthofthreecancercelllinesProvider:CBiotechCompany,.,HumanNCI-H460lungcancercellwithouttreatment,HumanNCI-H460lungcancercellWithCompoundAtreatment,.,体外抗肿瘤活性试验,体外筛选方法的缺陷：1、细胞毒性易显阳性，有毒物质也常常显阳性，故假阳性率高2、非直接对肿瘤细胞作用的药物显示假阴性3、体外细胞并不能完全代表体内肿瘤的恶性细胞,.,体内抗肿瘤活性试验,1、自发性肿瘤2、诱发的肿瘤3、移植性肿瘤（a）皮下肿瘤模型（b）腹水瘤模型（c）原位接种模型,.,体内抗肿瘤活性试验,小鼠肿瘤模型淋巴细胞白血病腹水瘤L1210和P388、白血病L-615、宫颈癌U14、肝癌H22、Lewis肺癌、黑色素瘤B16、网织细胞瘤M5076、肠癌26、肠腺癌38、乳腺癌CD8F1、艾氏腹水瘤（EAC）、肉瘤-180等，以及各种小鼠肿瘤的亚型和耐药株等。人癌裸小鼠移植瘤模型应选用体外试验敏感细胞株进行体内抗人癌裸小鼠移植瘤试验。模型建立和使用应注意：(1)移植瘤一般由相应的细胞株移植而建立，对细胞株和移植瘤的化疗敏感性应予了解。(2)移植瘤复苏后一般应传2-3代后再用于体内抗肿瘤试验。(3)对模型生长情况应全面了解，尤其是生长快的模型(4)为了保持移植瘤的生物学特性和遗传特性，复苏后移植瘤体内传代应少于15-20代,.,体内抗肿瘤活性试验,接种：肿瘤接种方法主要有皮下接种、腹腔接种和原位接种。,.,体内抗肿瘤活性试验,皮下肿瘤模型选择肿瘤生长旺盛且无溃破的荷瘤小鼠，颈椎脱臼处死，在无菌条件下（超净台或接种罩），用碘酒、酒精或新洁尔灭消毒动物皮肤，切开皮肤，剥离肿瘤。将瘤组织剪成1.5mm3左右，用套管针接种于动物一侧或双侧腋窝皮下；或制成细胞悬液，然后按一定比例加入无菌生理盐水，一般每只小鼠接种肿瘤细胞数量为（1-5）106。,.,HumanlungcancerNCI-H460 xenograftedinnudemicewithouttreatment,HumanlungcancerNCI-H460 xenograftedinnudemicewithCompoundCtreatment,.,体内抗肿瘤活性试验,腹水瘤模型无菌条件下，消毒动物皮肤，吸取生长良好的动物腹水，以生理盐水按一