血涂片制备和染色

，血液一般检查演示者：转学敏，收集血液样本和选择抗凝剂，血液样本：全血：血细胞血浆；临床血液学检查、血细胞数、分类和形态检查血浆：全血去血细胞；血浆病理学和生理化学成分测定、内分泌激素、凝血因子(不含钙)、血栓和止血检查血清：血液在体外自然凝固后析出的液体成分(不含纤维蛋白原等凝血因子)；临床化学和临床免疫学检查表明血浆和血清的主要区别在于血清中不包含纤维蛋白原。一、采血方法、静脉采血位置：主要为肘静脉。另：手背、内踝、大周脉、幼儿在取次经静脉采血注意事项：血液时，为了避免空气栓塞，只能做内举，部位：WHO宜中指或无名指尖内侧，耳垂受温度的影响较大；不到6个月的拇指或脚，特殊人员视情况而定。采血步骤和注意事项：一人一针系统必须严格执行。穿刺深度要适中，不能硬挤在组织液中，以免影响检查结果。用消毒用干棉棒擦第一滴血，以后就可以使用流出的血。皮肤采血法(毛细血管采血法)，第二，选择抗凝剂，抗凝剂：血液凝固抗凝剂，抗凝剂，乙二胺四乙酸(EDTA)盐，抗凝原则：应用15g/L浓度EDTA和血液1: 10影响血小板聚集和白细胞吞噬作用，因此，抗凝血酶检查和血小板功能检查，草酸盐(sodiumoxalate)，草酸钠，草酸钾，草酸铵的原理：草酸盐可以产生血液中的钙离子和草酸钙沉淀，防止血液凝固。凝血检查、肝素、原则：强化低浓度抑制因子 a、PF3的作用，加强抗凝血酶 (at-iii)停用丝氨酸蛋白酶，防止凝血酶的形成，抑制凝血酶的自催化和抑制因子的作用。在高浓度下，适用阻断凝血酶和纤维蛋白反应的方法：1g/L浓度的肝素钠和血液1: 10的优点：抗凝能力，不影响血细胞体积，溶血不容易，高温耐受适用范围：红细胞检验(红细胞计数，血红蛋白测定，红细胞容积)和多种生化分析，以及血液标本检查后处理、血液污染是医源性污染的主要原因之一，检查后血液标本处理不当很危险。完成检查的血液标本应按照高压灭菌，无害化的顺序进行。有血液的检查设备要用消毒剂浸泡。采血用注射器要毁坏消毒，做无害的处理。4:血液涂片准备、血液涂片显微镜检查是血液细胞学的基本方法，在临床上应用很广。特别是对各种血液疾病的诊断具有非常重要的价值，近年来血液分析仪的广泛应用，血液涂片观察也可以作为判断仪器结果的简单方法。血液涂片的用途：血细胞形态检查、网状红色、寄生虫检查。1:为了清洗玻璃，在肥皂或洗涤剂中放入薄膜，煮沸20分钟，用热水冲洗肥皂和细胞膜，反复冲洗自来水，必要时用95%的乙醇浸泡1小时，烘干大气。新幻灯片经常有玻璃碱，用重铬酸钾乳液或稀盐酸(稀释10倍)浸泡24小时，然后彻底洗涤。使用幻灯片时，抓住幻灯片边缘，干燥、干净、中立、无油。2，准备血液涂片，朝1方向稍微拉动推滑片，血液充满推滑宽度后，以一定速度向2方向滑动。，图1-3血液涂膜准备图(上：侧视图，下：前视图)，血液涂膜质量评价，均匀，厚度，头尾，边缘，两侧注意：血滴大，速度快，大角度-血膜厚度好的血液第五，血细胞染色，染料：生物染色剂，生物组织细胞和病原体染色，用显微镜观察结构。发色机和发色机使生物染色剂产生颜色，与染色组织建立友谊。碱性染料：接受质子作为阳离子染料并对核染色的染料。亚甲蓝，天蓝色。酸性染料：负离子染料可释放质子。主要有荧光-氧杂蒽染料和偶氮染料，可以结合血红蛋白、嗜酸细胞成分等细胞的碱性成分进行染色。复合染料：瑞石染料，细胞染色原理：一般基于物理和/或化学现象的阴阳阳离子染料。物理作用：毛细管现象、渗透、吸收、吸附等化学作用：1 .染料的化学成分：辅助颜色组的存在，碱性染料从溶剂到阳离子，容易与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；酸性染料在溶剂中以负离子形式与带正电荷的碱性物质结合。2.蛋白质的化学性质：蛋白质中的氨基酸包括不同数量的氨基(-NH2)和羧基(-coh)，还有其他活性基团。在自由状态下，-NH2将h导入到具有正电的-NH3中，-coh将h替换为具有负电的-COO。各与不同的染料结合。3.周围环境的碱度：像环境ph pi与碱性染料相结合。(a)利兹染色法，利兹染料用酸性染料李红(eosin，E-)和碱性染料亚甲基蓝(methylane blue，m)合成染料。亚甲基蓝是氯盐，即氯化，有色部分是阳离子。米兰色容易氧化天蓝色。李红通常是钠盐。将李红和梅兰溶于甲醇利兹染料。m CL NaE-ME NaCL melon Emily yihonghua meilan(Rui染料)，染色原理，细胞染色既有物理吸附，又有化学亲和力，不同细胞成分的化学性质对各种染料的亲和力也有所不同。因此，用本染料液染色后，在同一血液片段中可以看到血红蛋白，嗜酸粒子与碱性蛋白，酸性染料李红一起染成粉红色，被称为嗜酸产物的多种颜色；核蛋白和淋巴细胞细胞质是酸性的，与碱性染料美蓝或天青结合，染成紫色，称为碱性物质。中性粒子是李红和米兰的总和，呈淡紫色，我们称之为中性物质。图1-4 ruishi染色原理图，PH影响细胞染色，细胞的各种成分为蛋白质，蛋白质系阳性电解质，因此束带根据溶液PH，在部分酸性环境下，正电荷增加，容易与李红结合，染色偏红；在偏碱性环境下，负电荷增加，与美蓝或天青结合，易染偏光。因此，细胞染色对氢离子浓度敏感，染色幻灯片必须干净，没有酸碱污染。瑞石染料溶液必须使用高质量的甲醇，稀释染色必须使用缓冲液，洗涤水必须几乎中性，否则识别困难，甚至可能出错的各种细胞染色反应异常。试剂，Wright染料：Rui染料粉末0.1g，甲醇60.0ml甲醇作用：1，reri染料溶解。2.以强大的脱水力将细胞固定在一定的形式，固定血液膜。3.将蛋白质沉淀成颗粒相、网状等结构，增加细胞接触染料的表面积，提高对染料的物理吸附作用，从而提高染色效果。磷酸盐缓冲液(PBS，pH6.4-6.8):磷酸二氢钾(无水)0.3g，磷酸二钠(无水)0.2g，蒸馏水添加到1000毫升。用磷化液校准pH后，拧紧瓶口。里氏染色法，1 .用蜡笔在皮膜两端画线，平放在染缸上。加里染料溶液复盖血液膜，固定1分钟。3.加入等量或一些缓冲液，搅拌均匀，然后染色5-10分钟。4.用清水冲洗，干燥后检查镜子。血膜要干燥才能染色。否则染色时容易脱落。染色时间与染液浓度、室温及细胞数有关，一般染液较浅，染色时间较长，效果较好。染料溶液太少，无法防止蒸发沉淀。冲洗时不能先翻感染液，要用流动的水冲洗，防止染料沉积。洗涤时间也不能长。染色太淡，可以再染色。如果染色太深，可以用水冲洗或浸泡，用甲醇脱色染色结果评价，通常：细胞膜的外观是浅橙色。在显微镜下，红细胞染成粉红色，厚度均匀的地方有一点像碟子的感觉。白细胞细胞质的颗粒显示出各种细胞特有的颜色，细胞核染成紫红色，细胞核呈染色质结构。染色环境编山：红血球和嗜酸颗粒红，白核没有浅蓝色或颜色，酸性pH3.5染色为红色，白细胞除嗜酸颗粒外不上色。染色环境元碱：所有细胞呈灰色蓝色，微元碱呈红色，白细胞粒子呈深黑色。嗜酸颗粒可以染成深褐色或黑紫色或蓝色。中性微粒也是紫色黑色，细胞膜太厚的地方是绿色。(b)银丝染色法，原则金丝染色液由天青、李红组成。染色原理和结果基本上与Reiter染色方法相同。但是，这种方法着色细胞核和寄生虫比较好，结构更明显，细胞质和中性粒子的颜色不好。吉扎染料1.0g甘油66.0ml甲醇(AR)66.0ml染色方法1。甲醇固定干燥细胞膜3-5min2。染液中血液膜10-30分钟3。冲洗流动水，干燥后进行显微镜检查，(c) Rui-Jim纱染色，原理将打火机染料和Jim纱染料按一定比例混合，对细胞进行染色，与light和Jim纱染色法相同，但综合了瑞士和Jim纱染色法的优点，因此染色更好。里氏-吉姆史染色法，在5滴皮液中填充5滴感染液，2分钟后加入10滴pH6.4-6.8磷酸盐缓冲液，10分钟后用流动的水冲洗，干燥后进行显微镜检查。方法评价，Rui染色液和Jim sa染色液对细胞质和颗粒进行更好的着色，后者具有明确标记细胞核结构的固有色彩特征。结合这两者，可以获得长、短、集中的优势，可以用这种混合染料染色血细胞，其细胞核、细胞质和细胞内粒子都带有鲜明的色彩。利兹-吉姆沙混合染色法是临床上广泛使用的方法。6，血细胞显微计数法，6，血细胞显微镜计数法，(a)原理使用特定稀释剂定量稀释标本，均匀填充计数池，显微镜计算特定体积的血细胞数，转换后求出每升血液中的血细胞总数。血细胞计数、人工显微镜计数法、自动血细胞计数法、直接计数法、间接计数法、半自动(2，3分群)、全自动(5分群)、显微镜细胞计数法、测量方法和评估)样品适当稀释(或富集)、细胞计数法例如：血液RBC、WBC、PLT、嗜酸细胞、淋巴细胞和单核细胞直接计数、体液细胞计数(尿液中的细胞膜、精液中的精子计数、脑脊液和浆液渗出液细胞计数)。该方法计算误差大，耗时费力，不再适应批量标本的测定，将逐渐被血细胞分析仪代替。试剂各种特殊稀释剂或染色稀释剂。(1)显微镜(2)微吸管：Hb吸管：10，20l 2尺度毛细管玻璃吸管：10，20l 2尺度1人，用汞计量法定期校正误差为1%(3)计数板：血细胞计数板，通常已改善、血细胞计数板的结构、24200.6mm、1855年计算红细胞的计数板血细胞计数板方法是最可靠、最经典的计数技术：Neubauer计数板、计数池虚线、1mm、1mm、系数池、系数池划线、美国国家标准局(NBS)1941年规定：系数器每边长度误差必须在1%以内(10.01毫米)。血盖和计数池之间的间隙深度必须在2%以内(0.10.002mm)。操作，WBC稀释液0.38ml血液2