医学检验-粪便标本处理

粪便标本粪便标本中常见的病原菌:革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌金黄色葡萄球菌 伤寒及其他沙门氏菌厌氧链球菌种 志贺菌属结核分枝杆菌 致病大肠埃希氏菌产气荚膜杆菌 弧菌属菌种艰辨梭菌气单胞菌种白色念珠菌邻单胞菌小肠结肠炎耶尔森菌弯曲菌沙门-志贺氏菌:接种HE及麦康凯平板,35、1824小时后检查平板,有疑似菌落,接种双糖,细菌分纯后用细菌鉴定仪上板鉴定后与沙门、志贺氏菌因子血清凝集,以确诊. 霍乱弧菌培养:取疑似患者粪便接种于碱性蛋白胨水中,进行增菌,同时划线接种于碱性琼脂平板/双洗平板血琼脂平板,孵育.增菌培养孵育6小时后,取菌膜移种于上述平板,进行分离培养,并同时做涂片,行革兰染色和悬滴标本,检查形态和活动力.各种分离平板在孵育18-24小时。观察菌落,挑取可疑菌落,先与生理盐水混匀,观察有无自凝现象.再用O1群霍乱多价血清作玻片凝集试验. 如发现霍乱病人,立即向当地防疫部门提供及时准确的信息. 致病大肠埃希氏菌培养:引起腹泻的大肠杆菌有四种-ETEC、EPEC、EIEC、EHEC.取液体状、脓血或糊状粪便或肛拭子划线接种于麦康凯或伊红美兰及血琼脂平板上,35孵育18-24小时,挑选乳糖发酵菌落5个,移种于KIA和MIU孵育过夜,并同时进行细菌分纯，用细菌鉴定仪上板鉴定并进行血清学分型. 副溶血弧菌培养:取粪便接种于副溶血弧菌增菌液中,6-8小时后接种于TCBS和SS琼脂平板上,35孵育18-24小时后,观察菌落,挑取TCBS上绿色微隆、浑浊、湿润菌落,SS上挑取无色透明、不易挑起菌落进行分纯后用细菌鉴定仪上板鉴定. 真菌培养:真菌性腹泻多继发于抗生素治疗后,常见于白色念珠菌、球拟酵母菌.将标本接种于含氯霉素的沙保氏琼脂及血琼脂平板,置25-30孵育24-48小时,根据菌落形态及涂片革兰氏染色所见结果,决定鉴定方法. 菌群失调及菌交替症:根据临床提示粪便培养需选用数种培养基,包括强选择性和弱选择性肠道培养基、需氧及厌氧血琼脂平板、沙保氏琼脂等,按各类细菌分别进行培养鉴定,并观察其数量变化.3、操作流程(沙门-志贺氏菌属检查) 粪便或肛拭子 分离培养 增菌培养 HE及麦康凯琼脂分离培养血平板分离纯培养 血清学鉴定 细菌鉴定 药敏试验 报告 4、报告方式: 以分离目的菌种的结果而决定,如:目前常规以SS/HE和中国蓝或伊红美兰分离粪便中的致病菌,阳性者应报告“沙门菌或志贺氏菌”,阴性应报告“未检出沙门菌属或志贺菌属”.其他培养结果报告方式与上述原则基本相同.5、注意事项（1） 人类肠道中的细菌种类繁多，数量亦多，在健康人肠道内经常寄居的大量的细菌，一旦肠道发生病理改变时，就可能侵入病变部位而引起疾病。（2） 提高阳性检出率必须注意：标本要采集新鲜的、陈旧标本大大影响阳性检出率。（3） 痢疾患者要采集大量脓血部位进行培养。(4)切勿粪尿混合否则也会影响阳性检测率。穿刺液培养常见的病原菌革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌金黄色葡萄球菌淋病奈瑟氏菌 A群链球菌流感嗜血杆菌肺炎链球菌大肠埃希氏菌草绿色链球菌产气肠杆菌肠球菌伤寒及其他沙门氏菌厌氧链球菌肺炎克雷伯氏菌结核分枝杆菌产碱杆菌产气荚膜芽胞杆菌铜绿假单胞菌放线菌不动杆菌念珠菌梭杆菌拟杆菌 当留取标本时,为防止穿刺液凝固,可在无菌容器内预先加入灭菌肝素,再注入各种穿刺液. (1) 涂片检查:标本如为浆液,可经3000r/min离心,取沉淀涂片.如为脓液,可直接涂片,涂片固定后,做革兰氏染色和抗酸染色. (2) 除常规一般培养外，应根据临床提示的要求增加真菌和结核培养,穿刺液含细胞数量较少,必须做增菌培养.如标本外观非脓样,可加大接种量.平板经3524-48小时孵育后,如有细菌生长,按常规鉴定,无菌生长的平板还应继续孵育至48小时.方可报告阴性.浆膜腔积液采集穿刺液（胸水、腹水、关节液、鞘膜液） 涂片革兰氏染色 血平板、麦康凯 巧克力平板 35度18-24h，5%-10%CO2 初步报告结果 挑取可疑菌落分离培养菌种鉴定,药敏试验 报告结果4、报告方式:穿刺液中检出细菌均应报告鉴定结果及药敏试验.5. 注意事项（1） 穿刺液盛于含有抗凝剂的试管或小瓶中，充分混合后，立即送检或置4度冰箱保存。（2） 应根据临床要求选择相应的培养基。（1） 对疑有淋病性关节炎患者之关节液，采集应即刻送检或床边培养为佳。脑脊液标本正常人体脑脊液是无菌的。当人体患有脑脊髓膜炎症时，在脑脊髓液中可以出现病原菌。常见的病原菌有细菌、真菌和结核菌等，引起脑脊髓膜炎的微生物主要有：革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌金黄色葡萄球菌 脑膜炎奈色氏菌群链球菌 卡他布兰汉菌群链球菌 流感嗜血杆菌肺炎链球菌 肠杆菌科菌种消化链球菌 脑膜败血性黄杆菌炭疽芽胞杆菌 假单胞菌结核分枝杆菌 无色杆菌产单核细胞李斯特菌 拟杆菌新型隐球菌、白色念珠菌 腰穿法收取脑脊液35ml，盛于无菌试管，应立即送检，否则影响检出率，同时注意保温，不可置冰箱保存，会使病原菌死亡，尤其是脑膜炎奈色氏菌、肺炎链球菌及流感嗜血杆菌。 实验室接到标本须立即做直接涂片镜检和培养。 (1) 肉眼观察和涂片检查 首先观察脑脊液的外观，除结核性脑膜炎外，其他细菌引起的化脓性脑膜炎多呈明显混浊，经抗生素治疗后，亦可不混浊或轻度混浊。 革兰氏染色：混浊或脓性脑脊液可直接涂片，染色镜检。无色透明的脑脊液，应以3000r/min离心，10-15min，取沉淀物涂片，行革兰氏染色，镜检。根据染色反应及细菌形态特征，常可初步提示感染细菌的种类。 结核分枝杆菌涂片检查：脑脊液以4000r/min离心30min，取沉淀物作小而集中的涂片；亦可将脑脊液在室温下静置数小时或18-24h，待形成纤维网后，取此脑脊液倾于新的无划痕的洁净载玻片上，多余的液体任其溢出载玻片，使纤维网自然展开，干燥、固定后用萋纳氏染色。 新型隐球菌涂片检查：脑脊液的离心沉淀物行墨汁负染色，可在黑色背景中，见到菌体周围有透明的荚膜，似一晕轮，有时可见到出芽的酵母菌。新型隐球菌，特别是荚膜窄者易与白细胞相混淆，可用0.1%甲苯胺兰染色法加以区别。新型隐球菌的菌体呈红色园球状，荚膜不着色，白细胞染成深蓝色。 (2) 培养 A 一般培养应抽23ml放如血培养瓶中（同血培养）。主要用于脑膜炎奈色氏菌、链球菌、葡萄球菌、大肠埃希氏菌、产气杆菌、流感嗜血杆菌等细菌的分离。 对有的未直接打入血培养瓶的标本，用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血琼脂平板及巧克力琼脂平板上，置35CO2环境中培养18-24h，检视有无细菌生长。根据菌落特点及染色后镜检的特征，初步判定细菌的种类，并进一步分离纯培养后配制菌悬液上板条并做细菌鉴定及血清学检查，并作出报告。 血平板和巧克力平板是分离用的最基本培养基。巧克力平板需放入CO2环境中，有利于检出脑膜炎奈色氏菌、肺炎链球菌及嗜血杆菌等。 结核分枝杆菌培养：取离心后的沉淀物，接种罗琴氏培养基，斜置于35温箱，孵育7天后，直立，继续孵育生长至八周，无菌落生长，发阴性报告；有菌落生长，鉴定后发报告。 真菌培养：取经离心后的沉淀物，接种于科玛嘉显色平板上，放在35孵箱中孵育，一般2-3天即可出现菌落。极少数真菌需培养2-3周，才能出现菌落，甚至培养阴性。根据菌落形态、涂片所见和细菌鉴定结果等进行鉴定。3操作流程： 脑脊液 混浊液可直接检验清亮液应离心取沉淀 涂片、革兰氏染色、镜检 必要时作抗酸染色或墨汁染色法 血琼脂平板 巧克力平板 3518-24h CO2环境下3518-24h 观察菌落 涂片检查 细菌鉴定/药敏试验 血清学鉴定 发出报告4、 报告结果： 无论是涂片还是培养，一旦检测到阳性应立即通知临床医师。培养并经鉴定的结果报告“菌”，同时报告药敏试验结果。5、 注意事项（1） 由于脑脊液奈瑟氏菌离体后容易自溶，流感嗜血杆菌等也易死亡，故不论是做涂片镜检，还是进行培养检查必须立即送检。（2） 标本若混浊，最好进行床边培养。（3） 做好治疗前采集标本。（4） 要切实防止皮肤表皮葡萄球菌和其它细菌的污染、。尿液标本1、标本的采集 中段尿：女性采样前应先用肥皂水或0.1高锰酸钾溶液冲洗外阴部及尿道口；男性须翻转包皮冲洗，用0.1新洁尔灭消毒尿道口灭菌纱布擦干后收集标本。 导尿管导尿采样可减少污染。对留置导尿者，可用碘酒消毒尿道口处的导尿管壁，用空针细针头斜穿管壁抽吸尿液。或消毒后解开接口，弃去导尿管前段尿被、留无污染的膀胱内尿液数毫升送检。不可从集尿袋的下端管口留取标本。 送检标本以晨起第一次尿液为佳。 室温下尿标本耽搁稍久，可致尿内细菌浓度明显增加而影响病原菌与污染菌的区分。不能立即送检者，可暂存4冰箱。正常人体中，膀胱中的尿液是无菌的，从膀胱穿刺取出的尿液业应是无菌的。尿液经尿道排出时，受到尿道中细菌的污染而混有细菌。取经尿道排出的中段尿，细菌数不会超过103CFU/ml。患有泌尿系感染时，尿中的菌数高于104-5CFU/ml，因而，以此界限作为诊断泌尿系感染的依据。 2、 检验步骤: 留检的标本应立即送检，否则尿中细迅速繁殖,使菌落计数不可靠而影响诊断.实验室接到标本后，须立即进行涂片和培养。用定量接种环或定量加样器取中段尿10UL，滴注在血平板上，用接种环涂抹，待表面干燥后，35培养24H，计数生长的菌落数，乘以100，求出每ML的菌落数。 (1) 涂片检查:一般细菌细菌涂片:以无菌操作作吸取尿57ml,放入无菌试管内，经3000r/min离心30分钟后，倾去上清液,取其沉渣,制成涂片,行革兰氏染色,镜检.如发现有革兰氏阴性或阳性细菌,即可做出报告. 淋球菌涂片:尿标本如上处理后另制一 张涂片以革兰染色,镜检.如查到细菌并为革兰氏阴性双球菌,肾形,存在于细胞内或细胞外,经培养证实后方可做出报告。 念珠菌涂片:将尿液离心沉淀后,取沉淀物放于洁净玻片上,覆以盖玻片,略加压力,使成薄片,直接用高倍镜观察.如沉渣太多,可滴加10%氢氧化钠,使之溶解后再做镜检.也可制成薄片,干后经火焰固定,革兰氏染色,油镜检查.发现有卵圆形的芽生孢子和管状的假菌丝,且革兰氏染色为阳性,就可报告检出念珠菌. 结核分枝杆菌涂片:尿液经4000r/min离心30分钟,取沉淀作涂片,行萋纳氏染色及潘本汉氏染色,如两张涂片均查见红色杆菌,可报告为“找到结核分枝杆菌”.如萋纳氏染色片上查见红色杆菌,而潘本汉氏染色未查见红色杆菌,则为耻垢分枝杆菌.也可用金胺O-罗丹明荧光染色法. (2) 培养:临床多用中段尿做细菌培养,应做菌落计数,培养结果才有诊断意义. 培养基常用血平板,在检查淋球菌时,须使用淋球菌平板,并防入CO2环境中孵育. 许多抗生素是经肾脏代谢的,所以尿中抗生素浓度较高,细菌的细胞壁结构易受破坏,可形成L-型细菌,常规方法不能检出.对用过抗生素的患者,尿培养有条件时须接种高渗培养基,以免漏检. 3、 操作流程: 尿液 涂片 定量培养 分离培养 淋病奈瑟氏菌培养 离心沉淀 计数菌落 血琼脂平板 麦康凯平板 专用淋球菌平板 涂片、革兰氏染色 5%10%CO2 镜检 35,1824h 35,1824h 观察菌落 涂片、染色、镜检 鉴定细菌 药敏试验 报告 4、报告方式10%的尿路感染患者,可能会在同份尿标本中分离到两种细菌,并且都是病原菌.若同份标本中检到3种以上不同微生物,一般认为污染。尿标本中革兰氏阴性杆菌菌落计数大于105CFU/：菌菌落计数大于104CFU/ml有诊断意义,报告鉴定结果即药敏试验5、注意事项（1）尿液标本的采集除婴儿外，一般均使用导尿法，然而就目前国内外细菌室则多用中段 尿，个别病例也可行膀胱穿刺术，在收集标本时应切实防止污染，及时接种，以免细菌繁殖。（2） 通常正常尿液本应是无菌的，由于外生殖道细菌的存在和其它因素的影响，虽经消毒的导尿，也难免绝对无菌，因而在实际工作中必须和定量培养法（菌落计数）同时检查。伤口、创伤面、脓液采集脓汁及创伤分泌物中常见的病原菌革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌葡萄球菌假单胞菌链球菌肠杆菌科细菌消化链球菌腐败谢瓦纳拉菌炭疽芽胞杆菌拟杆菌破伤风芽胞杆菌梭杆菌产气荚膜梭菌嗜血杆菌溃疡棒状杆菌产碱杆菌结核分枝杆菌无色杆菌放线菌、奴卡菌弧菌属细菌念珠菌气单胞菌 (1) 涂片检查:脓汁标本在培养的同时均应做涂片,涂片的结果一方面报告临床提供最初的诊治依据,另一方面可作为分离培养的质量指标.涂片见到的细菌均应分离得到.陈旧性脓液,其中细菌已被消化,涂片观察不到细菌,也不可能分离出细菌. (2) 培养:血琼脂平板和中国蓝/麦康凯琼脂平板是基础的分离培养基,对于内源性感染病灶的分泌物往往是多种细菌混合存在,且以革兰氏阴性菌为主,这就需要选择培养基并以分区划线法接种。 当疑有嗜血杆菌和奈瑟氏菌存在,应接种巧克力平板,置CO2环境中孵育.分离放线菌和奴卡菌,置于有氧环境中孵育,时间至少在一周以上,每天观察.3、操作流程 脓汁、创伤分泌物 涂片、染色镜检 需氧培养 结核菌培养 革兰氏染色 抗酸染色 血琼脂平板、麦康凯平板 罗氏培养基 (巧克力琼脂) 观察菌落涂片镜检 同时分离纯培养 确诊报告4、 报告结果:对无菌部位的感染,从分泌物中分离到细菌,一般均有临床意义,按分离鉴定的菌种报告细菌名称及药敏试验结果.5、注意事项（1） 对确定常居菌群的细菌是否为创伤感染的病原菌时，一定要注意该菌是否占数量上的优势。（2） 目前临床上区分创伤感染或污染，主要看细菌向活组织深部侵入程度及每克组织含菌量是否达到一定阀值。痰液标本革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌肺炎链球菌 卡他布兰汗菌A群链球菌 脑膜炎奈瑟氏菌金黄色葡萄球菌 流感嗜血杆菌厌氧球菌 肺炎克雷伯氏菌结核分枝杆菌 其他肠杆菌科细菌白喉棒状杆菌 假单胞菌属细菌防线菌、奴卡菌 嗜肺军团菌念珠菌 上呼吸道栖居正常菌群: 下呼吸道感染常见病原菌: a.r链球菌 棒状杆菌 微球菌 拟杆菌 奈瑟氏菌 梭杆菌 嗜血杆菌 厌氧球菌 表皮葡萄球菌 下呼吸道感染常见病原菌:(1) 痰涂片检查: 目的:为确定标本是否适合做细菌培养;初步判定是否有病原菌存在. 一般细菌涂片检查:挑选痰液中脓性或带血部分,涂成薄片,行革兰氏染色,镜检.根据其细菌形态、排列和染色性,大致可以初步推断菌属(或种). 结核分枝杆菌涂片:以接种环取干酪样或脓性部分的痰制成涂片,作萋纳氏或金胺“O”荧光染色. 放线菌及奴卡菌涂片检查:将痰液用生理盐水洗涤数次,如含血液,则用蒸馏水溶解红细胞,然后挑取黄色颗粒或不透明的着色斑点,置载玻片上,覆以盖玻片,轻轻挤压,置高倍镜下观察结构.然后揭去盖玻片,干后作革兰氏及萋纳氏染色,镜检. (2) 培养:下呼吸道的病原菌种类繁多,除一般细菌外,还有结核菌、真菌、厌氧菌等.所以,除基本分离培养外,还须用特殊培养基和适当的培养环境. (3) 对于直接来自下呼吸道的标本,应定量或半定量做细菌计数培养.3、操作流程 痰液及下呼吸道分泌物 肉眼观察 培养前处理及分离培养 涂片检查 血琼脂平板、麦康凯 巧克力平板 科玛嘉真菌显色平板 罗氏培养基 需氧培养 CO2环境 需氧培养 培养八周 35,1824小时 35,1824小时 35,1824小时 每周观察 观察菌落和涂片染色镜检 菌种鉴定 药敏试验确定报告 4、 报告方式 痰中的病原菌不少属于机会致病菌,与正常菌群同在,在报告时应作说明.对于机会致病菌,一般仅当其数量超过正常菌群时才可报告鉴定结果及其敏感试验结果. 检出致病菌时,除报告该菌的鉴定名称外,还需同时报告正常菌群的情况. 通常以报告草绿色链球菌和奈瑟氏菌作为正常菌群存在的指标.报告的各种细菌应该注明各自所占比例情况,以“+”表示.未检出病原菌时,应报告“正常菌群”.5、注意事项（1） 痰标本的收集过程常受到唾液或鼻腔及咽部分泌物的非病原菌所污染，尤以慢性呼吸道感染多见，这直接干扰细菌学检查结果，患者接受某些药物的治疗，使有关菌受到抑制，这样也影响阳性检出率。一般均收集晨痰，但在咳前必须充分漱口，避免口腔和鼻烟腔分泌物的污染。血液与骨髓标本1、标本的采集与处理：一般应在疾病早期，高热期间，抗菌药物治疗前，以无菌手法采血。采血量约为培养液的1/10（静脉血4-5ML，骨髓1-2ML），然后接种双相血培养瓶，充分混匀后送检。 通常采血部位为肘静脉。疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜。切忌在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本。 采血部位的局部皮肤应严格消毒。将采集的血液注入血培养基前，应更换针头或过火消毒针头。血培养瓶应在避光室温中保存，不必置冰箱保贮。 每次采血量成人5一10ml，婴幼儿l一5ml，培养基与血液之比以 lO：1为宜，以稀释血液中的抗生素、抗体等杀菌物质。 怀疑菌血症应尽早采血，体温上升阶段采血可提高阳性率，但要防止因等待而延误时机。对已用抗菌药物而又不能停药者，可在下次用药前采血。 每例至少采血两次，间隔05一lh，以利于提高阳性率和区分感染菌与皮肤污染菌。 对疑为细菌性骨髓炎或伤寒病人，在病灶部位或髂前(后)上棘处严格消毒后抽取骨髓lml作增菌培养。2、检验步骤: 实验室接到送检的血培养瓶后,立即放培养箱。血培养瓶置35培养，每日观察一次。根据肉眼观察有无细菌生长，摇匀培育液并覆盖固相后继续培养。下列情况提示细菌生长：A.固相上有菌落或菌苔生长；B.均匀混浊；C.血细胞表面出现颗粒状或絮状沉淀物生长；D.血液发紫；E.液体表面有菌膜、菌环生长。有菌生长迹象，做如下处理：（1） 取生长物涂片,做革兰氏染色.（2） 取生长物移种血平板、巧克力等平板,进行分离以获纯。涂片结果证实为一种细菌生长，则可直接一增菌液做鉴定试验.如有二种或多种细菌同时生长,则必须经过分离培养,以获得纯菌后做鉴定. (3) 无细菌生长迹象的培养瓶，在培养6d 时盲种，培养24小时。未见生长报告为“培养7天无菌生长”。临床诊断为亚急性心内膜炎者，可持续培养至2周再发报告，如可疑布氏菌时可培养28天，可疑军团菌时可培养10天。 (4) 需氧菌培养可转种到血平板或巧克力平板.用血平板可观察到细菌溶血情况,但可能丢失嗜血杆菌.如用巧克力平板,不仅嗜血杆菌可生长,脑膜炎奈瑟氏菌生长也好.转种的巧克力平板需要孵育有CO2的环境.3、操作流程: 血液、骨髓液 增菌/双相培养(需氧)涂片、染色、镜检 分离培养 手工法直接药敏 35 需氧培养及CO2环境培养 46h (血琼脂、巧克力平板等分离) 初步报告菌落观察 涂片、革兰氏染色、镜检 血平板上纯培养 血清学检查 菌种鉴定/药敏试验 确定报告4、 报告结果: 为做到快速,可采取以下措施:即每日开始工作时,首先检查血培养,如有细菌生长者,立即处理. (1) 疑有细菌生长者,经涂片、染色、镜检后,电话通知主管医师. (2) 此后约68小时,应报告药敏试验的初步结果.电话通知主管医师,通报敏感的抗生素 (3)任何时候平板上长出单个菌落,立即完成鉴定及标准化药敏试验,发出报告. (4) 培养4天仍为阴性的标本,应通知临床医师,以便做相应处理. (5) 培养7天仍为阴性者,报告无菌生长.5、注意事项（1）许多细菌均可引起菌血症，病原菌。条件致病菌乃至非条件致病菌，均可在机体抵抗力降低，大量应用抗生素的情况下于血中出现。（2）血液培养的阳性率与抽血时间、治疗与否密切相关，为此应了解细菌出现的规律，力争在治疗前抽血，必要是进行骨髓培养，或停止用药，以消除药物对细菌的作用及快速培养的目的。（3）鉴于细菌培养阳性受许多因素影响，甚至有些培养可持续患者死亡后转为阳性，因此对血培养阴性结果除继续反复培养外，不能轻易做出判断，应结合临床资料。 （3） 对于罕见的细菌或暂时鉴定不了的细菌，可进行药敏试验，并将菌种报送上级单位进行鉴定。菌种鉴定1、 革兰阴性杆菌鉴定如果是革兰阴性杆菌，则需要做氧化酶试验，同时接种一支克氏双糖管，以观察乳糖、葡萄糖、硫化氢反应结果。结果观察： 氧化酶双糖管板条选择配置浓度肠杆菌阴性K/A 或 A/AGN4861%加T溶液50ul非发酵菌*阳性K/K 或 K/-GN4852%，不加 T溶液弧菌科（弧菌属，气单胞菌，邻单胞菌）阳性K/AGN4852%，不加 T溶液注：*特例：不动杆菌属，嗜麦芽寡养单胞菌，唐菖蒲伯克霍尔德菌等菌的氧化酶阴性，但是非发酵菌。1)用空白的IF鉴定培养液将比浊仪上的数据调至100。2）将相应浓度的标准比浊管插入比浊仪进行比色，读数。3）如需要加T溶液，将先前调100的培养液中加入50ul的T溶液。4)取一根消毒好的棉签放入培养液中浸湿。 5） 在菌苔上滚动棉签使细菌粘在棉签上，而不要滑动棉签。注意避免将琼脂粘在棉签上。6） 在试管内壁上旋转棉签，使菌块均匀地被研开。7） 将棉签从上向下醮入培养液中并搅拌成均质混悬液，盖上盖子，颠倒混匀。8） 校正菌液浓度在要求浓度范围（标准管读数的20）。你可以用继续加入菌落或加入培养液的方法调节菌液浓度。请在读数前颠倒混匀。9） 检验混悬液充分混匀而没有凝块。混悬液无凝块对制备菌液是很重要的。如果只有很少的凝块，可以让它沉在管底，而只用上面的悬液。10） 在板条上标记好菌株的名称编号、板条类型GN48），注意请标记在板条上，而不要标记在盖子上。11） 请按无菌操作要求将菌悬液加入多通道移液器的加液槽中。12） 将消毒好的移液器头插在移液器上，请注意插紧。13） 用移液器吸取菌悬液150ul，注意观察每个移液器头内的液面是水平的。14） 将菌液加入鉴定板的孔中，一种细菌加48个孔，（1-6列或7-12列）。注意不要将菌液溅入其他孔中。避免污染物混入，避免用移液器头触及板条底部而将碳源带走15） 将板条的盖子盖好。16） 肠杆菌科放35度培养18-24小时 非发酵菌、弧菌科放30度培养18-24小时 单位临床微生物实验室菌种鉴定程序修订次数： 0 修改日期： 采用日期：文件编码：第 2 页 共 3 页17） 板条上仪器读数，打印报告。注：若分析结果为志贺氏菌属或沙门菌属细菌，必须结合血清学试验结果方可报告临床。2革兰阴性苛养菌鉴定革兰阴性苛养菌包括奈瑟菌属，嗜血杆菌属特性：氧化酶板条选择配置浓度奈瑟菌属阳性GN4820%+ T溶液 50 ul嗜血杆菌（苛养菌）阳性GN4820%+ T溶液 50 ul1)用空白的IF鉴定培养液将比浊仪上的数据调至100。2）将相应浓度的标准比浊管插入比浊仪进行比色，读数。3）如需要加T溶液，将先前调100的培养液中加入50ul的T溶液。4)取一根消毒好的棉签放入培养液中浸湿。、在菌苔上滚动棉签使细菌粘在棉签上，而不要滑动棉签。注意避免将琼脂粘在棉签上。5） 在试管内壁上旋转棉签，使菌块均匀地被研开。6） 将棉签从上向下醮入培养液中并搅拌成均质混悬液，盖上盖子，颠倒混匀。7） 校正菌液浓度在要求浓度范围（标准管读数的20）。你可以用继续加入菌落或加入培养液的方法调节菌液浓度。请在读数前颠倒混匀。8） 检验混悬液充分混匀而没有凝块。混悬液无凝块对制备菌液是很重要的。如果只有很少的凝块，可以让它沉在管底，而只用上面的悬液。9） 在板条上标记好菌株的名称编号、板条类型GN48），注意请标记在板条上，而不要标记在盖子上。10） 请按无菌操作要求将菌悬液加入多通道移液器的加液槽中。11） 将消毒好的移液器头插在移液器上，请注意插紧。12） 用移液器吸取菌悬液，注意观察每个移液器头内的液面是水平的。13） 用移液器吸取菌悬液150ul，注意观察每个移液器头内的液面是水平的。14） 将菌液加入鉴定板的孔中，一种细菌加48个孔，（1-6列或7-12列）。注意不要将 菌液溅入其他孔中。避免污染物混入，避免用移液器头触及板条底部而将碳源带走15） 将板条的盖子盖好。16） 嗜血杆菌，奈瑟菌 放35度CO2培养箱培养18-24小时。17） 板条上仪器读数，打印报告。3革兰阳性球菌/杆菌操作方法若为革兰阳性球菌，则必须做触酶试验。若触酶试验为阳性，涂片革兰染色为葡萄状排列。则需做凝固酶试验（分玻片法和试管法）。触酶板条选择配置浓度葡萄球菌，微球菌阳性GP4820% +T溶液50ul链球菌阴性GP4820% +T溶液50ul无芽胞杆菌GP4820% +T溶液50ul芽胞杆菌GP4828% +T溶液50ul1)用空白的IF鉴定培养液将比浊仪上的数据调至100。2）将相应浓度的标准比浊管插入比浊仪进行比色，读数。3）如需要加T溶液，将先前调100的培养液中加入50ul的T溶液。4)取一根消毒好的棉签放入培养液中浸湿。5） 在菌苔上滚动棉签使细菌粘在棉签上，而不要滑动棉签。注意避免将琼脂粘在棉签上。6） 在试管内壁上旋转棉签，使菌块均匀地被研开。7） 将棉签从上向下醮入培养液中并搅拌成均质混悬液，盖上盖子，颠倒混匀。8） 校正菌液浓度在要求浓度范围（标准管读数的20）。你可以用继续加入菌落或加入培养液的方法调节菌液浓度。请在读数前颠倒混匀。9） 检验混悬液充分混匀而没有凝块。混悬液无凝块对制备菌液是很重要的。如果只有很少的凝块，可以让它沉在管底，而只用上面的悬液。10） 在板条上标记好菌株的名称编号、板条类型（GP48）注意请标记在板条上，而不要标记在盖子上。11） 请按无菌操作要求将菌悬液加入多通道移液器的加液槽中。12） 将消毒好的移液器头插在移液器上，请注意插紧。13） 用移液器吸取菌悬液，注意观察每个移液器头内的液面是水平的。14） 菌液加入鉴定板的孔中，一种细菌加48个孔，（1-6列或7-12列）。注意不要将 菌液溅入其他孔中。避免污染物混入，避免用移液器头触及板条底部而将碳源带走15） 将板条的盖子盖好16） 革兰阳性球菌/杆菌放35度培养18-24小时17） 板条上仪器读数，打印报告。4、 真菌鉴定若为真菌，则接种科玛嘉真菌显色平板，35，24-48小时看结果。 菌落色彩 初筛念珠菌 绿色、翠绿色（直径约2mm） 白色念珠菌 蓝灰色、铁蓝色（直径约1.5mm） 热带念珠菌 粉红色（模糊、有微毛、菌落较大，直径约4-5mm）