分子免疫学MHC

第八章 主要组织相容性复合体及其编码的分子,1、组织相容性（histocompatibility）：指不同个体间进行组织或器官移植时，受者与供者之间相互接受的程度。2、组织相容性抗原（histocompatibility antigen）或移植抗原：代表个体特异性的同种异型抗原。存在于细胞表面，可引起排斥反应。3、主要组织相容性抗原系统（major histocompatibility antigen system，MHS）：凡能引起强而快速排斥反应的抗原系统。,4、次要组织相容性抗原系统（minor histocompatibility antigen system，mHS）：凡能引起弱而慢排斥反应的抗原系统。5、主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex，MHC）：是指位于哺乳动物某一染色体上一组紧密连锁的基因群，其编码的产物参与抗原提呈，调控免疫应答，引起移植排斥反应等。,第一节MHC基因的结构,一、小鼠MHC（H-2复合体）小鼠MHCH-2复合体（第17号染色体）基因群由4个遗传区域组成，即K、S和D区。按H-2基因群编码抗原结构和功能的不同，可将H-2复合体分为三类基因：（1）类基因，位于K区和D区，包括K、D和L基因座；（2）类基因（Ir基因），位于区，编码Ia抗原。Ia抗原主要存在于B细胞、巨噬细胞、DC以及活化的T细胞上，而在其它组织细胞上均未能发现Ia抗原的存在；（3）类基因，指S区的基因。,二、人类MHC（HLA复合体） HLA复合体位于人第6号染色体短臂6p21.31，长约4000kb，已鉴定出224个基因座，其中128个为功能性基因，96个为假基因。HLA基因的分类方法：1、分成经典的HLA-、HLA-和HLA-类基因。2、按其产物的功能可分为三群，即经典HLA基因（类和类）、免疫功能相关基因和免疫无关基因。,（一）经典HLA基因所谓经典HLA基因，乃指其编码产物直接参与抗原提呈并决定个体组织相容性。 1、经典HLA-类基因 又称HLA a 基因，指HLA-A、HLA-B、HLA-C基因座位。编码类分子的重链。 其产物的组织分布极为广泛，且具有高度的多态性。2、经典HLA-类基因 指HLA-DP、DQ、DR基因亚区。它们编码的产物均为双肽链（、）分子。 类分子在个体水平具有极为丰富的多样性。某些HLA类基因可有2个或2个以上的 链功能基因，但一般只有一个 链功能基因。,（二）免疫功能相关基因 1、补体成分编码基因属于类基因，由编码C4B、C4A、Bf和C2等4种补体成分的基因座位组成。,M II C,2、抗原加工提呈相关基因（1）低分子量多肽 （low molecular-weight polypeptide, LMP）基因：包括LMP2和LMP7两个基因座位。均位于类基因区，其产物为存在于胞质溶胶中的蛋白酶体（proteosome）相关成分，参与对内源性抗原的酶解。,（2）抗原加工相关转运体（transporter associated with antigen peptide，TAP） 基因：包括TAP1和TAP2两个基因座位，均位于类基因区，其产物参与内源性抗原肽向内质网腔的转运。,（3）HLA-DM基因：包括DMA和DMB座位，位于类基因区，其产物参与APC对外源性抗原的加工提呈，帮助溶酶体中的抗原肽进入MHC类分子抗原肽结合槽。,（4）HLA-DO基因： 位于类基因区，包括DOA和DOB两个座位，分别编码DO分子的链和链。DO分子能与DM分子稳定结合，以DM/DO复合物形式存在，参与对DM功能的负向调节。（5）TAP相关蛋白基因： 位于类基因区，其产物为TAP相关蛋白（TAP-associated protein，又称tapasin ）。该蛋白参与内源性抗原的加工提呈，主要对类分子在内质网中的装配起关键作用。,TAP1,TAP2,3、非经典HLA类基因 非经典HLA类基因又称HLAb基因，即b型类基因，包括HLA-E、HLA-F、HLA-G等。（1）HLA-E基因： 其产物可提呈自身抗原肽（经典HLA类分子和HLA-G分子先导肽）给NK细胞的凝集素型抑制性受体CD94/NKG2 ，调节NK细胞等杀伤细胞的活性。,（2）HLA-G基因： 其产物主要分布于母胎界面胎儿绒毛外滋养层细胞，可与NK细胞抑制性受体结合，发挥抑制效应。,4、炎症相关基因均位于HLA 类基因区靠类基因区一侧。（1） 肿瘤坏死因子基因家族： 包括TNF （TNF-）、LTA（LT/TNF）和LTB（LT）三个座位。其产物参与炎症、抗病毒和抗肿瘤免疫应答。,（2）转录调节基因或类转录因子基因家族： 包括类 -B（ BL）基因，可参与调节DNA结合蛋白NF-B的活性。（3）MHC类相关基因（MC）家族： 包括MCA和MCB基因，主要表达于肠粘膜上皮细胞，是NK细胞和CD8+T细胞表面激活性受体NKG2D的配体，参与细胞毒作用。 （4）热休克蛋白基因家族： 如HSP70基因，其产物参与炎症和应激反应，并作为分子伴侣在内源性抗原的加工提呈中发挥作用。,（三）免疫无关基因 HLA复合体中还有一些免疫无关基因，如位于类基因区、参与类固醇合成的21羟化酶基因（CYP21），以及一批无产物表达的假基因。,第二节 HLA分子结构,一、HLA-类分子结构,HLA-类分子均由一条重链（ 链） 和 一条轻链（2m）以非共价键连接而 成。 链的N端在细胞外，C端插入胞内， 2m游离在胞外。 链由HLA 类基因编码，2m由非HLA基因编码（15号染色体）。 2m 氨基酸序列高度保守，不呈同种异型性。2m以非共价键与1、2和 3功能区相互作用，对维持HLA 类分子天然构型的稳定性及其分子表达具有重要意义。HLA类分子几乎在所有有核细胞表面都表达，包括血小板和网织红细胞。,HLA-类分子的功能区,1、肽结合区由1和 2功能区组成，为可变区域，也是HLA类分子的多态性或同种异型的分子基础。1和2构成肽结合槽（peptide-binding cleft），是结合抗原肽的部位。2、免疫球蛋白样区由3和2m组成。 3和2m均属IgSF C1型结构域。 3功能区是和CD8分子结合的部位。,3、跨膜区： 由约25个疏水性氨基酸残基组成，以螺旋状穿过胞膜的脂质双层，并将类分子锚定于细胞膜上。4、胞内区： 约含30个氨基酸残基，其性质高度保守，并具有数个cAMP依赖的蛋白激酶和酪氨酸激酶的磷酸化位点。 可参与跨膜 信号传递。,二、HLA-类分子结构,表达在细胞膜上的HLA-类分子，均由、两条跨膜肽链组成，其C端均插入胞浆。两条肽链均为HLA基因编码，具有多态性。HLA类分子主要表达于抗原提呈细胞（APC）上，如树突状细胞、B细胞、单核-巨噬细胞、活化T细胞等。,HLA-类分子的功能区1、肽结合区 由1和1功能区组成，为可变区域，此两区均是多态性或同种异型所在部位，共同构成肽结合槽，是抗原肽结合部位。2、免疫球蛋白样区 由2和2功能区组成，此两区氨基酸序列变化很少，为非多态性。均属IgSF C1型结构域。此区是与CD4分子结合的部位。,3、跨膜区 含有25个aa，形成螺旋状穿过细胞膜。4、胞内区 含有1015个aa，可参与跨膜信号传递。,第三节 MHC分子表达,一、MHC-类分子的表达,（一）MHC-类分子装配和运输在内质网合成的链先与钙连接蛋白（calnexin）结合，再与2m 组装成三聚体，以防止未结合多肽的“空载”MHC类分子链在胞内转移或被降解。与类分子结合的多肽来自胞浆或核蛋白，如自身蛋白、病毒蛋白。它们在胞浆中经蛋白水解酶（如LMP）裂解为多肽前体，后者可能与HSP结合后运输给TAP，最后进入内质网腔。,在内质网腔，多肽替代calnexin与类分子结合，构成链-2m-多肽三聚体，然后从内质网中释放出来，穿过高尔基复合体运送到细胞表面。细胞表面的类分子，多数是结合了多肽的较稳定的三聚体，也有空载的不稳定的类分子，后者易丢失2m 而成极易被降解的单体链。空载的类分子也可从细胞外介质中结合多肽形成三聚体。,（二）MHC-类分子在细胞表面表达,MHC类分子几乎在所有有核细胞表面都表达，包括血小板和网织红细胞。虽然许多细胞都表达类分子，但不同细胞所表达的类分子水平不同，其中以淋巴细胞、白细胞表达最高，而成纤维细胞、肌细胞、肝细胞、神经元表达很少，因而这些细胞在同种移植时较少诱发排斥反应。另外，有些细胞不表达类分子 ，如脑细胞、分化在某一阶段的精细胞、胎盘细胞。,二、MHC-类分子的表达,（一）MHC-类分子装配和运输类分子的 链和 链在内质网上合成后装配成异二聚体。由于二聚体的不稳定性，需与一辅助分子Ii链结合，以（ Ii）3异九聚体的形式存在，其肽结合槽被CLIP （class II associated invariant chain peptide，II类分子相关的恒定链多肽） 封闭。Ii 链的功能： 有助于类分子组装、折叠和转移，阻止早期合成的MHC 类分子与多肽结合，并有利于类分子在细胞内的正确移位和稳定新合成的MHC类分子的结构。,（ Ii）3异九聚体由内质网腔穿越高尔基体，形成M II C（ MHC class compartment，MHC 类小室），与含抗原肽的内体（endosome）和溶酶体（ lysosome ）结合，在这里Ii链被降解，仍有CLIP，在HLA-DM帮助下CLIP解离，沟槽暴露出来，抗原肽才有可能与类分子结合，形成稳定的MHC 类分子-抗原肽复合物，转运至细胞膜表面。,M II C,（二）MHC类分子在细胞表面的表达,MHC类分子主要表达于APC （如树突状细胞、B细胞、单核-巨噬细胞）、活化T细胞、胸腺上皮细胞等。静止状态的单核细胞和巨噬细胞表达类分子甚少，但是活化时表达显著增强。大多数动物的活化T细胞也表达类分子（小鼠例外）。,第四节HLA复合体遗传特征,HLA基因及其产物具备某些不同于其他真核基因系统的特点，具体表现在以下几个方面：,一、多基因性（polygeny）是指HLA复合体含多个不同HLA 和类基因，其编码产物具有相同或相似的结构和功能。,二、单元型遗传,HLA复合体是紧密连锁的，这些连锁在一条染色体上的等位基因很少发生同源染色体间的交换，从而构成一个单元型（haplotype）。在遗传过程中，HLA单元型作为一个完整的遗传单位由亲代传给子代。父母双方均各有2条HLA染色体，即二倍体（diploid）。,HLA表型、基因型与单元型是有区别的表型（phenotype）：某一个体的HLA抗原特异性型别。即表型是HLA基因所表达的抗原产物。基因型（genotype）： HLA基因在体细胞两条染色体上的组合。单元型（haplotype）： HLA基因在同一条染色体上的组合。,三、高度多态性,（一）多态性的概念多态性（polymorphism）指在一随机婚 配群体中，染色体上一个基因座位（locus） 上存在多个等位基因（allele）。等位基因：位于同源染色体上对应位置的一对基因。对某一个基因座位，一个个体最多只能有两个等位基因，分别出现在来自父母方的同源染色体上。因而MHC的多态性是一个群体概念，指群体中不同个体在等位基因拥有状态上存在差别。多态性指群体中各座位等位基因的变化,（二）造成多态性的原因,1、复等位基因（multiple alleles） 复等位基因：由于群体中出现的突变，同一座位所可能出现的基因系列。对某一个体来说一个基因座只有一对等位基因，复等位基因是群体的概念。 HLA存在为数众多的复等位基因，复等位基因是HLA高度多态性的最主要原因。HLA-A、B和C的复等位基因分别为282、537和135个，HLA-DRB1与HLA-DPB1的复等位基因分别为418和106个。而且不断有新的复等位基因被发现。,2、共显性（codominance）一对等位基因同为显性表达，此为共显性。HLA复合体中每一对等位基因均为共显性。即在杂合状态下，同源染色体上的等位基因均表达相应产物。由此，共显性大大增加了人群中HLA表型的多态性。,（三）HLA多态性的产生及其意义一般认为，HLA复合体通过基因点突变、基因重组（同源染色体之间的交换）、基因转换等 机制导致其基因结构发生变异，这是HLA多态性形成的基础。 这些不断产生的大量变异能否以等位基因形式保留下来，则取决于自然选择。,四、连锁不平衡,HIA复合体各等位基因均有其各自的基因频率。基因频率是指群体中某一特定等位基因的数目占该座位各等位基因数目总和的比例。分属两个或两个以上基因座位的等位基因，同时出现在一条染色体上的几率高于随机出现的频率，即为连锁不平衡（linkage disequilibrium）。换言之，连锁的基因并不是随机组合的，而是某些基因比其他基因能更多或更少地连锁在一起.,在HLA复合体中已发现50对以上等位基因显示连锁不平衡，其产生的机制不清楚。由于存在连锁不平衡，某些单元型在群体中可呈现较高的频率，并较之单一HLA基因型别更能显示人种和地理的特点。在单元型的检出率也同样有差别，如北欧人以HLA-A1、B8，HLA-A8、B7两个单元型最常见，黄种人以HLA-A9、B15和HLA-A2、B空白抗原的单元型较常见，我国汉族人以HLA-A2、B46，HLA-A11、B40和HLA-A2、B40单元型最常见。,第五节 HLA等位基因及其编码产物的分类与命名,一、HLA基因的命名原则,人类HLA基因命名方法为：HLA+连字符（-）+基因所属座位名+星号（*）+ 4位数编号。星号（*）前为基因座位，星号后为等位基因。以大写字母A、B、C表示HLA遗传区域中的座位名。 如HLA-A*0103、 HLA-DRB1 *1102HLA等位基因以4位数字表示，前2位表示主型，后2位表示亚型，其中主型命名是以该等位基因产物的型别（即血清学检出的抗原特异性）为基础。如A*0101和A*0102两个基因的产物都是血清学方法检出的A1抗原，但它们DNA序列不同。所以血清学分型为同一种分子的，它们的编码基因可以是不同的。,HLA基因命名也可用于该基因产物的命名。对类基因来说，基因命名与产物命名相同，例如HLA-A*0201代表基因，“HLA-A*0201分子” 代表基因产物。由于类分子中HLA-DQ和HLA-DP分子由2个多态性基因编码，其产物用2个编码基因命名，如：HLA-DQA1*0501/DQB1*0201，HLA-DPA1*0103/DPB1*0201HLA-DRA1基因没有多态性，所以HLA-DRB1基因可用于命名其产物，如HLA-DRB1*0501基因命名可作为HLA-DR*0501分子的命名。HLA类A基因和B基因的产物分别用对应的希腊字母表示，即链和链。,二、已检出的HLA抗原,至2003年，已确定的HLA等位基因总数已经达到1695个其中HLA-A（282）、HLA-B（537）、HLA-C（135）、HLA-DRA（3）、HLA-DRB（418）、HLA-DQA1（24）、HLA-DQB1（55）、HLA-DPA1（20）、HLA-DPB1（106）、HLA-E（6）、 HLA-F（2） 、 HLA-G（15） 、HLA-DMA（4）、 HLA-DMB（6）、 TAP（10） 、HLA-DOA（ 8 ）、 HLA-DOB（ 8 ）、 MICA（56）。,已检出的抗原特异性164种。 其中HLA-A（28）、HLA-B（61）、HLA-C（10）、HLA-DR（24）、HLA-DQ（9）、HLA-DP（6）、HLA-Dw（26）。HLA-A、B、C、DR、DQ抗原特异性用血清学技术检测，HLA-Dw特异性采用混合淋巴细胞培养技术检测。Dw代表了激发同种异体淋巴细胞增殖的淋巴细胞激活决定基（LAD），是DR、DQ等类基因产物效应的总和，因而没有单独的Dw等位基因座位。,第六节 MHC分子与抗原肽的相互作用,一、肽结合槽的结构,（一）MHC-类分子1和2组成的一个沟槽（cleft）。沟槽两侧各由1和2一部分氨基酸残基所形成的 螺旋，沟槽底部由1和2的各4个折叠组成。沟槽呈封闭状。沟槽长约2.5nm、宽1.0nm、深1.1nm，可容纳811个氨基酸残基组成的多肽，以9肽多见。,（二）MHC-类分子 1、1组成的沟槽，两侧也有 螺旋，底部有 折叠，但沟槽是开放的，最大可容纳25个氨基酸多肽，一般结合1218多肽，以15肽为最常见。,二、抗原肽和MHC分子相互作用的分子基础,MHC分子与抗原肽结合具有高度亲和力，此乃保证MHC分子有效提呈抗原的前提。,MHC分子与抗原肽的共同基序相结合抗原肽往往带有两个或两个以上专司与MHC分子肽结合槽相结合的特定部位，称锚定位。该位置的氨基酸残基称为锚定残基（anchor residue）。锚定残基的组合称为基序（motif）。 MHC分子的肽结合槽中容纳锚定残基的位置形成口袋（ pocket ），不同MHC分子其氨基酸结构的差异主要体现在口袋的大小（size）、形状（form）和电荷（charge）不同。与同一型别MHC分子结合的不同抗原肽，其锚定位和锚定残基往往相同或相似。,如：进入HLA-A*0201分子凹槽中的九肽（或十肽）都有两个锚定位：第2位（P2）皆为亮氨酸（L）或甲硫氨酸（M）；而第9位（P9）皆为亮氨酸或缬氨酸（V）。因此，HLA*0201分子所接纳的抗原肽均有一个特征性的共同基序（consensus motif），即x-L/M-x-x-x-x-x-x-L/V（x代表任意氨基酸残基）。该处锚定位是P2和P9，锚定残基分别是L/M和L/V，而中间P3 P8的残基组成带有较大的任意性。,再如：HLA-B*2705所结合的九肽。其锚定位也是P2和P9，只是锚定残基的组成有变：P2皆为精氨酸（R），而P9为亮氨酸或苯丙氨酸（F）。由此显示，B*2705分子接纳抗原肽所要求的共同基序是x-R-x-x-x-x-x-x-L/F。这表明，MHC分子通过特定的共同基序显示和抗原肽结合的专一性。,HLA类分子情况比较复杂：进入HLA类分子肽结合槽的几种抗原肽，其长度虽变化于13 17个氨基酸之间，但中段仍有对应于类分子的9肽结构参与构成锚定残基，但格局比较复杂。如类分子HLA-DRB1*0405锚定位为P1、P4、P6和P9，除P9的氨基酸组成（E和D）相对单一外，其他位置皆包括四种以上的不同氨基酸残基可供替换。显然，适于DRB1*0405分子所接纳的抗原肽，其共同基序远比类分子复杂。,三、抗原肽和MHC分子相互作用的特点,1、特定的MHC分子可凭借所需要的共同基序选择性地结合抗原肽，两者的结合具有一定的专一性。（1）抗原肽必须是线性结构；抗原肽与MHC分子以非共价键结合；MHC分子不能区别自己肽和非己肽。（2）与MHC-类分子结合以9肽多见，与MHC-类分子结合以15个肽多见。,2、不同MHC分子可选择性地结合具有不同锚定位和锚定残基的肽段 不同MHC等位基因产物有可能提呈同一抗原分子的不同表位，造成不同个体（带有不同的MHC等位基因）对同一抗原的应答在强度上出现差异。,3、 MHC分子与抗原肽结合的包容性（flexibility）包容性：MHC分子与抗原肽的结合无严格的专一性，而是一种MHC分子可结合带有特定共同基序的一群抗原肽。这一包容性体现在不同层次： 组成共同性基序的“x”氨基酸，其顺序和结构可变； 特定MHC分子所“选择”的锚定残基并非专一，以至相当数量的肽段可“符合” 特定共同基序的条件，造成一种MHC分子可结合多种抗原肽，活化多个抗原特异T细胞克隆； 不同MHC分子（同一家族）所接纳的抗原肽，可拥有相似的共同基序。,第七节MHC的生物学功能,一、参与抗原加工和提呈 MHC分子是参与抗原加工、处理和提呈的关键分子。其最主要功能是作为抗原提呈分子，把结合的抗原肽提呈给T细胞。,二、参与免疫细胞间相互作用的限制性,1、MHC限制现象： TCR在特异性识别APC所提呈的抗原肽过程中，必须同时识别与抗原肽形成复合物的MHC分子，这一现象称MHC限制性（MHC restriction）。Tc细胞所介导的特异性免疫杀伤作用也有MHC限制性。2、MHC限制性本质： 目前已知，T细胞识别抗原要有两种识别，一是TCR与MHC抗原结合槽中的特异性多肽结合；另一是TCR识别肽结合槽两侧同种异型部位的 螺旋结构。,三、参与T细胞分化成熟及中枢自身耐受的建立 MHC分子参与胸腺细胞分化和成熟过程。如在阳性选择中，T细胞两大亚群分化过程有赖于它们对MHC分子的识别。在阴性选择中，在MHC分子-自身肽诱导下，T细胞获得了识别自身与非己抗原的能力。,四、辅助TCR识别结合抗原当TCR与抗原肽-MHC复合物结合的同时，CD4分子与MHC类分子2功能区；CD8分子与类分子 3 功能区结合，从而稳定了TCR与抗原肽-MHC分子复合物的特异性结合，故称CD4/CD8分子为共受体。,五、参与免疫应答的遗传控制 机体对特定抗原物质是否产生应答以及应答的强弱受遗传控制，而控制免疫应答的基因（Ir基因）一般认为也位于人的HLA 类基因区内。MHC分子的表达与否或表达的量的多少可影响机体免疫应答的强弱，所以MHC参与个体和群体的免疫应答的调控。此也称为MHC对免疫应答的遗传控制。 另外，MHC分子可参与抗原提呈并制约免疫细胞间相互作用，从而调控机体免疫应答的发生及其强度。,六、引起移殖排斥反应,同种异体组织移植时，若供受体移植抗原不匹配，将会诱发受体产生明显的移植排斥反应。虽然MHC类和类分子均是主要移植抗原，但这两类抗原在移植中所起的作用是不相同的。MHC类分子错配启动了免疫应答，而MHC类分子错配是导致排斥反应发生的靶分子。因此临床上器官和骨髓移植时，要首先选择与受体HLA类和HLA类分子匹配的供体，其次选择与HLA类分子相配的供体，HLA类分子匹配比HLA类分子更重要。,第八节HLA与临床医学,一、HLA与疾病的关联（一）HLA是机体对疾病易感的主要遗传成分HLA与疾病关联，是指带有某些特定HLA型别的个体易患某一疾病（阳性关联）或对该疾病有较强的抵抗力（阴性关联）。如强直性脊柱炎（AS）和HLA-B27阳性关联。迄今，记录在案与HLA关联的疾病达500余种，大部分为自身免疫病。,（二）与疾病关联的原发成分,1、类风湿性关节炎（RA）以DR4为主要关联成分的疾病。2、乳糜泻（CD）乳糜泻的原发关联成分是和DR3呈现连锁不平衡的HLA-DQA1*0501及DQB1*0201。,3、胰岛素依赖型糖尿病（IDDM）易感性原发关联成分是DQA1*0301和DQB1*0201，中国汉族人群次级关联成分是DR3/DR9 。4、多发性硬化症（MS）关联成分为DR2中的DRB1*1501，并有RB3*0101参与。,二、HLA分子的异常表达和临床疾病,所有有核细胞表面表达HLA类分子，但恶变细胞类分子的表达往往减弱甚至缺如，以致不能有效地激活特异性CD8+ CTL，造成肿瘤逃脱免疫监视。与此相反，某些自身免疫病中，原先不表达HLA类分子的上皮细胞，可被诱导表达类分子，如胰岛素依赖型糖尿病中的胰岛细胞、乳糜泻中的肠道细胞、萎缩性胃炎中的胃壁细胞等。可能和它们促进免疫细胞的过度活化有关。,三、HLA与器官移植,器官移植的成败主要取决于HLA等位基因的匹配程度。不同的移植对HLA配型的要求不同，骨髓移植要求最高，肾移植就相对要求低些，而角膜移植则基本没什么特殊要求。器官移植需确定供受者间的组织相容性，涉及HLA分型（typing）和交叉配型（cross-match）。肾移植时主要检测HLA- DR、B和A位点。 骨髓移植时一般选择HLA全相同者作为供者。为预防GVHR病。,四、HLA其他临床意义,（一）HLA与输血多次接受输血的患者体内可产生抗HLA抗体，从而发生因白细胞或血小板受到破坏而引起的输血反应。（二）HLA与母胎关系 成熟的胚胎滋养层细胞不表达经典HLA-类抗原，而表达HLA-G抗原，此与母亲对胎儿（携带父方HLA单元型）的耐受有关。,五、HLA与亲子鉴定和法医学,HLA系统所显示的多基因性和多态性，意味着两个无亲缘关系个体间，在所有HLA基因座位上拥有完全相同等位基因的机会几乎等于零。再者，每个人所拥有的HLA等位基因型别一般终身不变，因而特定等位基因及其以共显性形式表达的产物，可以成为个体性（individuality）的一种遗传标志。由此，HLA分型已在法医学上被广泛地用于亲子鉴定和确定死亡者的身份，也能用于断定犯罪嫌疑人。,第九节 HLA检测技术,一、 血清学分型技术（一） HLA-类抗原的检测HLA-A、B、C抗原型别鉴定均借助微量淋巴细胞毒试验或补体依赖的细胞毒试验（CDC）。原理：取已知HLA抗血清加入待测外周血淋巴细胞，作用后加入兔补体。充分作用后加入染料（台盼蓝或伊红），在倒置显微镜下判断结果，着染的细胞为死亡细胞，表示待检淋巴细胞表面具有已知抗血清所针对的抗原。也可用荧光染料（EB）代替伊红或台盼蓝，在荧光显微镜下观察。,（二） HLA-DR、DQ抗原检测HLA-DR、DQ抗原分型方法同HLA-类抗原，但所用抗血清须经过血小板吸收以去除针对类抗原的抗体。另外，待测细胞须是经纯化的B细胞。,二、 细胞学分型技术,细胞学分型法是用混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction, MLR）作为基本技术，通过测定受检淋巴细胞对标准分型细胞的增殖反应进行分型判定的方法。纯合子分型细胞（homozygous typing cell, HTC）分型法（阴性分型法）：标准分型细胞为纯合子分型细胞，由于该种细胞一对同源染色体上的两个单元型完全相同，所以只表达一种HLA-类抗原。其与受检淋巴细胞混合进行MLC时，若受检淋巴细胞抗原与HTC相同，则不发生或仅出现轻微的增殖反应。通常可用来检测HLA-Dw特异性。,预致敏淋巴细胞分型法（primed lymphocyte typing, PLT） （阳性分型法） ：采用已知的致敏淋巴细胞作为应答细胞，当用灭活的受检者淋巴细胞作为刺激细胞时，若出现再次应答反应，则表明受检者细胞表面的HLA-类抗原型别与已知预致敏淋巴细胞的型别相同。此方法常用来测定HLA-DP特异性。由于分型细胞来源困难以及操作手续繁琐，细胞学分型技术正逐渐被淘汰。,三、DNA分型技术,（一）PCR-RFLP技术不同个体HLA DNA位点