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文档简介
.第1,1章细胞的分子组成,第3节有机化合物和生物大分子,实验1:检测生物组织中的碳水化合物、脂肪和蛋白质,2,实验:生物组织中的碳水化合物、脂肪和蛋白质检测,实验原理:特定的化学试剂会对生物组织中相关的有机化合物产生特定的颜色反应。化学试剂有机化合物特定颜色,还原糖菲林试剂砖红色沉淀脂肪手段(或苏丹)染料橙色(或红色)蛋白质双尿素试剂紫色淀粉碘蓝色,水浴加热。3,1,可用性还原糖检测:(1)原理:还原糖菲林试剂砖红色沉淀。(2)材料选择:苹果、梨、白萝卜。高糖,颜色白色或接近白色的植物组织。(3)测试过程:水浴加热,振动混合,50 65 水浴加热2分钟,2mL组织样品,刚准备的菲林试剂2ml,浅蓝色,砖红色(Cu2O),还原糖蔗糖、淀粉和纤维素是非还原糖。4,将质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液混合后,立即产生浅蓝色Cu(OH)2悬浮液。Cu(OH)2可以用葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖和共热制出砖红Cu2O沉淀物。因此,通过此反应可以证明样品溶液中含有可用性还原糖。r-CHO 2 Cu(oh)2r-coach Cu2O,2h2o,a-液体b液体混合成相同的量,目前使用,不能分开掉,也不能放很长时间才能使用。5,组织样品液体,梨或苹果的准备,粉碎,5g就寝,洗脸,洗涤,剥皮,切开,过滤,滤液,(单纱布),显色反应,试管中2ml组织样品,试管中2ml新建,砖红糖(还原糖)雨(菲林试剂)经常很好吃,6,2毫升组织样本,1毫升新准备的菲林试剂,5065 的水浴加热约2分钟,观察颜色变化,砖红,天蓝色,棕色,菲林试剂: a液体:0.1g/MMS,7,还原糖的检查结果表明,菲林试剂和可溶性还原糖在水浴热的条件下产生砖红Cu2O沉淀。-CHO Cu(OH)2悬浮,-coh Cu2Og(砖红色),8,2,脂肪检测,(1)材料选择:浸泡在种皮中的花生种子。(2)测试过程:制作,选择放在干净的载体幻灯片中央的最薄的切片制作临时雕塑:蒸馏水12滴,封面幻灯片,染色:床单上的苏丹23滴染料,染色23分钟,芙蓉清洗:用吸水纸染料,酒精12滴50%苏埃三世(苏丹三世)用橙色胭脂(脂肪),切片:花生种子(3-4h淡菜),去皮,把子叶切成薄片。视野中有橙色粒子,9,橙色小圆粒子为脂肪粒子,脂肪苏丹(或苏丹)染料橙色(或红色),10,11,注意事项:(1)以花生种子为实验材料,应提前3 4小时浸泡,浸泡时间短,切片不容易,浸泡时间长,组织太软,切片不容易形成,切片应尽量切成薄片。(2)染色后,必须用酒精溶液的50%冲洗浮色(酒精可以溶解苏丹iii),染色和浮色时间不能太长。(。,12,3,蛋白质检测:(1)原则:蛋白质缩脲试剂紫色复合物,(2)选择:大豆和蛋清(稀释),牛奶,豆奶,(3)检测过程:2ml组织样品反应式为:biurea (H2NOC-NH-CONH2)能在Cu2和碱性环境(NaOH)中产生紫色配合物,这种反应称为biurea反应。蛋白质分子中包含的肽结合结构类似于缩脲结构,因此蛋白质也可以引起缩脲试剂和颜色反应。双缩脲双缩二脲试剂,14,无色,紫色,(制造碱性条件),(提供Cu2),缩脲试剂B3-4滴,缩脲试剂A2mL,2mL组织样品,在碱性条件(NaOH)下结合蛋白质的肽因此,如果先添加a和b,a小于b,则Cu2+的蓝色将复盖生成的紫色。15,组织样品制备,大豆组织样品(或鸡蛋清纯稀释液),浸泡在大豆中,粉碎,过滤,滤液,剥皮,切片,蛋清,鸡蛋,蛋清稀释液,稀释,显色反应,16,蛋白质检测结果,17,注意事项:(1)如果用蛋清作为材料,就要充分稀释。否则,反应后产物将进入试管内壁,反应不全,试管不易清洗干净。(2) 缩微试剂: a液体:0.1g/ml NaOH;b液体:0.01g/mLCuSO4。先加a液体,再加b液体,不能超过b,所以不需要加热。(3)过量的缩脲试剂b与试剂a反应,使溶液呈蓝色,掩盖生成的紫色。(4)先放入2毫升液体,摇晃。加入B-液体3-4滴,摇晃。18,4,淀粉检测:(2)材料选择:土豆均匀化,(1)原理:淀粉碘蓝色,(3)检测过程:2毫升组织样本,2滴碘,观察颜色变化,19,准备组织样本,土豆块茎,粉碎,提取5g,研磨,洗涤,剥皮,切割,过滤,颜色反应,向试管中注入2ml组织等液体,添加5滴碘-碘化钾,观察现象,观察溶液的颜色变化:无色,20,苹果,梨,白萝卜,菲林试剂,砖红沉淀,花生种子,苏丹染料,苏丹染料,橙色,红色,豆奶,牛奶,蛋清,缩脲试剂,紫色,面粉地方的确认不一定要用显微镜,要观察地方粒子,必须用显微镜。21,5,观察细胞内DNA和RNA分布的实验原理:(1)DNA主要分布在细胞核内,RNA大部分存在于细胞质中。(2)甲基绿和皮拉红对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿使DNA看起来绿色,皮拉红使RNA看起来红色。(。(3)用甲基绿和吡红混合染色剂染色细胞,可以显示细胞内DNA和RNA的分布。(。(4)盐酸改变细胞膜的通透性,将染色剂注入细胞,同时从染色体分离DNA和蛋白质,有助于结合DNA和染色剂。(。甲基绿使DNA呈绿色,皮拉红使RNA呈红色,观察两种颜色出现的部位,判断细胞内DNA和RNA的分布。,22,方法步骤:(1)提取和生产,清洁玻璃片上1滴0.9%NaCl溶液,用消毒牙签刮口腔内壁,然后涂在液滴上,在酒精灯上干燥口腔上皮细胞涂层的幻灯片,(2)水解:干燥幻灯片30mL8%高倍镜后:观察细胞核和细胞质的染色。0.9%生理盐水?人口腔上皮细胞,8%盐酸?蒸馏水,30水浴,吡红甲基绿染发剂,萃取,水解,洗涤,染色,观察,24,思考和讨论:(1)9%Nacl溶液的作用?维持腔上皮细胞的正常形态。(2)8%盐酸的作用?杀死细胞,改变细胞膜的通透性,将染色剂加速到细胞;将染色体的DNA与蛋白质分离,有助于结合DNA和染色剂。(3)皮拉红甲基绿染发剂应激活。本实验不应使用绿色植物叶肉细胞(有颜色的)和其他颜色的细胞(如鸡血细胞)作为实验材料。因为会妨碍颜色观察。25,biurea反应:包含两个或多个肽结合的化合物和碱性硫酸铜作用,生成蓝紫色的复合物,26,菲林试剂与比利特试剂的比较,菲林试剂使用甲流和乙液,目前要用活性、混合、水浴加热。滴定剂用a液和b液先添加a液,然后将b液加热,不洗澡。28,菲林试剂和缩脲试剂由NaOH和CuSO4组成,但两种试剂有以下三点不同:溶液浓度不同。菲林试剂中NaOH的浓度为0.1g/mL,CuSO4的浓度为0.05g/mL;在缩脲试剂中,NaOH的浓度为0.1g/mL,CuSO4的浓度为0
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