CELL-清洗包装和消毒

清洗、包装和消毒,教学目的：,1、掌握玻璃、塑料器皿及胶塞的清洗方法。2、掌握常用物品的包装方法3、掌握常用的消毒方法及不同物品的消毒。,1清除表面残留的有毒有害物质及微生物。2改变玻璃表面性质。,纯化水的常用制备方法有两种：（1）去离子法与双蒸器结合法,1、纯化水制备,矿物盐、油脂、酸类、O2、CO2、H2S、Cl2,离子交换树脂,去离子水,双蒸器,三蒸水,（2）超纯水仪制备,纯化水制备应注意事项：,（1）.纯化水装置应放在洁净、无尘、清静的地方；（2）.贮在专用的玻璃瓶内,标记日期，最好随用随制。,2、去污剂的选择和使用,碱性去污剂和含重铬酸钾的浓硫酸洗液配合使用使用洗涤剂煮沸物品注意事项:（1）煮沸前的水面要高于器材5厘米；（2）水沸后再投入洗涤剂（直径35厘米的铝锅，用洗衣粉10克左右）（3）冷水时加入或加入过量洗涤剂均会引起玻璃的碱化,培养器具的材料、结构不同，清洗的方法有别。,3、物品的清洗,玻璃器皿类有效清洗需注意事项:（1）用后应立即浸泡（2）挑选合适的去污剂（3）流水冲洗干净后，再用去离子水和三蒸馏水漂洗；（4）洗后应倒立式放置在烘箱凉干或烘干；（5）用牛皮纸包装后，放置干净处，待消毒。,玻璃器皿的清洗：,常见的玻璃器皿：培养瓶、培养皿、转瓶、三角瓶、烧杯、量筒、漏斗,新的玻璃器皿处理方式：1.自来水刷洗，除去灰尘。2.烘干后浸入5盐酸中6小时以除去脏物、铅、砷等物。(除去碱质)3.刷洗、烘干：6小时后立即用自来水冲洗5-6遍，洗涤剂反复刷洗，用软毛刷，不留死角，自来水冲干净后烘干或自然晾干。,4.浸酸、清洗：浸酸6小时以上，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗20次，最后蒸馏水冲洗9次和用三蒸水洗3次（目的？）。5.烘干、包装：洗干净后先烘干或自然晾干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。6.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内消毒，120，30min。7.高压消毒后再烘干备用，并做好标记。,旧的玻璃器皿清洗步骤：浸泡、刷洗、浸酸、冲洗（1）浸泡：用后立即用自来水浸泡目的：1、用过的玻璃器皿上含有大量的蛋白质和油脂，干涸后不易刷洗掉2、不浸泡则夏天宜生虫,（2）刷洗：放在洗涤剂中反复刷洗，冲净晾干后备浸酸。注意事项：1、不留死角。2、防止破坏器皿表面的光洁度。3、用软毛刷。4、浸酸前要晾干或烘干，防止稀释酸液。,（3）浸酸（目的？）酸液又称清洁液,有强氧化作用。根据需要选用强酸、次强酸、弱酸及常用方。器皿被完全覆盖，不能有气泡，浸酸不少于六小时。器皿放入酸液时，小心操作，防止溅出，注意安全！,据含硫酸不同，分为常方、强酸、次强酸和弱酸四种：,清洁液分类,配制清洁液的步骤：,（1）选用合适容器（陶瓷、玻璃或耐酸塑料桶）；（2）按配方称量好重铬酸钾和蒸馏水，然后将重铬酸钾完全溶于蒸馏水中，可以加热助融；（3）冷却后，缓缓加入浓硫酸，切忌过急；（4）自然冷却、备用。,配酸和浸酸时应注意事项：,1）应加强防护，最好戴口罩、防护衣、防护镜、耐酸手套等。2）配制、盛装清洁液的容器应防酸、耐热、有较大的开口，一般用瓷缸、玻璃制品或耐酸塑料制品，不能用不锈钢桶。3)被清洗的物品应完全被充满和覆盖。4)浸泡时间不能少于6小时5)若清洁液的颜色变暗、发绿或混浊时，应弃去，配制新的。新的呈棕红色。,专用耐酸塑料容器。如图,（4）冲洗捞酸（检查手套是否漏）放入塑料盒（冲至无色、无气泡、干净，不干净的重新刷洗步骤），“注满自来水-倒空”或注入“2/3自来水后振荡冲洗”20次以上蒸馏水冲洗9次三蒸水3次烘干或晾干包装灭菌备用被污染的需要先用理化方法进行灭菌处理！煮沸30min或2-5%的盐酸中浸泡过夜。,（二）、瓶盖的清洗和包装,包括胶塞和聚丙烯盖清水浸泡洗涤剂刷洗自来水冲净蒸馏水冲洗三蒸水煮10min/次，3次（换水）烘干或自然晾干包装高压灭菌备用注意事项：胶塞和螺旋盖分开清洗、煮沸,（三）、橡皮管的清洗,用注射器反复用洗涤剂冲洗，再接在热水管上用热水冲洗去污剂，之后用蒸馏水灌洗，三蒸水灌洗，晾干或烘干。,（四）、塑料制品的清洗,包括：塑料培养板、针头式塑料小滤器等特点：、质地软、易出现划痕；、耐腐蚀能力强；、不耐热。清洗程序：使用后立即流水冲洗自来水过夜用纱布或棉签及洗涤液刷洗流水冲洗晾干浸酸15分钟流水冲洗20遍以上蒸馏水浸洗次三蒸水3次晾干备用。注射式薄膜滤器刷洗前先将上下两部分分开，按照上述方法清洗晾干后（在烧杯内浸酸），将滤膜夹在中间（光面向下），摆放于金属盒内或单独包装，高压灭菌备用,（五）不锈钢除菌滤器的清洗,洗涤液刷洗流水冲洗干净蒸馏水冲洗三蒸水冲洗滤器的内壁烘干或自然晾干棉布袋包装高压灭菌备用,（六）金属器械的清洗,包括：镊子，剪刀等（金属器皿不能泡酸）新的：先用沾有汽油的纱布擦去油脂流水冲净酒精棉球擦拭晾干。旧的：纱布擦去脏污自来水冲洗洗涤剂刷洗，自来水冲净蒸馏水冲洗75酒精擦拭（双蒸水配制）包装高压消毒备用。,包装是防止消毒灭菌后再次遭受污染。包装材料常用包装纸、牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、玻璃或金属制吸管筒、纸绳等。包装分为局部包装和全包装两类。,二、包装,二、包装,用于较大器皿,用于较小器皿,包装的方法：,1.瓶类2.小瓶皿、胶塞、刀剪等器械。3.吸管、滴管，滤器、滤瓶、橡皮管4.无菌衣、帽、口罩,三、消毒和灭菌,物理方法化学方法抗生素,（一）物理消毒法（种）1.紫外线消毒作用机制:直接:破坏核酸及蛋白质。间接:产生的臭氧杀死微生物。作用效果：消毒效果同其辐射强度和照射剂量呈正相关（紫外线照射工作台面不应超过，照射时间）注意事项：对皮肤眼睛有伤害，对培养细胞与试剂有不良影响，不能开着紫外灯工作,电离辐射消毒,作用机理：以放射性核素产生的射线或电子加速器产生的加速粒子辐射物品以杀灭微生物的方法射线由放射性核素60Co产生，加速粒子由电子加速器产生特点：灭菌时物品不升温；射线穿透力强，可直接对密闭包装物品进行消毒；诱变作用强，不适合消毒活生物材料电离辐射灭菌需专门设备，专业人员操作！,钴-60害了一家人1993年5月，山西省忻州市一位农民捡到忻州市科委辐照站的一个废弃放射源钴-60。他好奇地把这个亮晶晶的小东西放进了上衣口袋里，几小时后便出现了恶心、呕吐等症状，十几天后就死了。没过几天，在他生病期间照顾他的父亲和弟弟也因同样症状而相继去世，妻子也病得不轻。后经专家调查，发现那个废弃的钴-60是罪魁祸首，其放射性强度高达10居里，足以“照死人”。,.湿热灭菌（）高压蒸汽灭菌法原理：蒸汽的穿透力，使蛋白质变性凝固，微生物死亡普通物品：120,30min；培养用液及橡胶125，10min注意事项：1、消毒锅本身的洁净；2、包装方式和包装用品应有利于蒸汽的侵入和流出，还要有效的避免污染；3、消毒锅内不能堆积太满，要利于蒸汽穿过；4、消毒结束冷却时，应标记已消毒；5、取出消毒物后，应立即放到烘箱内烘干。（）煮沸消毒法,.干热灭菌（，90min-h）用于不能与蒸汽直接接触的物品及不会被高温损坏的物品。注意事项：、消毒后，先关闭电源，等温度降下来后再开烘箱门，防止骤冷导致玻璃器皿破损及外界空气进入；、物品之间要留有空隙，使物品尽量受热均匀；、放置物品时要远离热源物质，防止局部过热引起包装纸烧焦。.过滤除菌用于遇热不稳定的试剂或培养液。,按过滤介质即过滤板的结构归纳为三类：深度滤板，筛状滤板，膜状滤板膜状滤板孔径从0.1m到10m滤膜的性质：耐高温，可干燥加热到200。耐高压。,正压过滤系统程序,负压过滤系统程序,正压过滤优点：1）流速高，过滤快；2）可减少污染3）过滤蛋白质时可避免产生大量气泡。4）利于过滤沸点低的试剂。负压过滤：1）真空瓶与外界之间的任何微小通路都可能造成污染。）容器内呈真空，沸点低的试剂会不断挥发。,比较正压与负压过滤除菌,（二）化学消毒法,常用的化学消毒剂包括甲醛、环氧乙烷、乙醇、新洁尔灭、戊二醛、碘伏和碘酊、乳酸、来苏尔。1、甲醛水溶液和气体对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。消毒对象：无菌室内的空气和物体表面。,甲醛产生气体的方法：（1）多聚甲醛加热法：将多聚甲醛研成粉末，铺在金属板上，加热至150以上即产生甲醛气体。多聚甲醛用量为每平方米10-20g，作用时间12-24小时。,（2）甲醛水溶液蒸发法：将40%甲醛水溶液（福尔马林）倒入蒸发皿中，加热蒸发。福尔马林的用量为每平方米25ml，作用时间12-24小时。（3）氧化法：先将高锰酸钾放入一较大容器中，再倒入福尔马林，即氧化产生甲醛气体。福尔马林和高锰酸钾的用量为每平方米40ml和30g，作用时间以12-24小时为宜。,使用注意事项：,甲醛气体的穿透力差，熏蒸前应充分暴露物体表面；甲醛对人体有毒，应在气体完全散尽后再进入室内工作居室空气中甲醛的最高容许浓度为0.08毫克立方米。,2.乙醇对其他灭菌剂如戊二醛、碘伏、氯已定等有增效或协同作用，通用浓度为70-75的水溶液。乙醇不能杀死芽孢。塑料器皿消毒程序：75%酒精浸泡过夜三蒸水浸泡三次（10分钟/次）无菌条件下晾干紫外线照射1小时3.新洁尔灭又称苯扎溴铵0.1%水溶液可对器械、皮肤、操作表面进行擦拭和浸泡消毒。,4.氯乙定又称洗必泰具有相当强的广谱抑菌、杀菌作用，对革兰氏阳性和阴性菌的抗菌作用，主要用于皮肤及创面消毒。比新洁尔灭等消毒药强.,（三）抗生