皮肤科实验室检查技术操作常规.doc

常见皮肤科实验室检查技术操作常规一真菌（癣菌）直接镜检【方法】1取材部位：临床医师采取头癣，体癣，股癣，足癣，甲癣标本。2操作方法：将标本置于载玻片上，加一滴5-10%KOH，加盖玻片，在酒精灯火焰上过三次以消化角质蛋白，普通光学显微镜下检查。【结果判断】可见真菌菌丝和/或孢子，可判断为阳性。二毛囊虫（蠕螨）的检查【方法】临床医师采取，在扩张的毛囊口挤压出一点皮脂或用刀片刮出些皮脂，在载玻片加一滴液体石蜡或甘油，加盖片轻压使皮脂变薄，普通光学显微镜下检查。【结果判断】低倍镜下发现活的毛囊虫，可判断为阳性。三疥螨虫镜检【方法】1取材部位：临床医师采取标本。 2操作方法：将标本置于载玻片上，加一滴5-10%KOH（或加NS），加盖玻片，在酒精灯火焰上过三次以消化角质蛋白，普通光学显微镜下检查。【结果判断】见到以下任何一项均可判断为阳性。1成虫：低倍镜下看到完整或破碎的成虫。如用NS，有可能发现活动的成虫。2虫卵：可以见到虫体的同时见到成堆或散在的虫卵。四头，体，阴虱检查【方法】1取材部位：临床医师夹取标本。 2操作方法：将标本置于载玻片上，加一滴NS，加盖玻片，普通光学显微镜下检查。【结果判断】见到以下任何一项均可判断为阳性。1成虫：低倍镜下看到完整或破碎的成虫。如用NS，有可能发现活动的成虫。2虫卵：可以见到虫体的同时见到成堆或散在的虫卵。五阴道毛滴虫直接镜检【方法】在载玻片上加一滴温NS，用不涂润滑油的阴道窥器暴露子宫颈，在后穹隆，子宫颈等部位拭取分泌物混入温盐水中，立即在低倍镜下镜检。或用棉拭子蘸取阴道分泌娶后置于2ml温盐水小瓶中，混匀后取一滴在玻片上镜检。 也可取男性尿道分泌物，前列腺液或尿沉渣同法镜检。【结果判断】及镜下见到呈波状移动的毛滴虫为阳性。有时可见到毛滴虫周围的白细胞被推移。六念珠菌涂片检查【方法】根据病变部位的不同收集不同的标本。如果检查体液标本（如尿液或脑脊液）应在离心后去沉淀物。其他固体标本或分泌物标本可以直接涂片。 如为分泌物或体液沉渣，可将受检标本放置在载玻片上，加一滴无菌NS，加盖玻片后直接镜检。如果为固体标本（皮霄，甲霄），可加一滴10%KOH，加盖片后轻微加热，然后镜检。 必要时可以进行革兰染色或刚果红染色检查念珠菌孢子与菌丝，提高阳性率。【结果判断】镜下见到成群卵圆形孢子和由芽孢延伸成的假菌丝可判断为阳性。如果见到大量菌丝说明念珠菌处于致病状态。七细菌性阴道病(BV)检查（一）细菌性阴道病线索细检查【原理】患此病时，阴道正常菌群发生变化,杆菌减少或消失，而阴道加特纳菌、厌氧菌等生长。此外，加特纳菌和厌氧菌吸附在阴道鳞状上皮细胞表面，使细胞边缘模糊不清呈锯齿状，有特殊外观的线索细胞。对阴道分泌物作湿片涂片革兰染色，在显微镜下可观察线索细胞以及阴道菌群的变化。【方法】湿片法：在一载玻片上加一滴生理盐水，将阴道分泌物与生理盐水混合成悬液，加上盖玻片后，在高倍（400倍）镜下检查。 革兰染色：取阴道分泌物，涂片，作革兰染色，油镜（1000倍）下检查。【结果】线索细胞为阴道鳞状上皮细胞表面覆盖着许多球杆菌（主要是加特纳菌，有时合并有厌氧菌），使细胞呈斑点状、颗粒外观，细胞边缘模糊不清呈锯齿状。【临床意义】当线索细胞占全部上皮细胞的20%以上时，一般认为可诊断BV。湿片法诊断BV的敏感性在80%以上，特异性在90% 以上。革兰染色镜检观察阴道上皮细胞中线索细胞的敏感和特异性高于湿片法，分别89%和93%。（二）细菌性阴道炎病快速检测（脯氨酸氨基肽酶试验）该试验间接检测细菌性阴道炎相关的病原体产生的化学物质，国内有商品化试剂。阴道加特纳菌和游动钩菌属能产生脯氨酸氨基肽酶，而乳酸菌不产生该酶。将阴道分泌物与底物35.5相互作用4小时，加入指示剂后，观察颜色变化。呈现红色或者产生粉红色为阳性反应，黄色或者橘黄色为阴性。该试验的敏感性和特异性均为93%。八梅毒实验室诊断（一）梅毒螺旋体暗视野检查（一期梅毒硬下疳和二期梅毒扁平疣）（二）快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）（主要用于初筛和二期梅毒患者或治疗后随访，进行定量实验）（三）不需要加热血清反应素试验（USR）（二期梅毒患者或治疗后随访，应进行定量实验）（四）梅毒螺旋体血凝试验（TPHA） （主要用于确证试验）（五）梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA） （主要用于确证试验，分定性与定量试验）九淋球菌检查（一）淋球菌直接镜检（淋涂）【方法】1男性患者：先用NS拭尽尿道口，手指挤出尿道内脓液，用无菌棉拭子沾取脓液涂在载物玻片上。2女性患者取宫颈口脓液，用无菌棉拭子沾取脓液涂在载物玻片上。3自然干燥后，革兰染色或美兰染色待检。【结果判断】涂片中见大量多形核白细胞，细胞内有革兰氏阴性球菌，呈卵圆形或圆形，成对排列。为阳性结果。（二）淋球菌培养（淋培）【方法】临床取材后，立即接种于培养基中，不得冷藏后再接种。在5-10% CO2，37度培养24-48小时后观察结果。（市场上可见试剂盒）【结果判断】在血平皿可见圆形，平滑，透明或灰白色菌落，直径0.5-1.0mm，革兰氏染色阴性。必要时，做生化检查确定菌种。十衣原体检查（一）免疫荧光法【方法】临床取材后，立即涂片，无水乙醇室温固定15分钟，室温凉干，加荧光抗体标记的抗衣原体单克隆抗体，37度温育30分后，PBS洗涤三次。封片后在荧光显微镜下观察。【结果判断】阳性标本可以见到亮绿色包涵体。敏感性可达70-90%。（二）细胞培养法（三）快速酶分析法【方法】临床取材。市场上有沙眼衣原体快速试剂盒供应。【结果判断】显色带肉眼观察。简便，快速，不足之处在于敏感性较低。十一支原体检查（一）培养检查法【方法】临床取材后，取材后立即放到1ml支原体肉汤培养基中。37孵箱培养18小时后观察结果。阴性结果者连续观察七天。【结果判断】解脲支原体阳性：肉汤培养基由淡红变为红色（与接种管对比），但无明显浑浊现象。（二）支原体抗体（IgM,IgG）【方法】临床取材后，用快检卡方法检。现有三种支原体可致非淋病性尿道炎。即解脲，人型，生殖支原体。市场上有单一的或三合一的试剂盒。 【结果判断】显色带肉眼观察。简便，快速。 (三) 支原体药敏试验十二爱滋病抗体检测十三尖锐湿疣（CA）检查 【概述】 尖锐湿疣又称尖圭湿疣、生殖器疣（genital warts,GW）、性病疣（venereal warts,VW）。由人乳头瘤病毒（HPV）感染引起，主要是HPV6、HPV11、HPV16、HPV18型与本病有关。HPV通过皮肤粘膜的微小糜烂面进入人体，感染人体后，可潜伏在上皮基底细胞间，在表皮细胞层复制，然后HPV侵入细