紫外分光光度法检测荷叶中荷叶生物碱...ppt

1 紫外分光光度法检测荷叶中荷叶生物碱系科 医药与健康管理系班级 制药103答辩学生 胡指导老师 2 为了较准确的检测荷叶中荷叶生物碱含量 采用了紫外分光光度法 以荷叶碱为对照 溴甲酚绿为显色剂 在荷叶生物碱最大吸收波长415nm处进行测定 可得线性回归方程为y 14 12x 0 013 R 0 9998 n 5 说明了荷叶生物碱在0 02 0 10mg mL范围内线性关系良好 平均回收率达98 31 RSD为2 10 回收率为98 31 RSD 为2 10 此实验表明紫外分光光度法操作简便 灵敏度高 3 基本结构 1绪论2材料与仪器3方法4结果与分析5结论 4 1绪论 荷叶 荷叶为睡莲科植物莲的干燥叶 具有清暑化湿 升发清阳 减肥降脂 升发清阳 凉血止血之功效 主要用于暑热烦渴 暑湿泄泻 脾虚泄泻 血热吐衄 便血崩漏等症状 因此 测定总生物碱的含量对于控制其质量 确保疗效有重要意义 荷叶生物碱 多属于阿扑啡类生物碱 此类化合物具有显著的降脂减肥 抗病毒 抑菌 抗惊厥等药理作用 紫外分光光度法 由于各种物质具有各自不同的分子 原子和不同的分子空间结构 其吸收光能量的情况也就不会相同 因此 每种物质就有其特有的 固定的吸收光谱曲线 可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量 这就是分光光度定性和定量分析的基础 5 2材料与仪器 材料 1 标准品 荷叶碱 含0 85 生物碱的干荷叶 干荷叶 2 供试品 氯仿 溴甲酚绿 邻苯二甲酸氢钾 主要仪器与设备 紫外分光光度计 电子天平 数显恒温水浴锅 粉碎机 6 3方法 3 1溶液配制 1 溴甲酚绿溶液 称取溴甲酚绿0 10g 加入7 2ml的0 02mol LNaOH溶液溶解 蒸馏水定容至250mL 2 0 02mol lNaOH 称取0 08gNaOH于100ml的容量瓶中 加蒸馏水稀释至刻度 3 邻苯二甲酸氢钾缓冲液 将邻苯二甲酸氢钾粉末倒入250mL容量瓶中 用少量蒸馏水冲塑料袋内壁并稀释至刻度 4 80 乙醇 称取80ml食品学院提供的无水乙醇再加20ml的水 5 0 42mg ml荷叶标准品溶液 电子天平称取4 2mg荷叶标准品于10mL容量瓶中 加水至刻度线定溶 7 3 2荷叶生物碱最大吸收波长的确定 荷叶碱标准品及标准品经溴甲酚绿染色后的最大吸收波长称取4 2mg荷叶碱标准品于10mL容量瓶中 用氯仿溶解定容 以氯仿为空白 用紫外分光光度计在190 800nm下扫描 测得荷叶碱的紫外最大吸收波长 荷叶碱标准品染色后的最大吸收波长 精密称取4 2mg荷叶碱标准品于10mL容量瓶中 用氯仿定容 混匀 吸取1mL于10mL分液漏斗中 加入邻苯二甲酸氢钾缓冲液1mL 溴甲酚绿溶液1mL 振荡 加入5mL氯仿 振荡30s 静置30min 取下层氯仿液4mL 以标准品空白为对照 在紫外分光光度计的190 800nm下扫描 测得荷叶碱标准品经溴甲酚绿染色后的最大吸收波长 8 样品荷叶生物碱经溴甲酚绿染色后的最大吸收波长样品经溴甲酚绿染色后的最大吸收波长 称取荷叶2 0g 加入浓度为80 的乙醇80mL 于80 的恒温水浴加热 趁热过滤 用80 乙醇定容至80mL 即为样品液 吸取1mL样品液于10mL分液漏斗中 挥去乙醇 加入邻苯二甲酸氢钾缓冲液1mL 溴甲酚绿溶液1mL 振荡 加入5mL氯仿 振荡30s 静置30min 取下层氯仿液4mL 以未加样品液的乙醇试剂空白为对照 在紫外分光光度计的190 800nm下扫描 测出样品液经溴甲酚绿染色后的最大吸收波长 9 3 3荷叶碱标准曲线制备分别精密吸取荷叶碱标准品溶液0 02 0 04 0 06 0 08 0 10mL于5mL容量瓶中 氯仿定容 以试验得出的最佳含量测定条件操作 以试剂氯仿空白为参比液 在最大吸收波长处测定吸光度 制作标准曲线 3 4重现性实验按制备荷叶碱标准曲线的方法 取2mL浓度为0 02mg mL的标准品溶液5份 在415nm下测定吸光度值 10 3 5加样回收率实验 称取已知生物碱含量0 85 的同批荷叶2 0g 共5份 分别精密加入荷叶碱标准品溶液浓度为0 42mg mL各1mL 分别加入浓度为80 乙醇80mL 在80 下的恒温浴冷凝回流提取 趁热过滤 用80 乙醇定容至80mL 即为样品液 吸取1mL样品液按最佳含量测定条件操作 计算生物碱含量 分析加样回收率 11 4结果与分析 4 1荷叶生物碱最大吸收波长的确定 荷叶碱标准品用紫外分光光度计在190 800nm下扫描后在245 325nm处出现了波峰 经测量得知荷叶碱标准品的紫外最大吸收波长为273nm 12 荷叶碱标准品经溴甲酚绿染色后 溴甲酚绿染色后的荷叶碱标准品在415nm处有最大吸收波长 13 样品荷叶生物碱经溴甲酚绿染色后 经测量得知溴甲酚绿染色后的样品在415nm处有最大吸收波长 故本实验以415nm为含量测定最大波长 14 4 2荷叶碱标准曲线制备 不同浓度的荷叶碱标准品溶液在415nm处的吸光值标准曲线如图4所示 在最大吸收波长415nm处测定吸光度及其浓度对照图可得标准曲线图方程为y 14 12x 0 013 R 0 9998 n 5 表明荷叶碱在0 02 0 10mg mL范围内线性关系良好 15 4 3重现性实验 采用UV法测定5份0 02mg mL的标准品溶液荷叶碱含量 在415nm下测定吸光度值相近 平均值 标准偏差和相对标准偏差均较小 实验结果重现性好 采集到的数据较准确 16 4 4加样回收率实验 采用UV法测定收集液中的荷叶生物碱含量的加样回收率较高 为98 31 相对标准偏差为2 10 较小 应此该方法准确度较高 17 5结论 以荷叶碱为标准品 采用UV检测法检测荷叶碱波长为273nm 确定了经溴甲酚绿染色后荷叶生物碱的波长为415nm 通过分析 确定了简单易行的紫外分光光度法对其荷叶生物碱进行测定 建立了荷叶生物碱标准曲线 回归方程为y 14 12x 0 013 R 0 9998 n 5 平均回收