【毕业学位论文】（Word原稿）寡聚半乳糖醛酸的酶解制备及其铜螯合物对小鼠生长特性的影响农产品加工与贮藏工程硕士论文

密级： 论文编号： 中国农业科学院 学位论文 寡聚半乳糖醛酸的酶解制备及其铜螯合物 对小鼠生长特性的影响 ats ats 国农业科学院硕士学位论文 I 摘 要 本文以来源 丰富、价格低廉的 商品苹果果胶为原料，用 4 种不同的商品果胶酶水解果胶和果胶酸制备寡聚半乳糖醛酸，通过多次对比试验，筛选得到产寡聚半乳糖醛酸的最佳果胶酶 优势底物为果胶酸，最佳条件为 55 ，反应 30 和底物比 1 10（底物浓度 2%）；由离子色谱法和薄层层析法检测得知在此条件下寡聚半乳糖醛酸的产率大于 其中以二糖和三糖为主，产率分别为 通过二次硅胶柱层析法将此条件下制备的寡聚半乳糖醛酸进行分离纯化，得到了 31.8 乳糖醛酸二糖组分和 24.0 糖组分；将此两种组分通过 电喷雾电离质谱 维核磁共振 1H 13C 二维核磁共振 11测分析，结果为 半乳糖醛酸二糖组分是由两分子半乳糖醛酸通过 糖苷键 组成的不带有甲氧基的半乳糖醛酸二糖，半乳糖醛酸三糖组分是由三个半乳糖醛酸通过 糖苷键 组成的不带有甲氧基的半乳糖醛酸三糖，其纯度均达到 95%以上；将 5%寡聚半乳糖醛酸水溶液，在常温下与等体积 溶液混匀，制备得到 了寡聚半乳糖醛酸铜螯合物，得率为 其 量为 在饲料中分别添加含等量 寡聚半乳糖醛酸铜螯合物与 喂小鼠，发现需在饲料中添加含 4 倍以上份量 能达到添加寡聚半乳糖醛酸铜螯合物的促生长效果 ； 与添加 比，添加寡聚半乳糖醛酸铜螯合物对减少小鼠肝脏、血液和粪便中的 量效果显著，其减少率分别为 关键词： 寡聚半乳糖醛酸 苹果果胶 分离纯化 结构测定 螯合物 中国农业科学院硕士学位论文 n by of 55 , 0 of 1 10 (2% by of a of 2 , of by 1.8 mg 4.0 mg 1H 13C 11, 4) of 1, 4) of of 5%. A of in % 1:1, v/v) at of of s To as of of of in of 国农业科学院硕士学位论文 录 第 1 章 绪论 . 1 聚糖醛酸简介 . 1 聚糖醛酸定义及来源 . 1 聚糖醛酸的生物功效 . 2 聚半乳糖醛酸的研究进展 . 2 聚半乳糖醛酸化学结构和理化性质 . 2 聚半乳糖醛酸的来源 . 2 聚半乳糖醛酸的检测 . 3 聚半乳糖醛酸的分离纯化 . 3 聚半乳糖醛酸的化学结构测定 . 4 聚半乳糖醛酸的应用和潜在价值 . 4 胶生物酶法制备寡聚半乳糖醛酸的现状 . 5 究目的意义 . 6 究内容和目标 . 6 术路线 . 7 第 2 章 果胶酶降解果胶制备寡聚半乳糖醛酸 . 9 言 . 9 验材料 . 9 要试剂 . 9 要设备 . 9 验方法 . 10 烯酰胺凝胶电泳（ 果胶酶 . 10 胶酸的制备（ 988） . 11 解反应 选择 . 11 解反应温度的选择 . 11 解反应加酶量的选择 . 11 解反应时间的选择 . 11 物和酶的选择及产物组成的测定 . 12 测方法 . 12 胶酸酯化度的测定 . 12 胶酶酶活测定方法 . 12 接还原糖（ 测定 . 12 还原糖（ 测定 . 13 聚半乳糖醛酸平均聚合度（ 计算方法 . 14 层层析（ 定性测定寡聚半乳糖醛酸 . 14 中国农业科学院硕士学位论文 离子色谱法（ 定寡聚半乳糖醛酸 . 14 果与分析 . 14 胶酶 泳 . 14 胶酸 酯化度 的测定 . 15 解反应 选择 . 15 解反应温度的选择 . 17 解反应加酶量的选择 . 18 解反应时间的选择 . 19 物和酶的选择及产物组成的测定 . 21 结 . 25 第 3 章 寡聚半乳糖醛酸的分离纯化及结构鉴定 . 26 言 . 26 验材料 . 26 料 . 26 析柱及填料 . 26 要设备 . 26 验方法 . 27 胶酸的制备 . 27 聚半乳糖醛酸的制备 . 27 层析法二次分离纯化寡聚半乳糖醛酸 . 27 测方法 . 28 胶酸酯化度的测定 . 28 还原糖（ 测定 . 28 层层析（ 定性测定寡聚半乳糖醛酸 . 29 喷雾电离质谱（ . 29 磁共振（ 400M . 29 果与分析 . 29 胶酸酯化度 . 29 聚半乳糖醛酸冻干粉 含量 . 29 聚半乳糖醛酸的分离纯化 . 29 化产物半乳糖醛酸二糖的化学结构分析 . 32 化产物半乳糖醛酸三糖的化学结构分析 . 34 结 . 40 第 4 章 寡聚半乳糖醛酸铜螯合物的制备及其对小鼠生长特性的影响 . 41 言 . 41 验材料 . 41 中国农业科学院硕士学位论文 V 料 . 41 验仪器 . 41 验方法 . 41 聚半乳糖醛酸铜螯合物的制备 . 41 聚半乳糖醛酸、寡聚半乳糖醛酸铜螯合物对小鼠生长特性的影响 . 42 果与分析 . 45 应时间对寡聚半乳糖醛酸铜螯合物制备的影响 . 45 聚半乳糖醛酸铜螯合物的组成成分分析 . 45 聚半乳糖醛酸及其铜螯合物对小鼠采食量的影响 . 45 聚半乳糖醛酸及其铜螯合物对小鼠体重的影响 . 46 聚半乳糖醛酸及其铜螯合物对小鼠肝 脏、肾脏、血液和粪便中 量的影响 . 47 结 . 48 第 5 章 结论与建议 . 50 论 . 50 新点 . 50 议 . 51 参考文献 . 52 致 谢 . 55 作者简介 . 56 中国农业科学院硕士学位论文 目 图 1胶化学结构 . 1 图 1藻胶化学结构 . 1 图 1聚半乳糖醛酸的化学结构式 . 2 图 1术路线 1 . 7 图 1术路线 2 . 8 图 2胶酶 泳图谱 . 15 图 2-2 产 影响 . 16 图 2-3 产 影响 . 16 图 2-4 产物 影响 . 16 图 2度对产 影响 . 17 图 2度对产 影响 . 17 图 2度对产物 影响 . 18 图 2酶量对产 影响 . 18 图 2酶量对产 影响 . 19 图 2酶量对产物 影响 . 19 图 2应时间对产 影响 . 20 图 2应时间对产 影响 . 20 图 2应时间对产物 影响 . 20 图 2聚半乳糖醛酸标准品的离子色谱图 . 21 图 2最佳条件下酶解果胶所得 产物的离子色谱图 . 22 图 2最佳条件下酶解果胶酸所得产物的离子色谱图 . 22 图 2胶酶在最佳条件下水解果胶酸所得产物的离子色谱图 . 24 图 2胶酶在最佳条件下水解果胶酸所得产物的离子色谱图 . 24 图 2胶酶 在 最佳条件酶解果胶酸产物的 . 25 图 3次分离（湿柱法）洗脱液的 谱 . 30 图 3次分离（干柱法）洗脱液的 谱 . 30 图 3次分离 半乳糖醛酸和二糖洗脱液的 谱 . 31 图 3次分离 半乳糖醛酸二糖和三糖洗脱液的 谱 . 31 图 3乳糖醛酸二糖化学结构 . 32 图 3化产物半乳糖醛酸二糖 扫描质谱图 . 32 图 3乳糖醛 酸二糖原一维 1H 图 . 33 中国农业科学院硕士学位论文 3乳糖醛酸二糖放大一维 1H 图 . 33 图 3乳糖醛酸二糖一维 13C 图 . 34 图 3乳糖醛酸三糖的化学结构 . 35 图 3化产