课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.doc

班级： 姓名： 东港三中2013级高二生物选修一课题2导学案2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数主备人： 审核人： 使用时间：2015.4【三维目标】知识与技能：理解培养基的选择及配制方法；分解尿素细菌的分离与计数。过程与方法：“以问题为中心”探究式教学模式，通过小组合作探究，学生展示，教师点拨。情感与价值观：关注生活中的实际问题，培养解决问题的能力。【学习重难点】重点：培养基的配置方法难点：细菌的计数方法【自主预习】根据教材完成练习册15页自主学习空间课题背景：1、尿素CO(NH2)2重要的农业氮肥。只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用。2、 CO(NH2)2 + H2O 细菌脲酶 CO2 +2NH3【合作探究】探究点一：筛选菌株实例-耐高温DNA聚合酶的寻找：美国科学家布鲁克（1966年）-在美国黄石公园的一个热泉中发现耐热细菌。这说明寻找菌株要到期相应的 中寻找。(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时 或 其他微生物生长。 (2)选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 和 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。(3)配制选择培养基的依据1、该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 碳源：: 氮源： 2、此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养 微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养 ；的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。思考与讨论：筛选菌株的培养基KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g琼脂 15.0g 例 1 ：土壤中的细菌能分解尿素，是因为它们能合成一种 ()A尿素酶 B脲酶 C蛋白酶 D肽酶例2 ：在培养基中加入尿素(惟一氮源)，以分离出能分解尿素的细菌，这种加入尿素的培养基在功能上属于 ()A选择培养基 B固体培养基 C液体培养基 D半固体培养基 探究点二：统计菌落数目测定微生物数量的常用方法有 和 。1.稀释涂布平板法-活体计数法（1）原理：当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。（2）操作方法：稀释涂布平板 统计菌落数。（3）统计原则 、选 30300 个菌落的平板统计。 、每个稀释度取3个平板取其平均值。（4）统计结果： 每克样品中的菌株数= 。C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数； V:所用稀释液的体积； M:稀释倍数。思考与讨论：1、1个菌落代表几个活菌？2、统计的菌落数和实际活的细菌数相等么？为什么？3、如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？2显微镜直接计数利用特定细菌计数或血细胞计数板在显微镜下计算一定容积内微生物数量。优点：准确统计微生物实际数目缺点： 3设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果的 。例 3 ：某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数平均值为234，那么每克样品中菌落数是（稀释液体积为0.1ml） （ ）A、2.34108 B、 2.34109 C、234 D、23.4 例 4 ：用来判断培养基是否起到对照作用要设置的对照是 （ ） A、未接种的选择培养基 B、未接种的牛肉膏蛋白胨培养基（全营养）C、接种了的选择培养基 D、接种的牛肉膏蛋白胨培养基（全营养）探究点三：实验设计、实验操作实验设计要求：综合考虑，周密细致一、实验流程：土壤取样-样品的稀释-制备培养基-涂布平板-微生物的培养与观察-菌落计数二、实验操作：（一）土壤取样 1、土壤是天然培养基 - 其微生物数量 、种类 。 2、土壤取样： 取样的位置：土壤中7090是细菌。在富含有机质的土壤层的 处中分布着绝大多数的细菌。从肥沃、湿润的土壤中取样。应先 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的 中。 （1）、测细菌数：一般用104、105、106稀释液。（二）样品稀释 （2）、测放线菌：一般用103、104、105稀释液。（3）、测真菌数：一般用102、103、104稀释液。 稀释过程：在火焰旁将10g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液 ，转移至盛有 的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、102 依次等比稀释至107稀释度。 稀释原则：确保平板上的菌落数在 之间。（三）制备培养基：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基，将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显 选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为 ，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。1、 接种：依次等比稀释至107稀释度，并按照由107103稀释度的顺序分别吸取 进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。 2、培养：细 菌：3037，12d；（四）微生物的培养与观察 放线菌: 2528, 57d； 霉 菌: 2528, 34d。 3、观察：将涂布好的培养皿放在30温度下培养，及时观察记录。 （五）细菌的计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。提示：1、在一定的培养条件下，同种微生物表现出相同而稳定的菌落特征。2、关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等，是区分细菌的重要手段。思考与讨论：1、 为什么分离不同的微生物要选择不同的稀释度？2、 实验中，称取土壤稀释土壤都需要在火焰旁操作，为什么？3、本实验还有哪些需要注意要无菌操作的？ 4、土壤稀释过程中，试管较多，怎么防止混淆？涂布平板由怎么防止？【内化提升】1、通常用来作为菌种鉴定的重要依据是A菌落 B细菌形态 C细菌体积 D细菌结构2、在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养能分解尿素的细菌，指示剂的颜色是A蓝色 B红色 C黑色 D棕色3、分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是加尿素不加尿素加琼脂不加琼脂加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸盐不加硝酸盐A B C D4、在寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找，下列不属于厌氧细菌生存环境的是A土壤深层 B人或动物体内寄生 C真空 D池塘淤泥5、测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释，其原因是A细菌个体小，真菌个体大 B细菌易稀释，真菌不易稀释C细菌在土壤中数量比真菌多 D随机的，没有原因6、实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线（3条线均与下图中的链霉素带接触），将平板置于37条件下恒温培养3天，结果如图所示。从实验结果分析以下叙述，不正确的是 A链霉素能阻止结核菌的生长 B链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效C链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效 D链霉素可以用于治疗伤寒病人【高考链接】（2009、安徽）下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是