真核细胞内膜系统的结构和功能ppt课件.ppt

第五章真核细胞内膜系统 的结构和功能 1 真核细胞在进化上一个显著特点就是形成了发达的细胞质膜系统 将细胞内环境分割成许多功能不同的区室 虽然这些区室具有各自独立的结构和功能 但它们有是密切相关的 尤其是它们的膜结构式相互转换的 转换的机制则是通过蛋白质分选和膜运输实现的 2 细胞内区室化是真核细胞结构和功能的基本特征之一 细胞内区室化TheCompartmentalizationinEukaryoticCells 细胞内被膜区分为3类结构 细胞质基质 cytoplasmicmatrix 细胞内膜系统 endomembranesystem 和其他由膜包被的各种细胞器 诸如线粒体 叶绿体 过氧化物酶体和细胞核 3 一 细胞质基质 cytoplasmicmatrixorcytosol 细胞质基质是细胞的重要结构成分 其体积约占细胞质的一半 4 表5 1肝细胞中细胞质基质及细胞其他组分的数目及所占的体积比 5 一 细胞质基质的含义 1 细胞质基质的概念 真核细胞的细胞质中除去细胞器和内含物以外的 较为均质半透明的液态胶状物质称为细胞质基质 cytoplasmicmatrix 2 细胞质基质的组成 中间代谢有关的酶类 细胞质骨架结构 3 特点 细胞质基质是一个高度有序的体系 蛋白质与蛋白质之间 蛋白质与其它大分子之间都是通过弱键而相互作用处于动态平衡的结构体系 6 FigureInternalmembranesandthecytosol B Therestofthecell excludingalltheseorganelles iscalledcytosol 细胞质基质 7 8 为物质中间代谢提供场所细胞内所有的中间代谢过程均发生在细胞质中 其中大部分是在细胞质基质中进行的 如糖酵解过程 磷酸戊糖途径 糖醛酸途径等 2 与细胞质骨架功能相关维持细胞形态 运动 胞内物质运输及能量传递等 二 细胞质基质的功能 9 3 在蛋白质的修饰以及选择性的降解中发挥作用 蛋白质的修饰 磷酸化和去磷酸化 糖基化 N 端甲基化 酰基化 控制蛋白质的寿命 依赖于泛素的降解途径 ubiquitin dependentpathway 2004年诺贝尔化学奖 降解变性和错误折叠的蛋白质 帮助变性或错误折叠的蛋白质重新折叠 形成正确的分子构象 主要靠热休克蛋白 heatshockprotein stress responseprotein 来完成 10 泛素化蛋白酶体所介导的蛋白质降解途径 2004年10月16日瑞典皇家科学院将本年度诺贝尔化学奖授予以色列科学家阿龙 切哈诺沃 阿夫拉姆 赫什科和美国科学家欧文 罗斯 以表彰他们在泛素调节的蛋白质降解研究领域中的卓越成就 11 细胞内蛋白质标记及降解的理论模型 12 Cellscarefullymonitortheamountofmisfoldedproteins Anaccumulationofmisfoldedproteinsinthecytosoltriggersaheat shockresponse whichstimulatesthetranscriptionofgenesencodingcytosolicchaperonesthathelptorefoldtheproteins 13 二 膜结合细胞器 Membrane boundedorganelles 在细胞内的分布膜结合细胞器在细胞内是按功能 分层次分布的 14 图7 1动物细胞中膜结合的细胞器及分布Figure7 1Themajormembrane boundedorganellesofananimalcell 15 膜结合细胞器在细胞的生命活动中具有重要作用 表5 2真核细胞膜结合区室的主要功能 16 在这些膜结合的细胞器中 线粒体 叶绿体 过氧化物酶体独立性很强 并且有特别的功能 其他几种膜结合细胞器 如内质网 高尔基体 溶酶体和小泡 虽然有不同的结构和功能 但是它们都参与蛋白质的加工 分选和膜泡运输 形成了一个特别的细胞内系统 17 定义 位于细胞质内 在结构 功能和发生上相关的由膜围绕的细胞器或细胞结构称为细胞内膜系统 主要包括内质网 高尔基体 溶酶体 胞内体和分泌泡等 三 细胞内膜系统 EndomembraneSystem 及其功能 18 19 功能 区隔化 增加内表面积 提高代谢和调节能力 从系统发生来看内膜系统起源于质膜的内陷和内共生 从个体发生来看新细胞的内膜系统来源于原有内膜系统的分裂 具有核外遗传的特性 20 一 内质网的形态结构与功能 K R Porter和A D Claude等于1945年发现于培养的小鼠成纤维细胞 因最初看到的是位于细胞质内部的网状结构 故名内质网 endoplasmicreticulum ER 内质网是由封闭的管状或扁平囊状膜系统及其包被的腔形成互相沟通的三维网络结构 内质网通常占细胞膜系统的一半左右 体积约占细胞总体积的10 以上 内质网是细胞内除核酸以外一系列重要的大分子如蛋白质 脂质和糖类合成的基地 21 22 1 内质网的结构 根据其结构和功能 内质网可分为两种基本类型 粗面内质网 RER 和滑面内质网 SER 23 24 粗面内质网 roughendoplasmicreticulum RER 多呈大的扁平膜囊状 在电镜下观察排列极为整齐 它是核糖体和内质网共同构成的复合机能结构 普遍存在于分泌蛋白质的细胞中 主要功能是合成分泌性的蛋白质 多种膜蛋白和酶蛋白 25 rER 26 滑面内质网 smoothendoplasmicreticulum SER 无核糖体附着的内质网称为光面内质网 通常为小的膜管和小的膜囊状 而非扁平膜囊状 广泛存在于各种类型的细胞中 包括合成胆固醇的内分泌腺细胞 肌细胞 肾细胞等 脂类合成的重要场所 它往往作为出芽的位点 将内质网上合成的蛋白质或脂类转运到高尔基体 27 sER 28 内质网的功能FunctionsoftheER 蛋白质的合成是粗面内质网的主要功能细胞中的蛋白质都是在核糖体上合成的 并且起始于细胞质基质 但有些蛋白质在合成开始不久后便转在内质网膜上 继续进行蛋白质合成 这些蛋白主要有 向细胞外分泌的蛋白 如抗体 激素 膜的整合蛋白 构成内膜系统细胞器中的可驻留蛋白 需要进行修饰的蛋白 如糖蛋白 29 FigureAcommonpoolofribosomesisusedtosynthesizeboththeproteinsthatstayincytosolandthosethataretransportedintomembrane enclosedorganells includingtheER 一个共同的核糖体库用于合成留在胞质溶胶内和转运到包括内质网在内的膜被细胞器中的蛋白质 mRNA编码的胞质蛋白质依然在细胞质内游离 细胞质内游离的多核糖体 细胞质内总核糖体亚基库 多核糖体通过多重新生肽链结合到内质网膜 mRNA编码蛋白质靶向的内质网依然是膜结合的 内质网的信号序列 30 蛋白质的修饰与加工 包括糖基化 羟基化 酰基化 二硫键形成等 其中最主要的是糖基化 几乎所有内质网上合成的蛋白质最终被糖基化 糖基化的作用 使蛋白质能够抵抗消化酶的作用 赋予蛋白质传导信号的功能 某些蛋白只有在糖基化之后才能正确折叠 31 糖基一般连接在4种氨基酸上 分为2种 O 连接的糖基化 O linkedglycosylation 与Ser Thr和Hyp的 OH连接 连接的糖为半乳糖或N 乙酰半乳糖胺 在高尔基体上进行 O linked linkedtothehydroxylgroupserineorthreonineviaGalNac inGolgi N 连接的糖基化 N linkedglycosylation 与天冬酰胺残基的 NH2连接 糖为N 乙酰葡糖胺 N linked linkedtotheamidenitrogenofasparagine ER 内质网上进行N 连接的糖基化 糖的供体为核苷糖 如CMP 唾液酸 GDP 甘露糖 UDP N 乙酰葡糖胺 32 FigureManyProteinsareglycosylatedintheRER 33 粗面内质网的主要功能是进行膜结合核糖体合成的蛋白质的运输 并在运输的同时对这些蛋白质进行加工修饰和折叠 以帮助这些蛋白质准确到达目的地 34 滑面内质网是脂质合成的重要场所 细胞膜所需要的最重要的磷脂是在光面内质网上合成的 在光面内质网上合成的磷脂先作为内质网膜的构成部分 然后再转运给其他的膜 35 内质网中的磷脂不断合成 使得内质网的膜面积越来越大 必须有一种机制将磷脂转运到其它的膜才能维持内质网膜的平衡 这就是磷脂转运 磷脂的转运有两种方式 一种是凭借一种水溶性蛋白 叫磷脂转换蛋白 PEP 的作用在膜之间转移蛋白 另一种是以出芽的方式转运到高尔基体 溶酶体和细胞质膜上 36 膜磷脂转移的两种方式 37 滑面内质网的其他功能 肝细胞的解毒作用类固醇激素的合成Ca2 的调节作用糖原分解释放游离的葡萄糖 38 二 高尔基体的形态结构与功能ThestructureandfunctionsofGolgicomplex 39 高尔基体 Golgibody 又称高尔基器 Golgiapparatus 或高尔基复合体 Golgicomplex 是比较普遍存在于真核细胞内的一种细胞器 最早发现于1855年 1889年 Golgi用银染法 在猫头鹰的神经细胞内观察到了清晰的结构 因此定名为高尔基体 20世纪50年代以后才正确认识它的存在和结构 40 1 高尔基体 Golgibody 的形态结构与极性 电子显微镜所观察到的高尔基体最富有特征性的结构是由一些 通常是4 8个 排列较为整齐的扁平膜囊 saccules 堆叠在一起 构成了高尔基体的主体结构 扁囊多呈弓形 也有的呈半球形或球形 均由光滑的膜围绕而成 膜表面无核糖体颗粒附着 膜囊周围有大量的大小不等的囊泡结构 41 高尔基体是有极性的细胞器 位置 方向 物质转运与生化极性 靠近细胞核的一面扁囊弯曲成凸面又称形成面或顺面 cisface 面向细胞膜的一面常成凹面又称成熟面或反面 transface 顺面和反面都有一些或大或小的运输小泡 42 高尔基体的膜囊结构及其排列 43 高尔基体至少由互相联系的3个部分组成 每一部分可能又分化出更精细的间隔 功能区室 高尔基体顺面膜囊或顺面高尔基体管网状结构 cisGolginetwork CGN 位于高尔基体顺面最外侧的扁平膜囊 是中间多孔而呈连续分支状的管网结构 CGN接受来自内质网新合成的物质并将其分类后大部分转入高尔基体中间膜囊 小部分蛋白质 有KDEL或HDEL序列 与脂质再返回内质网 44 高尔基体中间膜囊 mediaGolgi 由扁平膜囊与管道组成 形成不同的间隔 但功能上是连续的 完整的膜囊体系 多数糖基化修饰 糖脂的形成以及与高尔基体有关的多糖的合成都发生在这 45 高尔基体反面膜囊以及反面高尔基体管网状结构 transGolginetwork TGN TGN位于反面的最外层 与反面的扁平膜囊相连 另一侧伸入反面的细胞质中 形态呈管网状 并有囊泡与之相连 TGN的主要功能是参与蛋白质的分类与包装 最后从高尔基体中输出 小泡 vesicle 在扁平囊的周围有许多小囊泡 直径400 800 这些小囊泡较多地集中在高尔基复合体的形成面 一般认为它是由附近的粗面内质网出芽形成的运输泡 它们不断地与高尔基体的扁平膜囊融合 使扁平膜囊的膜成分不断得到补充 46 TheGolgiApparatus 47 高尔基体的极性 结构上的极性 高尔基体的结构可分为几个层次的区室 靠近内质网的一面称为顺面 cisface 或称形成面 formingface 高尔基体中间膜囊 medialGolgi 靠近细胞质膜的一面称为反面高尔基网络 transGolginetwork TGN 功能上的极性 高尔基体执行功能时是 流水式 操作 上一道工序完成了 才能进行下一道工序 48 2 高尔基体的功能TheFunctionsofGolgicomplex 高尔基体的主要功能是将内质网合成的多种蛋白质进行加工 分类与包装 并分门别类地运送到细胞的特定部位或分泌到细胞外 内质网上合成的脂类一部分也要通过高尔基体向细胞质膜和溶酶体膜等部位运输 因此 高尔基体是细胞内大分子运输的一个主要交通枢纽 49 50 Copyright2009JohnWiley Sons Inc 51 ProcessingandPackaging 51 在高尔基体中进行的物质运输RER上合成蛋白质 进入ER腔 COPII运输泡 进入CGN 在medialGdgi中加工 在TGN形成运输泡 运输与质膜融合 排出 高尔基体对蛋白质的分类 依据的是蛋白质上的信号肽或信号斑 52 DeDuve A ClaudeandG Palade 1974NobelPlrize 53 蛋白质的糖基化及其修饰GlycosylationintheGolgicomplex 高尔基体对蛋白质的修饰与加工 主要是对糖蛋白寡糖链的修剪 蛋白质的糖基化和特异蛋白质水解等 N 连接和O 连接的糖基化 是蛋白质两类不同的糖基化修饰 N 连接的寡糖蛋白的合成起始于糙面内质网 完成于高尔基体 O 连接的主要或全部是在高尔基体内进行的 54 表3N 连接与O 连接的寡糖比较 55 56 内质网和高尔基体中 所有与糖基化及寡糖的加工有关的酶都是整合膜蛋白 它们固定在细胞的不同间隔中 其活性部位均位于内质网或高尔基体的腔面 57 脊椎动物细胞糖蛋白N 连接寡糖在内质网和高尔基体各膜囊区间的加工过程 58 蛋白聚糖 proteoglycan 的合成 除了蛋白质的糖基化以外 高尔基体中也可以进行多糖的合成 动物细胞中合成的多糖主要是透明质酸 这是一种氨基聚糖 是细胞外基质的主要成分 植物细胞壁中的几种多糖 包括半纤维素 果胶也是在高尔基体中合成的 59 蛋白酶的水解和其他加工过程 蛋白质在高尔基体中酶解加工的方式有三种 一是将没有生物活性的蛋白原N端或两端的序列切除形成有活性的多肽 如胰岛素 二是将含有重复氨基酸序列的前体切割成有活性的多肽 如神经肽 三是根据前体中不同的信号序列或同一前体在不同细胞中的不同加工方式而加工成不同种的多肽 60 举例 胰岛素是在胰岛B细胞中合成的 刚从内质网合成的多肽在N 末端有信号肽链 称前胰岛素原 preproinsulin 相对分子质量为12 000 随后在内质网的信号肽酶的作用下 切除信号肽 成为胰岛素原 proinsulin 相对分子质量9 000 含84个氨基酸 运输到高尔基体后 通过蛋白酶的水解作用 生成一个分子由51个氨基酸残基组成的胰岛素和一个分子C肽 61 胰岛素分子的加工成熟和运输 62 小泡 Secretoryvesicle 在扁平囊的周围有许多小囊泡 直径400 800 这些小囊泡较多地集中在高尔基复合体的形成面 一般认为它是由附近的粗面内质网出芽形成的运输泡 它们不断地与高尔基体的扁平膜囊融合 使扁平膜囊的膜成分不断得到补充 63 三 溶酶体的结构与功能ThestructureandfunctionsofLysosomes ChristiandeDuve等 1955 用生化手段分析大鼠肝细胞匀浆的梯度组分时发现的一种颗粒 溶酶体是由一层单位膜包着丰富的磷酸水解酶而构成 存在于所有的动物细胞中 溶酶体是细胞内消化的主要场所 在维持细胞正常代谢活动 防御及细胞的分化与衰老等方面起着重要的作用 64 1 溶酶体 lysosome 的结构类型 1 溶酶体的形态 溶酶体 lysosome 单层膜围绕 内含多种酸性水解酶类 囊泡状细胞器 其主要功能是进行细胞内消化作用 溶酶体是一种异质性 heterogeneous 的细胞器 不同来源的溶酶体形态 大小 甚至所含有酶的种类都有很大的不同 溶酶体呈小球状 大小变化很大 直径一般0 25 0 8 m 最大的可超过1 m 最小的直径只有25 50nm 65 溶酶体膜的稳定性溶酶体的外被是一层单位膜 内部没有任何特殊的结构 由于溶酶体中含有各种不同的水解酶类 所以溶酶体在生活细胞中必须是高度稳定的 溶酶体膜的特征 嵌有质子泵 形成和维持溶酶体中酸性的内环境 具有多种载体蛋白用于水解的产物向外转运 膜蛋白高度糖基化 可能有利于防止自身膜蛋白的降解 66 溶酶体的酶类 溶酶体内含有60多种酶类 这些酶的最适pH值是5 0 故均为酸性水解酶 acidhydrolases 溶酶体的酶都有一个共同的特点 都是水解酶类 在酸性pH条件下具有最高的活性 溶酶体的酶包括 蛋白酶 核酸酶 脂酶 糖苷酶等 67 溶酶体的形态 大小 及所含主要酶类及膜中的V 型质子泵示意图AlysosomecontainshydrolyticenzymesandaH pump 68 2 溶酶体的类型 由于溶酶体在形态上的多样性和异质性 曾发现各种不同类型的溶酶体 根据溶酶体处于完成其生理功能的不同阶段 大致分为初级溶酶体 primarylysosome 次级溶酶体 secondarylysosome 和残余体 residualbody 69 初级溶酶体 primarylysosome 呈球形 直径约0 2 0 5um 是高尔基体分泌形成的 有多种酸性水解酶 但没有底物 酶处于非活性状态 包括蛋白酶 核酸酶 脂酶 磷酶酶等60余种 反应的最适PH值为5左右 70 次级溶酶体 secondarylysosome 是初级溶酶体与细胞内的自噬泡 胞饮泡或吞噬泡融合形成的复合体 含有水解酶和相应的底物 是一种将要或正在进行消化作用的溶酶体 根据所消化的物质来源不同 分为自噬溶酶体和异噬溶酶体 自噬溶酶体 autolysosome 是一种自体吞噬泡 作用底物是内源性的 即细胞内的蜕变 破损的某些细胞器或局部细胞质 这种溶酶体广泛存在于正常的细胞内 在细胞内起 清道夫 作用 异噬溶酶体 heterolysosome 又称异体吞噬泡 它的作用底物是外源性的 即细胞经吞噬 胞饮作用所摄入的胞外物质 异噬性溶酶体实际上是初级溶酶体同内吞泡融合后形成的 71 Secondarylysosome 72 残体 residualbody 又称后溶酶体 post lysosome 已失去酶活性 仅留未消化的残渣 残体可通过外排作用排出细胞 也可能留在细胞内逐年增多 如表皮细胞的老年斑 肝细胞的脂褐质 73 肝细胞脂褐质 74 动物细胞溶酶体系统示意图 75 2 溶酶体的功能 消化和防御功能 溶酶体的基本功能是对生物大分子强烈的消化作用 这对于维持细胞的正常代谢活动及防御微生物的侵染都有重要的意义 76 其消化底物的来源有三种途径 自体吞噬 吞噬的是细胞内原有的物质 通过吞噬形成的吞噬体提供的有害物质 通过内吞作用提供的营养物质 由于吞噬作用和内吞作用提供的被消化的物质都是来自细胞外 又将这两种来源的物质消化作用统称为异体吞噬 heterophagy 77 78 溶酶体的类型及在细胞消化过程中的作用图中简示了溶酶体的四种消化作用 A 吞噬作用 B自噬作用 C 自溶作用 D 细胞外消化作用 79 3 溶酶体的发生BiogenesisofLysosomes 溶酶体酶是在糙面内质网上合成并经N 连接的糖基化修饰 然后转至高尔基体 在高尔基体的顺面膜囊中寡糖链上的甘露糖残基被磷酸化形成M6P 在高尔基体的反面膜囊和TGN膜上存在M6P受体 这样溶酶体的酶与其他蛋白质区分开来 并得以浓缩 最后以出芽的方式转运到溶酶体中 知识拓展 80 Thetransportofnewlysynthesizedlysosomalhydrolasestolysosomes 81 溶酶体的酶寻靶过程 涉及的细胞器及机理 82 在细胞器更新中的作用 清除无用的生物大分子 衰老的细胞器及衰老损伤和死亡的细胞在受精过程中的作用 受精过程中的精子的顶体 acrosome 反应 83 溶酶体酶的合成及N 连接的糖基化修饰 RER 高尔基体cis膜囊寡糖链上的甘露糖残基磷酸化 M6P N 乙酰葡萄糖胺磷酸转移酶 高尔基体trans 膜囊和TGN膜 M6P受体 溶酶体酶分选与局部浓缩 以出芽的方式转运到前溶酶体 磷酸葡萄糖苷酶 磷酸化识别信号 信号斑 发生过程 84 1 溶酶体酶蛋白的M6P标记 溶酶体的酶上都有一个特殊的标记 6 磷酸甘露糖 mannose6 phosphate M6P 这一标记是溶酶体酶合成后在粗面内质网和高尔基体通过糖基化和磷酸化添加上去的 85 Phosphorylationofmannoseresiduesonlysosomalenzymescatalyzedbytwoenzymes RecognitionsitebindstoSignalpatch GlcNAcphosphotransferase phosphodiesterase 86 2 溶酶体酶的M6P分选途径 这一途径的两个关键是 M6P标记和M6P受体蛋白 M6P受体蛋白 M6Preceptorprotein M6P受体蛋白是反面高尔基网络上的膜整合蛋白 能够识别溶酶体水解酶上的M6P信号并与之结合 从而将溶酶体的酶蛋白分选出来 M6P受体蛋白主要存在于高尔基体的反面网络 但在一些动物细胞的质膜中发现有很多M6P受体蛋白的存在 这是细胞的一种保护机制 可防止溶酶体的酶不正确地分泌到细胞外 87 分选途径 溶酶体酶前体从粗面内质网转移到顺面高尔基体 并进行甘露糖残基的磷酸化 在反面高尔基网络 磷酸化的酶同M6P受体结合 通过该受体将溶酶体的酶包装到由纤维状网格蛋白包被的小泡中 然后网格蛋白外被很快解体 无包被的运输小泡很快与次级内体融合 由于次级内体中pH呈酸性 致使磷酸化的酶与M6P受体脱离 接着脱磷酸 通过次级内体的分选作用 溶酶体的酶进入从次级内体出芽形成的运输小泡 接着同溶酶体融合完成溶酶体酶的传递过程 而受体重新回到高尔基体再利用 M6P受体也位于细胞质膜中 它能够同偶尔分泌到细胞外磷酸化的溶酶体酶结合 并形成由网格蛋白包被的运输泡 最后同样被传递给溶酶体 88 溶酶体酶的甘露糖6 磷酸分选途径和溶酶体形成的主要过程 89 M6P分选途径的特点 M6P作为分选信号 包埋在高尔基体中的受体能够被网格蛋白包装成分泌小泡 出芽形成的溶酶体酶的运输小泡只同酸性的次级内体融合 通过次级内体的分选作用使受体再循环 90 四 溶酶体与过氧化物酶体 过氧化物酶体 peroxisom 又称微体 microbody 是由单层膜围绕的内含一种或几种氧化酶类的异质性细胞器 Rhodin1954年发现于小鼠肾近曲小管上皮细胞 称其为微体 C deDube建议把微体命名为过氧化物酶体 91 鼠肝细胞超薄切片所显示的过氧化物酶体 P 和其它细胞器如线粒体 M 等 Albertetal 1989 92 1 过氧化物酶体与溶酶体的区别 过氧化物酶体和初级溶酶体的形态与大小类似 但过氧化物酶体中的尿酸氧化酶等常形成晶格状结构 可作为电镜下识别的主要特征 通过离心可分离过氧化物酶体和溶酶体 过氧化物酶体和溶酶体的差别 93 TritonWR1339 94 过氧化物酶体与初级溶酶体的特征比较 95 2 过氧化物酶体的功能 解毒作用动物细胞 肝细胞或肾细胞 中过氧化物酶体可氧化分解血液中的有毒成分 起到解毒作用 过氧化物酶体中常含有两种酶 依赖于黄素 FAD 的氧化酶 其作用是将底物氧化形成H2O2 过氧化氢酶 作用是将H2O2分解 形成水和氧气 对氧浓度的调节作用过氧化物酶体中的氧化酶都是利用分子氧作为氧化剂 催化下面反应 RH2 O2R H2O2过氧化物酶体具有使细胞免受高浓度氧的毒性作用 脂肪酸的氧化过氧化物酶体分解脂肪酸等高能分子向细胞直接提供热能 含氮物质的代谢尿酸氧化酶对于尿酸的氧化是必需的 尿酸是核苷酸和某些蛋白质降解代谢的产物 尿酸氧化酶可将这种代谢废物进一步氧化去除 96 3 过氧化物酶体的发生 通过二裂法进行增殖 过氧化物酶体经分裂后形成子代的细胞器 子代的过氧化物酶体还需要进一步装配形成成熟的细胞器 组成过氧化物酶体的蛋白均由核基因编码 主要在细胞质基质中合成 然后转运到过氧化物酶体中 过氧化物酶体的膜脂可能在内质网上合成后转运而来 97 过氧化物酶体发生过程的示意图 98 除线粒体和植物细胞叶绿体中能合成少量蛋白质外 绝大多数蛋白质均在细胞质基质中的核糖体上开始合成 然后转运至细胞的特定部位 也只有转运至正确的部位并组装成结构和功能的复合体 才能参与细胞的生命活动 这一过程称蛋白质的定向转运或蛋白质分选 proteinsorting 四 蛋白质的分选及运输 99 100 蛋白质的合成SynthesisofProteins 1 游离核糖体 on free ribosomes a 留在细胞质基质中的蛋白质proteinsdestinedtoremaininthecytosol b 细胞质内表面的外周蛋白peripheralproteinsoftheinnersurfaceoftheplasmamembrane c 转移到细胞核的蛋白质proteinsthataretransportedtothenucleus d 转移到过氧化物体 叶绿体和线粒体的蛋白质proteinstobeincorporatedintoperoxisomes chloroplasts andmitochondria 101 2 粗面内质网上的核糖体 onribosomesattachedtotheRERmembranes a 分泌性蛋白proteinssecretedfromthecell secretoryproteins 跨膜蛋白integralmembraneproteins c 留在内膜系统的蛋白质solubleproteinsthatresidewithincompartmentsoftheendomembranesystem 102 在细胞质基质中合成的蛋白质分子的命运都取决于其自身的氨基酸序列 这些氨基酸序列中包含指导蛋白质到所需的细胞器去的分选信号 典型的蛋白质分选信号是一段连续的氨基酸序列 通常有15 60个氨基酸长 这个信号序列经常 但不总是 在分选任务完成后从蛋白质上被切除 信号序列对于指导一个蛋白质到达一个特定的细胞器是必要和足够的 1 蛋白质的分选信号 103 表15 3一些典型的信号序列 注 带正电荷氨基酸以红色表示 带负电荷氨基酸以蓝色表示 一个疏水氨基酸的延伸区段以绿色表示 H3N表示蛋白质的氨基端 COO 表示羧基端 内质网滞留信号通常用它的单字母氨基酸缩写表示 KDEL 104 105 SignalHypothesis 信号假说 G Blobel D Sabatini 1975 例如 分泌性蛋白在粗面内质网上的核糖体合成过程 1 信号肽 singnalpeptide 与共转运 Cotranslationaltranslocation 106 AmodelfortheSignalMechanismofCotranslationalImport 107 信号假说 SignalHypothesis 1975年 G Blobel和D Sabatini根据对信号序列的研究成果 正式提出了信号假说 即分泌性蛋白N端序列作为信号肽 指导分泌性蛋白到内质网膜上合成 然后在信号肽引导下蛋白质边合成边通过易位子蛋白复合体进入内质网腔 在蛋白合成结束之前信号肽被切除 现已确认 指导分泌性蛋白在粗面内质网上合成的决定因素是蛋白质N端的信号肽 信号识别颗粒和内质网膜上的信号识别颗粒的受体 又称停泊蛋白 等因子协助完成这一过程 108 信号肽 ERsignalsequence 位于蛋白质的N端 一般有16 26个氨基酸残基 其中包括疏水核心区 信号肽的C端和N端等三部分 信号肽的一级序列信号肽一级序列由疏水核心 h C端 c 和N端 n 三个区域构成 以血清白蛋白和HIV 1型病毒的糖蛋白gp160信号肽为例 显示出两者的n区长度明显不同 109 Signalpeptides 信号肽 110 信号识别颗粒 Signal recognitionparticle SRP 1981年 发现了信号识别颗粒 signalrecognitionpartical SRP 是一种核糖核蛋白复合体 沉降系数为11S 含有分子量为72kDa 68kDa 54kDa 19kDa 14kDa及9kDa的6条多肽和一个由300个核苷酸组成的7SRNA 它的作用是识别信号序列 并将核糖体引导到内质网上 信号识别颗粒受体 dockingprotein DP 即SRP在内质网膜上的受体蛋白 它能够与结合有信号序列的SRP牢牢地结合 使正在合成蛋白质的核糖体停靠到内质网上来 111 表5 4在非细胞系统中蛋白质的翻译过程与SRP DP和微粒体的关系 和 分别代表反应混合物中存在 或不存在 该物质 112 分泌性蛋白在内质网上合成的共翻译转运过程 信号肽与SRP结合 肽链延伸终止 SRP与受体结合 SRP脱离信号肽 肽链在内质网上继续合成 同时信号肽打开易位子通道 新生肽链进入内质网腔 信号肽切除 肽链延伸至终止 合成体系解散 这种肽链边合成边向内质网腔转移的方式 称为共翻译转运 co translationaltranslocation 113 FigureAsolubleproteincrossestheERmembraneandentersthelumen 可溶性蛋白穿过内质网膜进入腔内 多肽链从核糖体脱离 关闭的转运通道 切除的信号肽 信号肽酶 在内质网腔内成熟的可溶性蛋白质 转运通道 信号肽 114 开始转移序列 starttransfersequence 和终止转移序列 stoptransfersequence 起始转移序列和终止转移序列的数目决定多肽跨膜次数 知识拓展 115 开始转移序列 starttransfersequence 和停止转移序列 stoptransfersequence 起始转移序列和终止转移序列的数目决定多肽跨膜次数 单次跨膜蛋白 开始转移序列 终止转移序列 116 两次跨膜蛋白 117 多次跨膜蛋白 118 2 导肽 leaderpeptide 与翻译后转运 post translationaltranslocation 线粒体和叶绿体蛋白质的运送与组装线粒体 叶绿体中绝大多数蛋白质以及过氧化物酶体中的蛋白质也是在某种信号序列的指导下进入这些细胞器的 在细胞质中合成的线粒体和叶绿体中的前体蛋白由成熟形式的蛋白质和N端的导肽 leaderpeptide 共同组成 119 导肽 导向序列 导向信号 转运肽 导肽的性质长约20 80个氨基酸 通常带正电荷的碱性氨基酸 含量较为丰富序列中不含有或基本不含有带负电荷的酸性氨基酸羟基氨基酸如丝氨酸含量也较高可形成既具亲水性又具疏水性的 螺旋结构 这种结构特征有利于穿越线粒体的双层膜 导肽的特异性具有细胞结构的特异性前导肽的不同片段含有不同的信息 120 翻译后转运 post translationaltranslocation 蛋白质在细胞质基质中合成以后再转移到这些细胞器中 称翻译后转运 post translationaltranslocation 蛋白质跨膜转移过程需要ATP使多肽去折叠 还需要一些蛋白质的帮助 如热休克蛋白Hsp70 使其能够正确地折叠成有功能的蛋白 121 线粒体蛋白质的运送与组装 定位于线粒体基质的蛋白质的运送 定位于线粒体内膜或膜间隙的蛋白质运送叶绿体蛋白质的运送及组装 122 定位于线粒体基质的蛋白质的运送 123 定位于线粒体内膜或膜间隙的蛋白质运送 124 叶绿体蛋白质的运送及组装 125 summary 决定新合成的多肽转移到细胞的哪个部位的信息存在于多肽本身 信号肽决定细胞质基质中开始合成的蛋白质转移到内质网膜上 缺少信号肽的多肽 只能在细胞质基质中完成蛋白质的合成 然后再根据自身的信号转移到细胞的其他部位 信号序列对于指导一个蛋白质到达一个特定的细胞器是必要和足够的 126 FigureSignalsequencesdirectproteinstothecorrectorganelle 信号序列指导蛋白质到正确的细胞器 内质网信号序列结合到胞质溶胶蛋白质 胞质溶胶内的蛋白质 无信号序列 有信号序列的内质网蛋白质转移 有内质网信号序列的胞质溶胶蛋白质 转移的信号序列 内质网信号序列 内质网蛋白质 127 128 新合成的多肽如何正确折叠成为有功能的蛋白质 蛋白质氨基酸一级结构中的信号 分子 伴侣 细胞中的某些蛋白质分子可以识别正在合成的多肽或部分折叠的多肽并与多肽的某些部位相结合 从而帮助这些多肽转运 折叠或组装 这一类分子本身并不参与最终产物的形成 信号识别颗粒 SRP 热休克蛋白Hsp70家族 129 2 蛋白质分选的基本途径与类型 1 蛋白质分选的基本途径两条途径 翻译后转运途径 在细胞质基质游离核糖体中完成多肽链的合成 然后转运至膜围绕的细胞器 如线粒体 过氧化物酶体 细胞核及细胞质基质的特定部位 共翻译转运途径 蛋白质合成在游离核糖体上起始后由信号肽引导转移至糙面内质网 新生肽边合成边转入粗面内质网腔中 随后经高尔基体运至溶酶体 细胞膜或分泌到细胞外 130 131 Roadmapofproteinsorting 共翻译转运途径 翻译后转运途径 成熟的胞质蛋白质 线粒体 叶绿体 过氧化物酶体 细胞核 内质网 高尔基体 细胞表面 溶酶体 质膜 132 2 蛋白质分选的类型 跨膜转运 transmembranetransport 膜泡运输 vesiculartransport 选择性的门控转运 gatedtransport 细胞质基质中的蛋白质的转运 分选指令存在于多肽自身 继信号肽假说提出与确证后 人们又发现了一系列的信号序列 指导蛋白质的定向转运 133 FigureThreemainmechanismsbywhichmembrane boundedorganellesimportproteins 膜被细胞器通过三种机制之一输入蛋白质 通过核孔转运 跨膜转运 膜泡转运 134 135 3 蛋白质运输 膜泡运输是蛋白质运输的一种特有的方式 普遍存在于真核细胞中 在转运过程中不仅涉及蛋白本身的修饰 加工和组装 还涉及到多种不同膜泡定向运输及其复杂的调控过程 136 FigureProposedmovementof