化脓性感染金黄色葡萄球菌耐药性及分子流行型别分析.doc

化脓性感染金黄色葡萄球菌耐药性及分子流行型别分析 .140.检验医学2019年2月第34卷第2期Laboratory Medicine,Febru町2019，Vo1.34,No.2:1673-8640 (2019)02-0140-04:阳78.1文献标志码:A DOI:10.3969/j.i ssn.1673-8640.2019.02.010化服性感染金黄色葡萄球菌耐药性及分子流行型别分析周珊，刘家云，马越云，周柯，周磊，郝晓柯，徐修礼(西京医院全军临床检验医学研究所，陕西西安710032)摘要:目的分析xx年上半年西京医院化服性感染金黄色葡萄球菌的耐药性及分子流行型别，为临床合理用药提供依据。 方法收集xx年1-6月分离自化服性感染患者服性分泌物样本的金黄色葡萄球菌，采用Vitek2Compact全自动微生物鉴定系统进行菌株鉴定及药物敏感性试验，采用多位点序列分型(MLST)联合spa分型方法进行分子流行病学分型。 结果共分离金黄色葡萄球菌171株，其中社区感染113株，医院感染58株。 医院感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分离率(62.07%)明显高于社区感染(30.97%)。 分子分型结果显示，医院感染和社区感染MRSA分别以ST239-t030和S T239-t037为主。 结论xx年上半年西京医院化服性感染金黄葡萄球菌医院感染和社区感染在多个方面存在明显差异。 MRSA克隆型别相对比较集中，医院感染存在院内播散现象。 应加强医院感染控制力度，降低医院感染发生率。 关键词:化隙性感染;金黄色葡萄球菌;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌;多位点序列分裂spa分型;耐药性Drug resistanceand molecular epidemiology of Staphylocous aureus with suppurativeinfectioD ZHOUShan.LIU Jiayun.MA Yu川n.ZHOU Ke.ZHOU Lei.HAO Xiaoke.XU Xiuli.CInstitute ofClinicalLaboratory MedicineofPeoples LiberationArmy.Xijing Hospital.Xian710032.Shaanxi.China)Abstract:Objective Toanalyze thedrug resistanceand molecularepidemiology ofStaphylocous aureuswith suppurative infection in the first half ofxx.and toprovide areference forthe rationaluse ofantibiotics.Methods Theclinical isolates ofStaphylocous aureuswithsuppurativeinfectionwere collectedfrom Januaryto June,xx.Identification anddrug susceptibilitytest wereperfonned byVitek2Compact automaticmicrobial identificationsystem.The molecularepidemiology ofStaphylocous aureuswas analyzedby spatyping andmultilocus sequencetyping(MLST).Results Atotal of171isolatesofStaphylocous aureuswere isolated.Th erewere113isolates仕om munity infection and58isolates fromnosoial infection.The methicillin-resistant Staphy/ocous aureus(MRSA)isolation ratein nosoial infection groupwas62.07%,which washigher thanthat inmunityinfection group(30.97%).The resultsof moleculartyping showedthat themain typesin nosoialand munityinfection groupswere ST239-t030and ST239-t037,respectively.ConclusioDS AtXijing Hospital inthefirsthalfofxx,there aredifferences forStaphy/ocous aureusbetween nosoialand munityinfection groups.MRSA clonesare relativelyconcentrated,and nosoialinfectiongrouphas spreadphenomenon.Th econtrol ofnosoialinfect?on shouldbe s位.engthened，in orderto reducethe incidenceofnosoial infection.Key words:Suppurative infection;Staphy/ocous aureus;Methicillin-resistant Staphy/ocous aureus;Multilocus sequencetyping;Spa typing;Drug resistance金黄色葡萄球菌是引起医院和社区化服性感染的主要病原菌，特别是化服性皮肤、软组织感染，大部分由金黄色葡萄球菌引起。 化服性感染若未得到有效控制，极易导致更基金项目:陕西省自然科学基金资助项目(xxJM4188)为严重的感染，如脑膜炎、骨髓炎和重症肺炎等J。 本研究分析分离自化服性感染样本的171株金黄色葡萄球菌的耐药性及分子流行型别，旨在为临床治疗及控制医院感染提供有作者简介:周珊，女，1984年生，硕士，主治医师，主要从事细菌耐药机制研究。 通信作者:徐修礼，E-mai1:xx1xx1frrunu.。 万方数据检验医学2019年2月第34卷第2期Laboratory Medicine,February2019,Vo l.34,NO.2.141.效的参考依据。 1材料和方法1.1菌株收集xx年1-6月西京医院分离自化服性感染患者服性分泌物样本的所有金黄色葡萄球菌，排除分离自同一患者相同部位的重复菌株，最终筛选出符合条件的菌株171株，其中社区感染金黄色葡萄球菌113株(社区感染组)，医院感染金黄色葡萄球菌58株(医院感染组)0质控菌株为金黄色葡萄球菌标准菌株(ATCC 25923、ATCC29213)，由国家卫生计生委临床检验中心提供O1.2仪器与试剂Vitek2Compact全自动微生物鉴定系统(法国生物梅里埃公司),T100PCR扩增仪(美国ABI公司),PowerPac基础电泳仪(美国BioRad公司);培养基及药物敏感性试验纸片(英国Oxoid公司),QIAamp DNA提取试剂盒(德国Qiagen公司),PCR试剂及溶葡萄球菌酶生工生物工程(上海)股份有限公司。 1.3方法1.3.1药物敏感性试验及数据分析采用Vitek2Compact全自动微生物鉴定系统检测为苯瞠西林耐药的菌株，采用头子包西丁纸片法进行复合，以确定是否为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylocous aureus,MRSA)菌株。 参照美国临床实验室标准化协会(the C1inica1and Laboratory Standards Institute,CLSI)MIOO-S24文件推荐的方法进行药物敏感性试验2O1.3.2基因组DNA提取按照QIAamp DNA提取试剂盒说明书要求提取分离纯化的单克隆菌株DNA。 提取后测定基因组DNA纯度及浓度，置于-80OC冰箱保存备用匀。 1.3.3分子分型以全基因组DNA为模板，在退火温度为600C的条件下进行聚合酶链反应(polymerase chainreaction,PCR)，对菌株进行spa分型，PCR产物送生工生物工程(上海)股份有限公司测序，测序结果在分型网站spa.ridom.de上进行比对以确定型别。 依据金黄色葡萄球菌7个管家基因(arcC、aroE、glpF、gmk、pta、tpi、yqil)对细菌进行多位点序列分型(multilocus sequencetyping,MLST)0PCR引物及反应体系依据.mls t.要求进行，PCR产物测序后，在该网站进行比对以确定型别钊。 l.4统计学方法采用who5.6软件进行数据分析飞2结果2.1菌株科室分布171株金黄色葡萄球菌中，社区感染菌株113株，分别分离自烧伤科、皮肤科和骨科等科室，其中烧伤科分离菌株数占社区感染菌株总数的32.74%;医院感染菌株58株，主要分离自烧伤科、骨科、消化科等科室，其中烧伤科分离菌株数占医院感染菌株总数的39.65%，且多为MRSA。 见表1。 表1171株金黄色葡萄球菌科室分布社区感染组(113株)医院感染组(58株)科室MRSA MSSA百分比(%)MRSA MSSA百分比(%)烧伤科122532.7421239.65皮肤科142231.86226.90骨科71418.5811527.58放疗科。 119.74。 46.90耳鼻喉科245.31。 0.00免疫科。 21.77。 23.45消化科O。 0.002715.52合计3578100.003622100.00注:MSSA为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(methicillin-susceptible Staphylocousaureus)2.2药物敏感性试验结果171株金黄色葡萄球菌中，MRSA分离率医院感染组为62.07%，社区感染组为30.97%，二者差异有统计学意义(P0.05)。 医院感染菌株对抗菌药物的耐药率明显高于社区感染菌株。 2个组菌株对头子包西丁、红霉素、克林霉F万方数据?.142.检验医学2019年2月第34卷第2期Laboratory Medici肘，February2019，飞101.34,NO.2素、复方磺胶甲嗯瞠、环丙沙星、左氧氟沙星、利福平这7种常用抗菌药物的耐药率也存在明显差异(P 未检出对利奈瞠胶、替考拉宁、万古霉素以及替加环素耐药菌株。 见表2。 表22组金黄色葡萄球菌对常用抗菌药物的耐药率(%)抗菌药物青霉素头子包西丁红霉素克林霉素复方磺胶甲嗯瞠环丙t?星左氧氟沙星利福平利奈瞠胶替考拉宁万古霉素替加环素社区感染组(113株)92.9230.9772.4241.5913.2724.7823.8910.620.000.000.000.00注:与医院感染组比较，*P0.052.3分子分型结果医院感染组(58株)96.5562.0787.9368.9725.8658.6256.9036.210.000.000.000.00对金黄色葡萄球菌7个管家基因(gmk、glpF、aroE、tpi、yqil、arcC、pta)进行PCR扩增，扩增产物测序后在相关网站进行比对，医院感染组检出3个ST型别(ST 239、ST59和ST398)，社区感染组检测出7个ST型别(ST 239、ST 5、ST 6、ST 7、ST 59、S T121和ST398)0171株化服性感染金黄色葡萄球菌共检出9个spa型别，见图10M2345678910(bp注M为DN Amark er;1为spa-t030;2为spa-t037;3为spa-t2460;4为spa-t437;5为spa-t3625;6为spa-t2092;7为spa-t091;8为spa-t701;9为spa-t002图1spa型别分布医院感染组菌株型别相对比较集中，36株MRSA菌株均为ST239，其中25株为ST239-t030,11株为ST239-t037，且这11株MRSA菌株均分离自骨科22株MSSA仅检出ST59-t437和ST398-t36252个常见型别。 医院感染组菌株分子分型存在明显科室分布特点。 社区感染组菌株分子分型科室分布比较分散，MRSA菌株主要以ST239-t030和ST239-t037为主，仅有l例耳鼻喉科门诊患者服性分泌物样本中检出ST5-t2460型别的MRSA oMSSA菌株分子分型科室分布未见集中趋势，如ST59-t437菌株，在烧伤科、皮肤科、骨科等多个科室均被检出。 见表30表3171株金黄色葡萄球菌分子分型科室分布科室社区感染组(113株)MRSA(35株)MSSA(78株)烧伤科ST239-t030ST5-t 002、ST59-t 437、ST398-t3625ST239-t037皮肤科ST239-t030ST59-t 437、ST7-t 091、S Tl21-t 2092、ST239-t037ST398-tl793骨科S T239-t030ST5-t 002、ST59-t 437、ST398-t3625ST239-t037放疗科ST5-t 002、ST7-t 091、ST59-t 437、S Tl21-t2092耳鼻喉科ST239-t037ST5-t 002、ST59-t437ST5-t2460免疫科ST6-t 701、ST7-t091消化科医院感染组(58株)MRSA(36株)S T239-t030ST239-t030ST239-t037ST239-t030MSSA(22株)ST398-t3625S T59-t437ST398-t3625ST59-t437S T398-t3625ST59-t437万方数据检验医学2019年2月第34卷第2期LaboratoryMedicine,February2019,Vo l.34,No.2.143.3讨论金黄色葡萄球菌引起的感染一直是我国医院感染和社区感染的主要病原菌。 近年来，由于各种抗菌药物的不合理使用，MRSA的检出率逐年增加并呈现多重耐药的趋势，给临床治疗带来了极大的困难句。 在金黄色葡萄球菌所致的化服性感染中，医院感染和社区感染无论在科室分布还是耐药率，或者分子流行病学特点上，均存在着诸多差异。 本研究发现，医院感染菌株科室分布相对比较集中，主要从烧伤科和骨科检出。 MRSA分离率医院感染组(62.07%)明显高于社区感染组(30.97%)。 由于MRSA不仅对?-内酷胶类抗菌药物、酶抑制剂复合抗菌药物及碳青霉烯类抗菌药物耐药，同时对大环内醋类、林可霉素类和唾诺自同类抗菌药物也有较高的耐药率，因此医院感染菌株对各种抗菌药物的耐药率明显高于社区感染菌株。 在分子分型方面，社区感染菌株分子型别比较分散，而医院感染菌株则相对集中，36株MRSA均为ST239，其中骨科11株菌株为ST239-t037，其他3个检出科室均为ST239-t030.与本课题组前期关于重症监护病房金黄色葡萄球菌分子流行情况研究结果基本一致，医院感染MRSA分子型别以ST239-t037和ST239-t030为主7J。 有研究结果表明，在分离自我国16家三级甲等综合性医院的236株MRSA中，ST239-t030/t037-SCCm型占50%町，可见ST239-t030和ST239-t037直是我国医院感染MRSA主要流行株。 袁挺等坷的研究结果显示.ST239-t030和ST239-t037菌株主要在亚洲|被检出，在我国上海、北京和浙江等地区也有报道，并且该克隆株为多重耐药菌株。 KONG等l OJ的研究结果显示.ST239-t030/t037高携带sasX、pvl、和qacA/B新型毒力基因。 因此，ST239-t030/t037菌株在医院的流行播散应当引起医院感染控制部门和临床科室的高度重视。 以上研究结果表明，化服性感染金黄色葡萄球菌中，医院感染菌株的耐药率明显高于社区感染菌株，且MRSA分子型别主要以ST239-t030和ST239-t037为主，由于该克隆株为多重耐药菌株，故一旦确诊为MRSA引起的化服性感染，临床应高度重视，及早进行抗感染治疗。 同时，基于医院感染菌株存在科室播散现象，应当加强医院感染控制力度，有效降低医院感染发生率。 参考文献1陈烨，董业峰，董德平.海安地区引起皮肤软组织感染的金黄色葡萄球菌的分子特征及其耐药性分析J.检验医学，xx,31 (10):844-847.2Clinical andLaboratoryStandardsInstitute.Perforrnance standardsfor antimicrobialsusceptibility testingS.M100-S24,CLSI,xx.3张静华，袁应华，刘娇，等.2种表型试验检测葡萄球菌诱导型克林霉素耐药的评估及基因分析J.检验医学，xx,30 (12):1238-1242.4崔兰卿，李耘，薛峰，等-苯瞠西林敏感甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的分子流行病学及耐药性分析J.中国临床药理学杂志，xx,31 (11):912-915.5张欣，喻华，黄湘宁.xx-xx年四川省金黄色葡萄球菌对万古霉素及利奈略胶耐