微生物医学-24、25章（二节）

病毒感染的检查方法与防治原则,第24章,病原生物学教研室 付玉荣,第一节 病毒感染的检查方法,第二节 病毒感染的特异性预防,第三节 病毒感染的治疗,病毒感染的检查,检测内容,查病毒,查特异性抗体,病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶,电镜直接观察 光镜检查包涵体 分离培养,一、标本的采集与送检,原则基本与细菌相似，但应注意：1. 急性期样本2. 标本用“双抗”或两性霉素B处理 3. 低温保存，尽快送检4. 血清学诊断采双份血清,二、病毒的分离与鉴定,一般程序：,标本,无菌处理,动物接种鸡胚培养细胞培养,指标阳性指标阴性,病毒鉴定,盲传23代,指标阴性,病毒阴性,（一）病毒的分离培养 动物接种（animal inoculation） 鸡胚接种（egg inoculation） 细胞培养（cell culture）,二、病毒的分离与鉴定,细胞培养 单层细胞培养（monolayer cell culture） 分类 悬浮细胞培养（suspended cell culture） 原代细胞（primary cell）细胞种类 二倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line）,细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落,(1) 细胞病变效应(cytopathic effect, CPE),(2) 红细胞吸附（hemadsorption）,病毒囊膜表面血凝素(HA)红细胞表面HA受体,(3)干扰现象（interference）,(4)细胞代谢改变,（二）病毒鉴定,1. 病毒形态学鉴定,2. 病毒血清学鉴定,3. 病毒分子生物学鉴定,二、病毒的分离与鉴定,（三）病毒数量与感染性测定,1.血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）,2.蚀斑形成试验 （plaque formation test） 3.50组织细胞感染量 （50 tissue culture infectious dose, TCID50）,感染性病毒量,二、病毒的分离与鉴定,（一）形态学检查： 电镜：病毒颗粒；光镜：包涵体,三、病毒感染的诊断,（二）病毒成分检测：蛋白抗原、核酸,（三）血清学诊断,应用：采取标本分离病毒为时已晚目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒为证实所分离的病毒的临床意义进行血清流行病学调查等,1. 中和试验（neutralizing test）,病毒中和抗体 病毒失去感染性 特点：特异性高，抗体维持时间长应用：人群免疫情况的调查 临床诊断少用,2. 血凝抑制试验（hemagglutination inhibition test）正粘病毒型与亚型鉴定 病毒鸡红细胞凝集（血凝试验） 病毒特异性抗体鸡红细胞不凝集 （血凝抑制试验）,特点：特异性高，简单 应用：鉴定病毒种、型、亚型,3. IgM,特点：特异性低，抗体出现早，消失快 应用：近期感染指标。,三、病毒感染的血清学诊断,第一节 病毒感染的检查,第二节 病毒感染的特异性预防,第三节 病毒感染的治疗,灭活疫苗（inactivated vaccine）减毒活疫苗（attenuated vaccine）亚单位疫苗（subunit vaccine）基因工程疫苗（genetically engineering vaccine)重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine）核酸疫苗（nucleic acid vaccine）,一、人工主动免疫常用生物制品,二、人工被动免疫常用生物制品,免疫球蛋白 血清丙种球蛋白 细胞免疫制剂 IFN-、 细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF 淋巴因子激活的杀伤细胞 LAK细胞,第一节 病毒感染的检查,第二节 病毒感染的特异性预防,第三节 病毒感染的治疗,病毒,穿入,脱壳,核酸复制、转录 及蛋白质合成,装配,吸附,释放,核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物 干扰素和干扰素诱生剂 中草药 基因治疗剂 治疗性疫苗,抗病化学制剂,反义寡核苷酸干扰RNA核酶（ribozyme）,第25章,呼吸道病毒,病原生物学教研室 付玉荣,呼吸道病毒(Viruses associated with respiratory infections）: 以呼吸道为侵入门户 在呼吸道黏膜上皮细胞增殖 引起呼吸道局部感染或呼吸道以外 组织器官病变,第一节 正粘病毒(orthomyxoviridae),第二节 副粘病毒（paramyxoviridae),一、生物学性状 二、致病性和免疫性 三、微生物学检查法 四、防治原则,主线,第三节 冠状病毒（coronavirus),第四节 其他呼吸道病毒,流感病毒（Influenza Virus）,有包膜， -ssRNA,RNA分节段是引起流行性感冒的病原体分甲、乙、丙三型甲型流感病毒常引起流感的大流行,NA,HA,包膜,基质蛋白,核心,RNA,核蛋白,RNA聚合酶,一、生物学性状,主要抗原结构,核糖核蛋白基质蛋白血凝素神经氨酸酶,一、生物学性状,决定病毒的型特异性，少发生变异,决定病毒的亚型特异性，易发生变异,抗原变异机制,* 抗原性漂移（Antigen drift）: 量变，变异幅度小，常造成流感中小流行*抗原性转变（Antigen shift）：质变，变异幅度大，常引起流感大流行,一、生物学性状,* 传播途径：飞沫传播* 传染源：患者、隐性感染者、被感染动物* 机理* 致病特点：无病毒血症；发病率高、死亡率低,二、致病性与免疫性,流感病毒,呼吸道,毒性物质进入血流,呼吸道炎症,全身中毒症状,* 并发症：多见于婴幼儿、老人、慢性病患者原发性病毒性肺炎继发细细菌性肺炎,二、致病性与免疫性,* sIgA抗体有阻断病毒感染的保护作用 * 抗HA、NA特异性抗体为中和抗体 * 抗NP特异性抗体具有型特异性,免疫性,二、致病性与免疫性,* 血清学诊断补体结合试验（compliment fixation，CF）* 病毒分离标本：口腔含漱液培养：猴肾细胞和鸡胚尿囊腔结果：红细胞凝集、血凝抑制试验分型* 快速诊断间接免疫荧光检查鼻咽分泌物,三、微生物学检查法,* 灭活病毒疫苗，定期注射* 病毒亚单位疫苗：血凝素* 对症治疗，防止细菌性并发症,四、防治原则,第一节 正粘病毒(orthomyxoviridae),第二节 副粘病毒（paramyxoviridae),一、生物学性状 二、致病性和免疫性 三、微生物学检查法 四、防治原则,主线,第三节 冠状病毒（coronavirus),第四节 其他呼吸道病毒,1. 生物学性状,* -ssRNA，不分节段* 包膜有HA和HL两种糖蛋白突起* 病毒抗原稳定，只有一个血清型* 唯一自然储存宿主是人，主要侵犯儿童* 病毒抵抗力弱，一般消毒即可灭活,一、麻疹病毒,2. 致病性与免疫性,* 传染源 急性期患者 出疹前6天至出疹后3天都有传染性* 传播途径 飞沫传播，也可通过玩具传播,一、麻疹病毒,入侵（CD46为病毒受体）,淋巴结内增殖,入血（第一次病毒血症）,侵入淋巴组织和单核吞噬细胞系统,增殖后再次入血（第二次病毒血症）,多种组织、器官受累，表现为细胞融合成多核巨细胞，核内形成嗜酸性包涵体等,发热畏光、流泪口腔黏膜出现柯氏斑皮肤出现红色斑丘疹,一、麻疹病毒,临床表现（发病率高）呼吸道并发症细菌性肺炎、支气管炎，最常见（4%，死亡主要原因） 神经系统并发症脑炎亚急性硬化性全脑炎 （subacute sclerosing panencephalitis,SSPE),一、麻疹病毒,* 免疫性中和保护作用HA和HL蛋白抗体好发于6个月到5岁儿童麻疹发病期间免疫系统受到抑制终生免疫,一、麻疹病毒,3. 微生物学检查法,* 病毒分离：复杂费时，临床不用* 血清学诊断* 快速诊断：免疫荧光检测病毒抗原,一、麻疹病毒,4. 防治原则,隔离患者人工自动免疫，麻疹、腮腺炎、风疹三联疫苗被动免疫,一、麻疹病毒,1. 生物学性状,* 属副粘病毒科副粘病毒属鸡胚羊膜腔增殖-ssRNA* 一个血清型* 人是唯一自然储存宿主,二、腮腺炎病毒,病毒,口鼻,上呼吸道,血液,a、病毒血症（腮腺和神经组织）,b、病毒血症（其他器官：胰腺、睾丸、卵巢）,2. 致病性与免疫性,二、腮腺炎病毒,腮肿特点,腮肿边缘不清,皮肤颜色不改变,无脓液,腮腺管口红肿,三不特点,二、腮腺炎病毒,第一节 正粘病毒(orthomyxoviridae),第二节 副粘病毒（paramyxoviridae),一、生物学性状 二、致病性和免疫性 三、微生物学检查法 四、防治原则,主线,第三节 冠状病毒（coronavirus),第四节 其他呼吸道病毒,重症急性呼吸综合征冠状病毒SARS Coronavirus, SARS CoV,SARS 2002年底在佛山首次报道空气飞沫或密切接触传播；冬春季；普通感冒、咽喉炎潜伏期：212天，通常45天呈显著家庭和医院集聚现象,生物学性状,* 包膜表面有明显突起* +ssRNA* 在细胞上有明显CPE* 感染灵长类动物，出现典型的SARS症状,诊断,* 主要依靠临床和流行病学资料* 病原学病毒分离RT-PCR免疫荧光、ELISA* 实验室要求严格生物安全资格（ BSL-3 ）* 病原学诊断尚不成熟,第一节 正粘病毒(orthomyxoviridae),第二节 副粘病毒（paramyxoviridae),一、生物学性状 二、致病性和免疫性 三、微生物学检查法 四、防治原则,主线,第三节 冠状病毒（coronavirus),第四节 其他呼吸道病毒,1. 生物学性状,* 单股正链RNA病毒