SDS-PAGE试剂配方

精品文档 1欢迎下载 SDS PAGESDS PAGE 电泳所用溶液电泳所用溶液 3030 聚丙烯酰胺溶液聚丙烯酰胺溶液 100 100 mL mL 丙烯酰胺 Arc 29 g N N 亚甲双丙烯酰胺 Bis 1 g 用双蒸水定容至 100mL 过滤备用 4 存放 丙稀酰胺 29 2g N N 甲叉双丙稀酰胺 0 8g 加入去离子水定容至 100mL pH 值不能超过 7 0 过滤 于棕色玻璃瓶中 4 贮存 5 5 Tris Tris 甘氨酸缓冲液甘氨酸缓冲液 1 1 L L Tris 碱 15 1 g 甘氨酸 电泳级 94 g 10 SDS 50 mL 使用时稀释 5 倍使用 2 2 SDSSDS 凝胶加样缓冲液凝胶加样缓冲液 10mL 10mL 0 5 mol L Tris Cl pH 6 8 2 mL 10 W V SDS 4 mL 甘油 2 mL 巯基乙醇 1 0 mL DTT 二硫苏糖醇 0 31g 溴酚兰 0 02g 双蒸水 0 5 mL 室温存放备用 考马斯亮蓝染色液考马斯亮蓝染色液 考马斯亮蓝 R 250 G 250 1 0 g 甲醇 450 mL 冰醋酸 100 mL ddH2O 450 mL 0 2g 考马斯亮蓝 R250 84mL 95 乙醇 20mL 冰醋酸 定容至 200mL 过滤备用 考马斯亮蓝脱色液 甲醇脱色液效果好 但有毒性 考马斯亮蓝脱色液 甲醇脱色液效果好 但有毒性 甲醇 100 mL 冰醋酸 100 mL ddH2O 800 mL 医用酒精 冰醋酸 水 4 5 0 5 5 V V V 精品文档 2欢迎下载 SDS PAGESDS PAGE 所需溶液所需溶液 A A 液液 3030 丙稀酰胺 丙稀酰胺 W VW V 丙稀酰胺 29 2g N N 甲叉双丙稀酰胺 0 8g 加入去离子水定容至 100mL pH 值不能超过 7 0 过滤于棕色玻璃瓶中 4 贮存 B B 液液 1 5mol L1 5mol L TrisTris HClHCl pH8 8pH8 8 18 17g 9 09g Tirs 碱 溶于 80mL 40mL 去离子水中 加入约 3mL 1 5mL 以上的浓盐酸调节 pH 值至 8 8 定容至 100mL 50mL C C 液液 1 5mol L1 5mol L TrisTris HClHCl pH6 8pH6 8 12 1g 6 05g Tirs 碱 溶于 80mL 40mL 去离子水中 加入约 7mL 3 5mL 以上的浓盐酸调节 pH 值至 6 8 定容至 100mL 50mL D D 液液 1010 SDSSDS 10g 2g SDS 溶于去离子水中 定容至 100mL 20mL 加热至 68 助溶 E E 液液 1010 过硫酸铵 过硫酸铵 5g 0 5g 过硫酸铵 溶于 50mL 5mL 去离子水中 现配现用或分装至 0 5mL 离心 管中冷冻备用 F 液 TEMED N N N N 四甲基乙二胺 原液 室温保存 精品文档 3欢迎下载 表表 1 1 配制配制 Tris Tris 甘氨酸甘氨酸 SDSSDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液 成分配制不同体积和浓度凝胶所需各成分的体积 mL 510152025304050 1010 胶胶 水1 94 05 97 99 911 915 919 8 30 丙烯酰胺混合液1 73 35 06 78 310 013 316 7 1 5 mol L Tris pH8 8 1 32 53 85 06 37 510 012 5 10 SDS0 050 10 150 20 250 30 40 5 10 过硫酸铵0 050 10 150 20 250 30 40 5 TEMED0 0020 0040 0060 0080 010 0120 0160 02 1212 胶胶 水1 63 34 96 68 29 913 216 5 30 丙烯酰胺混合液2 04 06 08 010 012 016 020 0 1 5 mol L Tris pH8 8 1 32 53 85 06 37 510 012 5 10 SDS0 050 10 150 20 250 30 40 5 10 过硫酸铵0 050 10 150 20 250 30 40 5 TEMED0 0020 0040 0060 0080 010 0120 0160 02 表表2 2 配制配制Tris Tris 甘氨酸甘氨酸SDSSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶所用溶液聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶所用溶液 成分配制不同体积和浓度凝胶所需各成分的体积 ml 123456810 水0 681 42 12 73 44 15 56 8 30 丙烯酰胺混合液0 170 330 50 670 831 01 31 7 1 5 mol L Tris pH6 8 0 130 250 380 500 630 751 01 25 10 SDS0 010 020 030 040 050 060 080 1 10 过硫酸铵0 010 020 030 040 050 060 080 1 TEMED0 00