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实验四血凝和血凝抑制试验 一 实验目的 掌握血凝和血凝抑制试验的原理和操作方法 能够正确判定试验结果并对结果进行分析 二 血凝试验 Hemagglutination HA 血凝现象 有些病毒可凝集某些动物 如鸡 鹅 豚鼠 绵羊 和人的红细胞 RBC 原理 血凝素与RBC表面相应受体结合 引起RBC凝集 用以测定病毒的含量 HA试验的原理示意图 用途 确定病毒的含量 计算病毒的血凝价 为血凝抑制试验做准备血凝价 能使血球产生50 凝集的病毒最高稀释度血凝单位 试验材料 鸡新城疫病毒鸡红细胞 采集健康鸡血液 以阿氏液抗凝 用生理盐水洗涤3 5次 将血浆 白细胞等充分洗去 用生理盐水配成1 红细胞悬液备用灭菌0 85 生理盐水96孔U型微量反应板 微量移液器 灭菌塑料吸头 操作步骤 在血凝板第一排的1 12孔加入50 l生理盐水 在第1孔中加入50 l病毒 混匀后吸50 l到第2孔 如此倍比稀释直到第10孔 混匀后弃50 l 最后两孔 11 12 为红细胞对照 将1 的红细胞轻轻摇动混匀 在1 12孔中每孔加入50 l 手工震荡 37 静置30min 室温40分钟 后观察结果 结果判定 血凝价A 26B 25C 22D 27 ABCD 以50 的红细胞发生凝集的病毒悬液的最高稀释度作为该病毒液的红细胞凝聚效价 即一个血凝单位 血凝价 1 256 三 血凝抑制试验 HemagglutinationInhibition HI 原理 抗体与血凝素结合 封闭血凝素 使之不能与红细胞结合 HI试验的原理图 用途 用于检测血清中抗体含量 鉴定病毒的型 亚型 血凝抑制价 能完全抑制血球凝集的最高血清稀释度即为该血清的血凝抑制价 试验材料 4个血凝单位鸡新城疫病毒鸡红细胞 同上被检血清 采自被检鸡的血清 灭菌0 85 生理盐水96孔U型微量反应板 微量移液器 灭菌塑料吸头 在血凝板的1 12孔加入25 l生理盐水 最后2孔加50 l 第1孔加入待检血清25 l 混匀后吸25 l至第2孔 倍比稀释直至第10孔 混匀后弃25 l 在1 10孔 每孔加稀释好的25 l4个血凝单位的病毒悬液 室温静置30分钟将红细胞轻轻摇动混匀 在1 12孔中每孔加入50 l手工震荡1min 在37 静置30min 室温40分钟 后观察结果 操作步骤 判定结果 能将病毒凝集红细胞的作用完全抑制的血清的最高稀释倍数为该血清的红细胞凝集抑制效价
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