梅毒的实验室诊断

梅毒的实验室诊断,检验科 常会忠,梅毒是一种几乎可以侵犯全身所有器官，而产生多种症状和体征的慢性传染性疾病。十六世纪初由欧洲传入亚洲，后蔓延我国。梅毒又称为杨梅疮、广东疮、疳疮、下疳、霉疮等。,本草纲目：“杨梅疮，古方不载，亦有无病者；近时起于岭南，传及四方。”第一部论述梅毒最完善的专著：霉疮秘录明代 陈同成我国解放后，基本上消灭了此病，但近年来又有新的病例发现,病原体为梅毒螺旋体，属于密螺旋体属，苍白密螺旋体苍白亚种(Treponema pallidum subspecies pallidum) 苍白亚种 梅毒 苍白螺旋体 地方亚种 地方性梅毒 极细亚种 雅司病密螺旋体属 品他螺旋体 品他病,梅毒螺旋体的生物学特性,1、直径 0.100.15m，有814个致密而规则的 小螺旋，两端尖直。2、原生质圆柱体上紧绕着34根周浆鞭毛，故运 动活跃，运动方式多样。3、G-，但不易着色。Fontana镀银染色呈棕褐色。4、在无活细胞的人工培养基中难培养，生长慢。,5、抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感；对青霉 素、四环素、红霉素等抗生素敏感。,梅毒螺旋体,梅毒的传播途径,1、直接性接触2、血液传播：输血3、垂直传播：胎盘传播。4、间接传播：日常用品、接吻、哺乳、医疗器械等途径。,梅毒的分期,梅毒螺旋体,皮肤或粘膜局部繁殖,期（初期）梅毒：,期（初期）梅毒：,期梅毒（包皮硬下疳）,期梅毒 （巨大下疳）,部位：绝大部份在外生殖器。形态：园形或椭园形，直径约12cm，边界清楚，周围稍隆起，内含大量梅毒螺旋体，传染性极强。 特点: 常单个；触诊有软骨样感；无痛可自愈。,期（中期）梅毒,期（中期）梅毒,发生于硬下疳出现后28周。皮疹泛发对称，一般无自觉症状梅毒疹和淋巴结中，存在大量梅毒螺旋体。,期梅毒（玫瑰疹）,期梅毒（梅毒疹）,期（晚期）梅毒：,期（晚期）梅毒：,基本损害为慢性肉芽肿病损内螺旋体少但破坏性大,期梅毒（树胶肿）,期梅毒（溃疡坏死）,梅毒的实验室检测方法,显微镜检测法： （1） 暗视野显微镜检查 （2） 镀银染色检查血清学检测法： 非梅毒螺旋体抗原血清试验 （1）VDRL(性病研究实验室试验)：需灭活 （2）USR（不加热血清反应素试验） （3）RPR(加速血浆反应素环状卡片试验) （4）TRUST(甲苯胺红不加热血清试验) 梅毒螺旋体抗原血清试验 （1）FTA-ABS （2）TPPA/ TPHA （3）TP-ELISA （4）发光法 （5）胶体金法,暗视野显微镜检查,标本类型：梅毒硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损的渗出液、淋巴结穿刺液方法：暗视野显微镜下查找梅毒螺旋体。结果：典型的梅毒螺旋体呈白色发光, 其螺旋较密而均匀。运动方式： 伸缩其螺旋间距离而移动（主要方式）蛇行式旋转式评价：. 简单、可靠。. 早期：硬下疳（梅毒血清学试验仍阴性）。. 阴性不能排出患梅毒的可能性,螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最好方 法，WHO指定其为性病实验室必备项目之一,镀银染色检查,基本原理：梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶液染色，从而可以在镜下观察到梅毒螺旋体结果：棕褐色的梅毒螺旋体,血清学检测法,梅毒螺旋体侵入人体后产生： 抗心磷脂抗体：即非特异性抗体、反应素。两种抗体 抗梅毒螺旋体抗体：,非梅毒螺旋体抗原血清试验,TRUST（甲苯胺红不加热血清试验）基本原理：在心磷脂、卵磷脂和胆固醇等组成的抗原中加入甲苯胺红，与待检血清中的反应素结合，形成肉眼可见的红色絮状物。,非梅毒螺旋体抗原血清试验,定性试验 (1)加样：吸取50微升血清（浆）放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈中。 (2)加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原。 (3)反应：将卡片置水平旋转仪旋转8分钟(1005)转/分钟，立即在亮光下观察结果,非梅毒螺旋体抗原血清试验,定量试验 （1）稀释液准备：在圈内加入50微升生理盐水（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。 （2）加样：吸取50微升血清与各圈中生理盐水做系列稀释，并涂布整个圈内。 （3）同定性试验中的(2)、(3)。,非梅毒螺旋体抗原血清试验,凝集反应强度分级：3+4+：圆圈内出现中到大的红色絮状物，液体清亮。2+：圆圈内出现小到大的红色絮状物，液体较清亮。1+：圆圈内出现小的红色絮状物，液体浑浊。：圆圈内仅见红色集中于中央一点或均匀分散。,孔 号 1 2 3 4 5 6 7 8 稀释倍数 原倍 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 阳性K 阴性K生理盐水(ul) - 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 - -样 品(ul) 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0弃50.0 - -阳性血清(ul) - - - - - - 50.0 -阴性血清(ul) - - - - - - - 50.0抗原悬液(ul) 50 50 50 50 50 50,操作步骤,四种非特异性试验方法比较,TPHA,基本原理：用超声裂解梅毒螺旋体制备抗原，致敏鸡红细胞，其致敏细胞与待检血清中的抗梅毒螺旋体特异性抗体结合，产生肉眼可见的凝集。,操作步骤,1. 试剂准备：试验前将试剂和待检标本恢复到室温。 2. 加稀释液：每份样本做4孔，加标本稀释液加至微量反应板孔内，第1孔100微升，第24孔各25微升。 3. 样本稀释：取血清25微升加至第1孔，混匀后取25微升至第2孔，混匀后取25微升至第3孔，混匀后取25微升至第4孔，混匀后弃去25微升。 4. 加对照液：第3孔加未致敏颗粒25微升，第4孔加致敏颗粒25微升。 5. 混合：将反应板置振荡器振荡30秒。 6.反应：置有盖湿盒，孵育2 h，或放4冰箱过夜观察结果。,结果判断,1.观察加未致敏颗粒的第3孔，不出现凝集为有效试验。 2. 观察凝集反应强度：分级如下。 4+：颗粒光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠。 3+： 颗粒光滑覆盖大部分孔底。 2+：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一颗粒环。 1+：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一明显颗粒环。 ：颗粒沉集孔底，中央形成一小点。 一：颗粒紧密沉积孔底中央。,TPHA,梅毒血清试验影响因素：,非梅毒螺旋体抗原血清学 梅毒螺旋体抗原血清学实验 感染因素 细菌性心内膜炎 传染性单核细胞增多症 软下疳 麻风 病毒性肝炎 疟疾 传染性单核细胞增多症 莱姆病 结核、麻风、麻疹、疟疾、水痘 支原体或肺炎双球菌肺炎 非感染因素 妊娠 结缔组织病， 如系统性红斑狼疮 使用毒品 甲状腺炎 恶性肿瘤 结缔组织病，如系统性红斑狼疮 多发性骨髓瘤 慢性肝脏损害,各种试验的敏感性和特异性,敏感性（%） 特异性（%） 一期 二期 隐性 晚期TRUST 86 100 98 73 98TPHA 76 100 97 94 99TP-Ab 84 100 100 96 97,结果判读,TRUST TPHA TP-Ab 临床意义 初期梅毒早期或排出 + + + 现症梅毒 + 生物学假阳性 + + 现症梅毒 + + 梅毒经治疗后 + 梅毒经治疗后,梅毒实验室检测的特点,临床表现 取材部位 检查方法一期梅毒 溃疡 淋巴结 病原学检查 血液 血清学检查二期梅毒 皮损 淋巴结 病原学检查 血液 血清学检查 潜伏梅毒 血液 血清学检查三期梅毒 血液 血清学检查 神经梅毒 血液 血清学检查 脑脊液 细胞、蛋白量检查VDRL等,不同情况