色谱柱的分类及特点.doc

.3-1 柱的结构1、堵棒（或导管）2、接头3、接头4、密封圈5、螺帽6、柱密封圈7、柱管8、柱填料910、过滤片 3-2 柱的分类：根据所有的担体材料分为三种：a.硅胶型：机械强度高，易制成小颗粒，理论塔板数高。b.聚全物型：在广泛的PH值范围内稳定c.羟基磷灰石型：对蛋白质等生物高分子样品有特殊的选择性。根据分离方式分类：a.硅胶型1） 正相：SIL磷脂、NH糖、维生素E，CN甾类激素。2） 反相：ODS（C18）、（C8 CN TMS Pheny1）低分子量化全物。3） 离子交换：WAX（弱碱阴离子交换）核苷酸、蛋白质WCX（弱酸阳离子交换）蛋白质SAX（强碱阴离子交换）核苷酸SCX（强酸阳离子交换）儿茶酚胶4）凝胶过滤：Diol蛋白质 GF蛋白质b.聚合物型：1）反相：ODP50肽，蛋白质，低分化合物。2）离子交换：ISC氨基酸，胍类化合物，ISA糖，IC无机离子，PA蛋白质，ES蛋白质。3）配位交换：SCR（磺化聚苯乙烯）糖。4）离子排阻：SCR-101H 102H有机酸5）凝胶过滤：ION多糖 GS水溶性分子6）凝胶渗透色谱（GPC）：GPD合成分子、橡胶。7）羟基磷灰石型：HPC蛋白质、核苷酸按尺寸分类：1.制备：30mm 50mm 内径，半制备：20mm内径。2.分析：标准型柱：4_8mm内径。 快速色谱柱：3mm内径、5cm长、4.6mm内径。小孔径柱：2.5mm内径，微孔径柱1mm内径。3-3柱的技术指标*耐压：不小于40Mpa。*渗透性：反相流动相甲醇1ml/min，压力3Mpa。正相正乙烷1ml/min,压力3Mpa.*柱效：理论塔板极数3x103。*对称柱：葸峰不对称因子AS在0.82.0范围内。*外观：光洁、标牌、尺寸、填充剂、流动相方向、日期等。 ODS柱ODS（C18）色谱柱是将十八烷基键合在担体的表面，然后填充的柱，在HPLC中应用广。在HPLC中反相色谱的引用占70%，其中极大部分 使用的是ODS（C18）。本公司所附的柱也是ODS（C18）柱，内径4.6mm,长度150mm。一般反相色谱系统，流动相为极性溶剂，如水、甲醇、乙腈，非极性固定相，如十八烷基。反相系统简单，重复性好，柱子能长期稳 定工作，能完成分离、分析任务的60-80%，所以分析工作者使用得最多的是反相柱。柱的使用和维护由于柱的质量直接影响到样品组分得分离情况，组分的定性，定量分析，所以在操作时必须十分注意。通常柱子损坏表现为：柱压升高，柱效下降，保留值改变，峰形崎变等。 以反相为列，它要求填料处于甲醇或乙腈中，不使柱子干枯，并注意下列事项：* 勿使柱子受较强振动* 较长时间不用时，应在柱中充满甲醇，并把两头封死，尽量不使干枯。* 当用水和甲醇（或乙腈）混合液体溶剂时，工作结束后必须用纯甲醇冲洗30分钟至1个小时，使柱子处于甲醇中，因水易繁殖微生物， 使柱子堵塞，并降低柱效。* 当使用KH2PO4等缓冲液时，盐的浓度宜低，否则盐容易析出，柱效降低，柱压升高，使用后必须用水冲洗（ 绝不能用甲醇冲洗）使缓冲液全部溶于水排出，然后再用甲醇冲洗。 * 硅基固定相不宜在PH8时使用，此时容易产生絮状物析出，堵塞柱子。* 当流动相呈酸性时，使用后必须用水冲洗，因酸使柱效降低，后再用甲醇冲洗。* 流动相最好经过过滤处理。* 样品最好也经过过滤处理。* 样品有时能复盖填料得活性点，使柱压升高，保留时间下降，防止方法是样品经过过滤。* 样品组分的不可逆吸附，使柱压升高，柱效降低（通常易被吸附的有蛋白质、糖）防止方法是加保护柱和溶剂反冲，最常用的是四氢呋喃。* 当流动相从A换到B时，A、B不相溶，必须选择一能同A、B互溶剂C，先换成C再把C换成B，最常用的中间液是异丙醇。* 由于长期使用，在较大的压力下，担体破裂而流失在柱前端形成一段空隙，使柱效下降，峰形畸变。维护方法：卸下接头，用甲醇把填料调成糊状，填入柱内，同时将过滤片用超声波清洗机清洗一次。 各种柱特点Hypersil Silica 作为大多数键合相的基质Hypersil Silica(Hypersil硅胶)在使用过程中极具耐久性及重现性.未经键合的硅胶(SiO2,Silica)色谱柱对于非极性和中性有机物的正相色谱分析非常有效。 HypersilODS(C18) HypersilODS(C18)是硅胶基质上键合了C18为官能团的色谱柱填料,是典型的高效液相色谱柱用填料,适合于分析非极性和中性样品,包括酸性,中性及亲脂性化合物。HypersilMOS和MOS2(C8) HypersilMOS和MOS-2(C8)在硅胶的表面键合单层C8烷基链,所得的色谱填料效率高、重现性好,其中MOS-2对硅胶表面作了二次衍生反应即封尾(End-capping)。MOS和MOS-2的选择性与ODS相似,但保留时间短,这有利于实现快速分析,尤其是对强疏水性分析物。 HypersilPhenyl(C6H5) Hypersil Phenyl(C6H5)色谱填料适用于反相色谱,对芳香族和中性化合物的分析具有独特的选择性,其保留行为与HypersilMOS相似,但选择性相反,尤其是对芳香烃和稠环烃.Hypersil Phe-nyl-2是进行过封尾处理的填料.HypersilSAS(C1) Hypersil SAS(C1)是采用短烷基链(C1)为官能团的硅胶键合固定相,因而在Hypersil烷基键合相中保留时间最短.HypersilSAS对极性分析物和多官能团化合物具有独特选择性,已成功地应用于离子对色谱的分离。 HypersilCPS(CN) HypersilCPS(CN)为氰丙基官能团硅胶键合填料,该色谱柱可应用于正相和反相色谱.Hypersil,CPS-2为封尾固定相.正相色谱模式时,HypersilCPS色谱柱与HypersilSilica和HypersilAPS的选择性相反,并且平衡速度快,不会被少量的水钝化;反相色谱模式时,氰基柱的选择性可补偿烷基I键合相和低疏水性。HypersilAPS2(NH2) Hypersil APS-2(NH2)是可以进行多种色谱模式的氨丙基官能团硅胶色谱填料，在弱阴离子交换、正相及反相色谱中均表现出很好的色谱性能。用Hypersil APS-2作弱离子交换分析阴离子和有机酸时,可以使用普通缓冲液和有机改性剂,而正相色谱模式时,Hypersil APS-2与硅胶(SiO2 Silica)色谱柱的选择性相反.HypersilAPS-2柱 尤 其适于糖类样品的反相色谱分析。Hypersil SAX Hypersil SAX是高度稳定的强阴离子交 换的硅胶为基质材料的色谱填料，专门为使用含水和低pH 值流动相时设计,适合分析小分子的有机酸。Hypersil SCX Hypersil SCX是可靠的强阳离子交换的硅胶为基质材料的色谱填料，适合分析小分子的有机碱。象其它的Hypersil固定相一样，Hypersil SAX和Hypersil SCX也进行了严格的质量监控以确保具有良好的重现性。Hypersil 100 为了分析保留时间较长的物质，Hypersil公司专门设计并生产了Hypersil 100,其特征是扩大了硅胶表面积和孔容.随着硅胶表面积的增大,色谱柱的分离能力也随之增大,同时使保留时间相近的谱峰得到分离,尤其是对高浓度的样品.Hypersil100选择性与Hypersil BDS相似的技术,但更加适合于分析保留时间更长的样品.Hypersil 100键合固定相含碳量高、稳定、耐用,采用均匀的窄孔球型填料,具有效率高、重现性好、操作压力低及柱寿命长等优点。Hypersil 100色谱柱是分析许多化合物的理想选择,包括有机酸、维生素和碱性化合物;同时Hypersil 100填料也适合摩尔质量达5000道尔顿的肽和多肽的分析。Hypersil 100担体范围广泛,包括硅胶、C18、C8、C4、氨基、氰基和苯基。对于制备性分离，Hypersil 100可直接放大到HyperPrep HS。HypersilGreenENVHypersil Green ENV色谱柱专门用于分析工业和农业残留的极性污染物。即使在分析物浓度很低的条件下,Hypersil Green ENV对苯酚、邻苯二甲酸酯及除草剂都有极好的选择性和重现性。Hypersil Green PAH Hypersil Green PAH色谱柱采用高碳量填料专门用来PAH污染物的分离。填料的粒度有3和5u