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文档简介
色谱柱的清洗和再生除非特殊说明,在所有情况下,所用溶剂的体积应该是色谱柱体积的 40-60 倍。应在清洗过程开始和结束时各测一次柱效和容量因子等,比较色谱柱性能的改善,以确定清洗的效果。确保色谱柱中没有样品和缓冲溶液,清洗前所用的溶剂应与最初清洗时所用的溶剂相溶。应确保实验测试时所用的流动相与色谱柱中最后的溶剂相溶。1 正相填料用四氢呋喃冲洗。用甲醇冲洗。用四氢呋喃冲洗。二氯甲烷冲洗。用无苯正己烷冲洗。2 反相填料用 HPLC 级水冲洗,冲洗时进 4 等份的 200l 的二甲亚砜(DMSO)。用甲醇冲洗。用氯仿冲洗。用甲醇冲洗。3 阴离子交换填料用 HPLC 级水冲洗。用甲醇冲洗。用氯仿冲洗。4 阳离子交换填料用 HPLC 级水冲洗;在冲洗的过程中进 4 等份 200l 的 DMSO四氢呋喃冲洗。5 蛋白质凝胶过滤填料去除蛋白质尺寸排阻介质中的污染物有两种清洗/再生的方法。弱保留蛋白质用 30moL/L pH3.0 磷酸盐缓冲液冲洗。强保留蛋白质用 100%的水到 100%的乙腈梯度洗脱 60min。6 多孔石墨化碳多孔石墨碳有四种再生的方法,选用哪一种方法依赖于被分析物和所用的溶剂。酸碱再生适合于使用极性流动相分析离子类分析物。将色谱柱倒装用 50ml 含 0.1%三氟乙酸的四氢呋喃水(1:1)溶液 1ml/min 流速冲冼。用 50ml 含 0.1%三乙胺或氢氧化钠的四氢呋喃水(1:1)溶液 1ml/min 流速冲冼。用 50ml 含 0.1%三氟乙酸的四氢呋喃水(1:1)溶液 1ml/min 流速冲冼。用 95%甲醇水溶液冲洗重新平衡。将色谱柱改为正向。作者:英国的 R.Plumb-Glaxo强有机溶剂再生适合于水相分析极性或离子类分析物。用 50ml 丙酮以 1ml/min 流速冲洗。用 120ml 二丁醚以 1ml/min 流速冲洗。用 50ml 丙酮以 1ml/min 流速冲洗。用水冲冼至平衡。正相再生适合于主要使用正相流动相的多孔石墨化碳柱。用 50ml 二氯甲烷以 1ml/min 流速冲洗。用 50ml 甲醇以 1ml/min 流速冲洗。用 50ml 水以 1ml/min 流速冲洗。用 50ml 0.1mol/L 盐酸以 1ml/min 流速冲洗。用 50ml 水以流速 1ml/min 冲洗。用 50ml 甲醇
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