重楼组织培养及快速繁殖开题报告

重楼组织培养及快速繁殖,开 题 报 告,报 告 者：杨苏文年 级： 医学生物技术2005级实习单位：贵阳医学院医学生物技术教研室指导老师：刘红美博士,内容概括,野生重楼实物图,重楼的属性及研究现状,1、重楼的属性 重楼属百合科，是多年生的草本植物。全世界该属植物约有20种10变种和若干变型，分布于欧亚大陆的热带至温带地区。 我国主产于云南、贵州、四川、广西等地。 本属植物主要以根茎入药，它具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊、止血、抗肿瘤、抗生育、免疫调节等多方面的功效。,重楼形态叶通常七片,轮生于茎顶,顶端着生一花,故而得名七叶一枝花。分布于海拔700-3200米的地区，夏秋采挖。野生重楼靠种子和根茎繁殖，种子繁殖需5-7年才能采挖。,2、市场经济分析,长期以来，人们对重楼的利用一直依靠天然野生资源，但是由于本属植物生长缓慢，每年生长量非常小，由于长期过度的掠夺式的采挖，每年的消耗远远超出野生重楼的生长量。,据云南白药集团2008年调查资料显示，分布于我国境内的野生重楼80 已被开采利用，剩下的20按目前国内外市场的需求量测算，大约仅可用35年。,常言道：物以稀为贵，黄金有价药无价。故重楼价格节节攀升。,96 01 03 06 08,21,110,38,25,170,（元/公斤）,（年）,1996年2008年重楼市场价格走势,在国内，不少知名企业所生产的药品中，主药都包含有重楼。,云南白药集团的白药中，君药就是重楼四川光大制药厂“非典”时名声大震的抗病毒冲剂中也是重用重楼江苏南通制药总厂出品的季德胜蛇药片，其中用的主药七叶一枝花及为重楼,据了解，仅国内几家大型中成药制药厂对重楼的年需求量就达1500吨左右，医院和中药店配方需求量达1000吨左右，而全国野生重楼年收购量不足1500吨。造成重楼的供求矛盾在逐渐加剧。,近几年，许多地方虽已开始重楼的人工栽培，但重楼种子萌发时间长，出苗率低，而采用根茎直接种植或根茎切段种植，也需要用大量的原料药。因此，会加剧用种与原料药的矛盾。,为了解决这些问题，人们在寻求新方案时，想到了运用植物组织培养的方法来生产重楼。这一技术的开发成功，将会为人工栽培提供大量的种苗，进而解决了资源保护和市场供需的问题。,目前，关于重楼组织培养的研究报道屈指可数，并且还没有一套完整的重楼组织培养至移栽存活的体系。因此，为了解决资源保护和市场需求的问题，对于重楼组织培养及快速繁殖的研究将刻不容缓。,主要参考文献：,1 李群，葛方兰，王丽. 重楼属植物初代培养过程中无菌培养物的建立J. 四川师范大学学报：自然科学版，2003，26（6）：624-626.2 李群，陈丽萍，葛方兰. 重楼属植物愈伤组织的诱导和培养J. 四川师范大学学报（自然科学版），2006 ，29（1）。3 杨丽云，陈翠，吕丽芬，袁理春. 云南重楼的组织培养与植株再生J. 植物生理学通讯.2008，44（5）。4 刘旭，陈玉菡，吴中应，罗川. 重楼市场需求与价格分析.中国现代中药.2007，9（6）5侯玉平，胡晓立等. 滇重楼切块繁殖不定芽发生的组织学研究.云南大学学报（自然科学版）.2004，26（6）.,1、内容简要,1.1本实验以重楼的顶芽、叶、茎、根茎、根为主要外植体，通过调控不同的激素配比来筛选出最佳培养基类型（愈伤组织诱导、不定芽的诱导、增值及生根培养基）。1.2将瓶内生根的再生植株，通过驯化，移栽到自然条件下的栽培基质中，获得优质健壮的种苗。,2、研究方法,主要是依托植物组织培养技术，利用植物细胞的全能性，对野生重楼的无性繁殖，获得大量的优良种苗。,3、研究步骤,3.1 无菌体系的建立; 3.2 诱导愈伤组织培养基的筛选;3.3 增殖培养基的筛选;3.4 生根培养基的筛选;3.5 驯化移栽;,4、技术路线,外植体,灭菌,无菌外植体,愈伤组织,诱导,增殖,不定芽,诱导,生根,驯化,移栽,成熟种苗,5、可能出现的技术问题及解决方案,（1）外植体灭菌困难。解决方法： 可先用200mg/L羧苄西林钠和头胞唑林钠进行抑菌，再拿到超净工作台中进行灭菌处理。,（2）愈伤组织难诱导，易出现褐化现象。解决方法：通过多种激素不同搭配地方法进行筛选，从而选择出最佳的培养基。对于褐化现象，我们可以加入活性炭等方法，降低褐化现象。（3）生根后，移栽不易存活。解决方法：通过组织培养的种苗要经过从异养到自养的过渡阶段，如在此阶段注意种苗的保湿以及防止其感染微生物而腐烂，就能够成活。,6 预期结果：6.1获得重楼诱导愈伤组织、分化不定芽、诱导生根的最适培养基。6.2记录诱导愈伤组织的诱导率，增值倍数，诱导生根的时间、数量、直径和长度。6.3获得驯化、移栽的存活率。6.4建立重楼无性快速繁殖体系。,预期结果：6.1 获得重楼诱导愈伤组织、分化不定芽、诱导生根的最适培养基。6.2 记录诱导愈伤组织的诱导率，增值倍数，诱导生根的时间、数量、直径和长度。6.3 获得驯化、移栽的存活率。6.4 建立重楼无性快速繁殖体系。,进度安排2009年3月份2009年4月份：查阅相关文献， 2009年5月份：选择及采集外植体，建立无菌体系2009年6月份2009年7月份：诱导愈伤组织培养基的筛选2009年8月份2010年2月份：增殖和生根培养基的筛选2010年3月份：驯化、移栽2010年4月结题、准备毕业论文。,运用组织培养和快速繁殖技术对重楼