益肾活血法治疗骨质疏松性骨折的临床观察和机制研究汇报

益肾活血法治疗骨质疏松性骨折的临床观察及作用机制研究,河南省正骨研究院河南省洛阳正骨医院河南省骨科医院孔西建,主要内容,研 究 目 标,一.,研 究 内 容,实 施 方 案,关 键 技 术,实 施 计 划,分阶段考核指标,经 费 预 算,二.,三.,四.,五.,六.,七.,一. 研究目标,一. 研究目标,以益肾活血法为纲，分方分型辨证治疗骨质疏松症、骨质疏松性骨折。通过临床观察、动物实验、细胞实验研究该治法的临床有效性及作用机制。,二. 研究内容,二.研究内容,根据中医辨证分型理论，参照中药新药临床 研究 指导原则，结合临床症状，以益肾活血法为纲， 针对肾阳虚血瘀证、肝肾阴虚血瘀证、脾肾气虚血 瘀证，拟定骨松强骨方、骨松健骨方、骨松益骨方 进行辨证治疗。通过客观的临床观察证实骨松强骨方、骨松健骨方 、骨松益骨方治疗骨质疏松症、防治脆性 骨折的 有效性和安全性；通过动物实验、细胞实验客观阐述骨松强骨、骨松 健骨方、骨松益骨方的作用机制。,三. 实施方案,实施方案,1.临床试验,2.动物实验,3.细胞实验,纳入肾阳虚血瘀证、肝肾阴虚血瘀证、脾肾气虚血瘀证试验病例240例,服药观察48周，随访1年,试验组150例（碳酸钙D3片）肾阳虚血瘀证50例，服用骨松强骨方肝肾阴虚血瘀证50例，服用骨松健骨方脾肾气虚血瘀证50例，服用骨松益骨方,观察治疗后两组病例疼痛评分、中医临床症状评分、平衡能力评分 、 骨代谢生化指标PINP、BALP、-CTX、骨密度、脆性骨折发生率及安全性指标的变化情况。,对照组90例，肾阳虚血瘀证30例，肝肾阴虚血瘀证30例，均服用阿仑膦酸钠 脾肾气虚血瘀证30例， 碳酸钙D3片,1. 临床试验,随机平行对照研究,sham组灌服生理盐水,去卵巢+假手术 SD大鼠,OVX组灌服生理盐水,E2组灌服雌二醇,低、中、高GSQGF、 GSJGF 、GSYGF组,灌服不同剂量GSQGF、 GSJGF 、 GSYGF,检测各组血尿骨代谢生化指标 DEXA检测大鼠股骨的骨密度和骨矿含量 三点弯曲实验检测大鼠股骨的生物力学性能 Micro CT检测股骨远端的骨小梁数目及形态等变化情况,给 药 3 月,2. 动物实验,体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,加入低、中、高剂量骨松强骨方、骨松健骨方、骨松益骨方水煎液+PBS,检测细胞的增殖活性检测ALP活性并进行克隆染色 茜素红和油红O分别对形成的钙化结节和脂肪滴进行染色 实时定量PCR检测成骨基因Runx-2和Osterix的mRNA表达情况,评价骨松强骨方、骨松健骨方、骨松益骨方对骨髓间充质干细胞成骨、成脂分化能力的影响,3. 细胞实验,MSCs分化,四. 关键技术,四. 关键技术,临床试验： 骨代谢生化指标PINP、BALP、-CTX的检测； 骨密度的检测； 脆性骨折的观察。,四. 关键技术,动物实验：检测各组血尿骨代谢生化指标； DEXA检测大鼠股骨的骨密度和骨矿含量； 三点弯曲实验检测大鼠股骨的生物力学性能； Micro CT检测股骨远端的骨小梁数目及形态等变化情况。,细胞实验：体外培养大鼠骨髓间充质干细胞； 检测细胞的增殖活性；检测ALP活性并进行克隆染色； 茜素红和油红O分别对形成的钙化结节和脂肪滴进行染色； 实时定量PCR检测成骨基因Runx-2和Osterix的mRNA表达情况。,四. 关键技术,四. 关键技术,拟解决的关键问题：通过客观严谨的临床观察证实益肾活血法治疗骨质疏松症、防治脆性骨折有效性、安全性，通过动物实验、细胞实验阐述益肾活血法治疗骨质疏松症的客观理论基础。,五.实施计划,五.实施计划,2016.6-2016.12 制定研究方案； 购置、制备试验药物、实验试剂等,2017.1-2017.6 纳入临床观察病例240例，进行临床观察 购置饲养实验动物；,2017.7-2017.12 240例病例临床观察，数据记录； 实施并完成动物实验,五.实施计划,2018.1-2018.6 240例病例临床观察，数据记录； 实施并完成细胞实验；,2018.7-2018.12 240例病例临床观察、随访，数据记录； 分析统计动物实验、细胞实验数据； 撰写、发表论文 ；,2019.1-2019.6 临床观察数据统计分析； 撰写、发表论文； 结题。,六.分阶段考核指标,六.分阶段考核指标,2016.12制定详细完善的研究方案；完成临床观察CRF表、受试者知情同意书等文件制作；完成骨松强骨丸、骨松健骨丸、骨松益骨丸的制备；完成临床观察检验试剂购置。,六.分阶段考核指标,2017.6完成纳入临床观察病例240例，进行临床观察、记录相关数据；完成SD大鼠、饲料及相关用品的购置，饲养大鼠做好动物实验准备工作。,六.分阶段考核指标,2017.12完成动物实验；发表学术论文1篇；申报专利1项。,六.分阶段考核指标,2018.6完成细胞实验。2018.12发表学术论文2篇。申报专利1项。申报科研成果1项。,六.分阶段考核指标,2019.6完成临床观察，进行数据统计分析；发表论文1篇；结题；申报专利1项；申报科研成果1项。,七.经费预算,七.经费预算,1.材料费：合计151100元中药费：87400元。西药费：54000元SD大鼠费用：9700元,七.经费预算,2.测试化验加工费：合计88980元临床试验：骨代谢检测费72000元 骨密度检测费79200元（院内协商免费） X线检测费84000元（院内协商免费）动物实验：Micro-CT检测费6480元细胞实验：PCR检测费10500元,七.经费预算,3.差旅费：约5000元 外出学习交流、运送动物实验验标本进行Micro-CT检测差旅费用。4.会议费：约5000元 召开会议探讨课题研究方案、总结研究成果等。5.国际合作与交流费：约3000元 课题组成员出国学习交流、邀请国外专家等费用。,七.经费预算,6.出版/文献/信息传播/知识产权事务费：合计12000元发表论文4篇约10000元，查新费约500元，申报专利3项约1500元。7.劳务费： 32000元