中期陈素雨

学生姓名： 陈素雨指导老师： 杨金煜专业学位： 普外科（专业型）,1,2014级研究生中期考核报告,2,主要内容,01 思想道德 02 课程学习 03 课题及论文发表 04 临床工作小结,3,氧化应,4,思想道德,5,氧化应,6,课程学习,修完学校规定的所有课程,2014.09-2015.01,2015.12,取得国家职业医师资格证书,7,课程学习,氧化应,8,氧化应,课题及综述,9,课题名称,CO2气腹压对大鼠重症急性胰腺炎胰腺病理、脑脊液S-100B蛋白、脑NF-B表达的影响,10,研究背景,重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis SAP）是常见的急腹症，其病情凶险，发展迅速，常因并发全身炎症反应综合征（SIRS）和多脏器功能障碍综合征(MODS)而病死率高。SAP免疫炎性细胞产生的众多炎性因子使远处器官损伤，出现循环、呼吸、泌尿和神经系统的严重损害。1923年Lowll最早报道了急性胰腺炎可并发精神异常，但直到1941年Rothermich和Haam才首次提出了“胰性脑病(pancreatic encephalopathy, PE)”这个概念。文献报道国内胰性脑病多见于SAP，约占90% 。,11,研究目的,,我们通过动物实验，建立大鼠重症急性胰腺炎模型，创建CO2气腹，动态观察脑组织损伤、脑NF-B的活性、脑脊液中S-100B蛋白的影响，为临床SAP患者的诊断及治疗提供参考。为腹腔镜在SAP治疗中的应用提供试验依据。,12,研究内容,S-100B蛋白：近来的研究发现，脑损伤早期脑脊液和血清中的S-100B蛋白的含量和脑损伤的程度呈正相关，同时由于S-100B半衰期短，如其持续升高则表明脑组织有持续性损伤(王成东,武丽丽,王玉亭,等.S-100蛋白与颅脑损伤预后的关系.中国临床神经外科杂志,2005.10:25-26.)。S-100B蛋白己成为目前对脑损伤程度、预后评估预测的一个灵敏可靠指标。NF-B:是炎症反应调节过程中一个至关重要的转录因子，NF-B的活化可通过激起肿瘤坏死因子-和白介素-1等促炎因子的表达，近而加重脑损伤。,13,实验方法,研究对象：健康雄性SPF级SD大鼠；选用健康雄性SPF级SD大鼠60只，周龄6-7周，体重 21020g,随机分为3组：假手术（F）组（20只），重症急性胰腺炎（SAP）组（20只），SAP+8mmHg（CO2气腹）组（20只）；,14,实验方法,大鼠术前禁食12h,禁水4小时。3%戊巴比妥钠注射液（2mg/100g体重）腹腔注射麻醉，F组：仅开腹轻柔翻动十二指肠及胰腺后关腹；SAP组：使用4.5号TB针头，5%牛黄胆酸钠（5mg/100g体重）胰腺被膜下均匀注射造模；SAP+8mmHg组：造模后，使用自动气腹机向腹腔内充气，压力维持在8mmHg。（大鼠气腹压力为5-8mmHg时相当于人体腹腔镜手术12-15mmHg参考文献：Avital S, Itah R, Szomstein S, Rosenthal R, mbar R, Sckornik Y, Weinbroum A.Correlation of C02 pneumoperitoneal pressures between rodents and humans. Surg Endosc. 2009； 23(1):50-54.）；,15,实验方法,所有大鼠均在3h后处死，采集标本(血液，胰腺组织、脑组织，脑脊液)；a.脑脊液：腹卧位固定消毒，铺无菌洞巾，俯于三角形棒上用胶带固定其头部，使其头下垂与体位形成45。角，以充分暴露枕颈部。从头至枕骨粗隆作中线切开2cm，再至肩部1cm，钝性分离，用虹膜剪剪去枕骨至寰椎肌肉，可见白色硬脑膜。用针在椎骨和寰椎2mm处刺入硬脑膜，抽取脑脊液约50l-100l，置于去酶处理冻存管中于-20冰箱中，待用ELISA测定S-1OOB蛋白含量。,16,实验方法,b.血液：将抽取脑脊液的后的大鼠仰卧位固定消毒，铺无菌巾原切口进腹。分离显露腹主动脉，用lOml无菌注射器抽取动脉血约5-7m1后低温离心取血清分为2份，取其中1份全自动生化分析仪检测血淀粉酶，一份置于-20冰箱中备用。c.胰腺组织：10%中性福尔马林溶液固定标本,以备镜下病理组织学检查；d.脑组织:将鼠头自枕骨和寰椎之间切下后剥离脑组织后将其分为4份，1份浸泡10%中型福尔马林溶液中，以备镜下病理组织学检查；1份免疫组化法检测NF-B；另2份置于去酶处理冻存管中于液氮罐中保存备用。,17,实验方法,统计学分析：数据以均数士标准差表示(x士S)，采用SPSS19.0统计软件对各组数据进行均数差别的检验和相关分析。检验水准取0.05，P表示差别无统计学意义，表示有统计学意义。,18,胰腺病理评分标准,胰腺炎病变程度病理评分（Grewal法）组织 评分标准病变 0 1 2 3 4水肿 无 轻度叶间隙 重度叶间隙 腺泡间隙 细胞间隙增宽 增宽 增宽 增宽坏死 无 坏死面积 坏死面积 坏死面积 坏死面积 10% 20% 30%炎症 每5个炎症细胞计0.5分，大于30个计4分 出血 无 有出血 - - - 水肿+坏死+炎症+出血=得分,技术路线,健康雄性SPF级SD大鼠60只,3h后处死大鼠，标本采集,统计学分析,假手术组（F组）,SAP组,SAP+8mmHg组,血液（全自动生化分析仪检测血淀粉酶）,胰腺组织（病理组织学检查HE染色）,脑组织（HE染色）、免疫组化法检测NF-B,脑脊液(ELISA测定S-1OOB蛋白含量),20,统计方法,采用SPSS 1.0软件进行统计分析数据以均数士标准差表示(x士S)，采用SPSS19.0统计软件对各组数据进行均数差别的检验和相关分析。检验水准取0.05，P表示差别无统计学意义，表示有统计学意义。,21,实验图片,大鼠 被膜下注射 钙化 钙化、出 钙化、出血、坏死 胰腺HE染色 胰腺HE染色,22,综述发表情况,题目：重症胰腺炎死亡相关因素的临床分析已发表于现代养生,23,氧化应,课题计划表,完成实验,2015年11月-2016年12月完成重症急性胰腺炎（SAP）造模，气腹干预，采集标本，完成胰腺、脑组织病理切片等,数据统计,撰写论文,2016年12月-2017年2月数据整理与分析,2017年2月-2017年5月撰写论文,24,临床工作小结,25,转科时间安排,2015.03-2016.03 腔镜外科2016.03-2016.05 肝胆外科2016.05-2016.07 胃肠外科2016.07-2016.09 CT室,在普外科手术方面，