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文档简介

克隆载体表达载体 定义 可携带插入的外源DNA片段并可转入受体细胞中大量扩增的DNA分子 该分子中含有能够在受体细胞中自主复制的序列和筛选标记 常用于外源基因的克隆 如噬菌体或质粒 通常采用从病毒 质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体 在载体上插入合适大小的外源DNA片段 并注意不能破坏载体的自我复制性质 将重组后的载体引入到宿主细胞中 并在宿主细胞中大量繁殖 克隆载体 克隆载体必须具备什么条件 具有使外源DNA片段插入的限制性酶识别位点 外源性DNA能组入 能将外源DNA导入到受体细胞并进行自我复制 能繁殖 必须具有选择标记 能筛选出来 A C B 常用的克隆载体 质粒载体 病毒载体 噬菌体载体 混合载体 由以上三类中的两种以上相互组合或与其他基因组DNA组合而成 高质量的克隆载体所必须具备的一些特征 拷贝数不能太低 以保证转化效率 应该有两个以上用来克隆外源DNA的单一的限制性内切酶识别位点 应该有一个或多个易于检出的选择标记基因 1 2 3 专用载体 染色体定位整合载体 启动子探针载体 诱导型表达载体 组织特异性表达载体 反义表达载体 2020 3 18 7 可编辑 定义 在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件 如启动子 RBS 终止子等 使目的基因能够表达的载体 包括原核表达载体和真核表达载体 可以是质粒 噬菌体或病毒等 典型的表达载体带有能使基因表达的调控序列 并在适当位置有可插入外源基因的限制性内切酶位点 表达载体 常用细菌质粒进行构建 构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端 多为黏性末端 也有平末端 采用DNA连接酶连接 导入生物体实现表达 标记基因可帮助识别质粒并检测是否成功整合到染色体DNA中 表达载体四部分 目的基因 启动子 终止子 标记基因 表达载体必须具备的条件 1 载体能够独立的复制 2 应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记 以利于外源基因的克隆 鉴定和筛选 3 应具有很强的启动子 能被RNA聚合酶所识别 4 应具有阻遏子 使启动子受到控制 只有当诱导时才能进行转录 5 应具有很强的终止子 以使RNA聚合酶集中力量转录克隆的外源基因 同时使很强的终止子所产生的mRNA较为稳定 6 所产生的mRN
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