第九章 生物制品.ppt

第九章生物制品 目的要求 掌握生物制品概念和分类 疫苗定义和制造方法 研制策略 熟悉生物制品的一般制造方法 质量要求与检定 了解重要生物制品的制备方法 核酸疫苗的制备方法 教学重点 疫苗定义和制造方法 重要生物制品的制备方法 教学难点 核酸疫苗的制备方法 一 生物制品概述二 疫苗研究及其研制策略三 生物制品的一般制造方法 质量要求与检定四 重要生物制品的制备五 核酸疫苗 第一节 生物制品概述 1概念及发展沿革2生物制品的分类3制造生物制品的生物学及免疫学基础 1概念及发展沿革 1 1概念凡是从微生物及其代谢产物 原虫 动物毒素 人或动物的血液或组织直接加工制成 或用现代生物技术 化学方法制成 作为预防 治疗 诊断特定传染病或其他有关疾病的免疫制剂 包括各种疫苗 抗血清 抗毒素 类毒素 免疫调节剂 诊断试剂等 1 2从疫苗生产看生物制品的发展 12世纪 中国开始用人痘接种预防天花 从症状轻微的天花病人身上人工接染到健康儿童 使其通过产生轻微症状的感染获得免疫力 避免天花引起的严重疾病甚至死亡 1721年 人痘接种法传入英国 英国医生琴纳注意到感染过牛痘的人不会再感染天花 经过多次实验 琴纳于1796年从一挤奶女工感染的痘疱中 取出疱浆 接种于8岁男孩的手臂上 然后让其接种天花脓疱液 结果该男孩并未染上天花 证明其对天花确实具有了免疫力 最早的弱毒活病毒疫苗 1 2从疫苗生产看生物制品的发展 1798年 医学界正式承认 疫苗接种确实是一种行之有效的免疫方法 经过一百多年的努力 1980年世界卫生组织宣布全球消灭了天花 1870年 法国科学家巴斯德发明了第一个细菌减毒活疫苗 鸡霍乱疫苗 巴斯德将此归纳为对动物接种什么细菌就可以使其不受该病菌感染的免疫接种原理 从而奠定了疫苗的理论基础 因此人们把巴斯德称为疫苗之父 1 2从疫苗生产看生物制品的发展 第二代疫苗 亚基疫苗的出现 克服了第一代疫苗潜在致病性的问题 天然或重组成分为主 第三代疫苗 核酸疫苗 调动细胞免疫和体液免疫两个系统 追求最佳效果 持久 广谱 廉价 返回目录 2生物制品的分类 1 疫苗等预防类生物制品 细菌类疫苗 病毒类疫苗 类毒素和联合疫苗 2 抗毒素及免疫血清 由特定抗原免疫动物所得血浆制成的抗毒素或免疫血清 如破伤风抗毒素 抗狂犬病血清等 用于治疗或被动免疫预防 3 血液制品 如人血白蛋白 人免疫球蛋白 人凝血因子 天然或重组的 红细胞浓缩物等 4 诊断制品 包括体内诊断制品和体外诊断制品 返回目录 3制造生物制品的生物学及免疫学基础 3 1生物学基础A 细菌的代谢产物 1 热原质主要是革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖 注入体内能引起发热反应 2 毒素有内毒素和外毒素两种 均有强烈毒性 3 色素许多细菌能产生色素 对其鉴别有用 B 外界环境因素对微生物的影响一方面可创造有利条件 促进它们的生长繁殖 以制备生物制品 另一方面也可利用对微生物不利的因素使其发生变异或杀灭之 以更好地为制造生物制品服务 常用的几个概念 消毒 灭菌 无菌 防腐 3 2免疫学基础 3 2 1机体的抗感染免疫1 先天性免疫 非特异性免疫 包括 体表屏障 如皮肤粘膜屏障 血脑屏障 防御病原微生物及其毒性产物从血流侵入脑组织 细胞吞噬作用 正常体液和组织中的抗菌物质 2 特异性免疫 个体在生命过程中接受抗原刺激后主动产生或被动获得的 又称获得性免疫 包括自动免疫和被动免疫 人工免疫人为的给机体输入抗原以调动机体的免疫系统 或直接输入免疫血清 使获得某种特殊抵抗力 用以预防或治疗某些疾病者 称人工免疫 人工主动免疫 artificialactiveimmunization 是指给机体接种抗原性物质如疫苗 类毒素等 刺激机体免疫系统产生特异性免疫力的方法 3 2 2人工免疫 人工被动免疫 artificialpassiveimmunization 是给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂 使受者迅速获得特异性免疫力的方法 主动免疫和被动免疫互补性免疫方法 主动免疫 抗原接种人体产生主动免疫 一般一个月内产生 持续数年 主动免疫包括体液免疫 抗体 细胞免疫 如麻疹疫苗 脊髓灰质炎疫苗 百白破疫苗等 被动免疫 抗体IgG接种人体后 抗体停留体内 当日有效 但只可维持 个月 如抗狂犬血清 免疫蛋白 破伤风抗毒素 TAT 丙种球蛋白 乙肝高效价丙球 3 3人工自动免疫类生物制品 疫苗 Vaccine 细菌 病毒 螺旋体 立克次体和类毒素等抗原性生物制品统称为疫苗 安全有效实用分类1 死疫苗 deathvaccine 选用免疫原性强的微生物标准株经大量培养后 用物理或化学方法将其杀死或灭活而制成的预防制剂 如霍乱 百日咳 伤寒 钩端螺旋体疫苗 优点 主要诱导特异性抗体产生 安全缺点 不能繁殖 需多次刺激 注射局部和全身反应严重 2 减毒活疫苗 live attenuatedVaccine 用人工定向变异或从自然界筛选得到的毒力高度减弱或基本无毒的病原微生物制成的预防制剂 优点 一次免疫即可获得长久免疫力 类似自然状态下的轻型或隐性感染 诱导体液免疫和细胞免疫 缺点 不易保存 存在回复突变的危险如卡介苗牛痘麻疹等 3 类毒素 Toxid 细菌外毒素经0 3 0 4 甲醛处理 使其毒性减弱而保留其免疫原性 白百破 白喉类毒素 百日咳杆菌死疫苗 破伤风类毒素4 新型疫苗 1 亚单位疫苗 SubunitVaccine 是去除病原体中与激发保护性免疫无关的甚至有害的成分 保留有效免疫原成分制作的疫苗 优点 免疫效果高 不良反应少 2 合成肽疫苗 syntheticpeptidevaccine 将具有保护性免疫力的人工合成肽与适当载体结合后 再加入佐剂制成的疫苗 乙肝病毒多肽疫苗 3 基因工程疫苗DNA疫苗 DNAVaccine 是用编码病原体有效免疫原的基因与细菌质粒构建的重组体直接免疫机体 转染宿主细胞 使其表达保护性抗原 从而诱导机体产生特异性免疫的疫苗 优点 体内可持续表达 免疫效果好 维持时间长 缺点 其机制和安全性尚不完全清楚 一些问题有待解决 重组抗原疫苗 recombinantantigenvaccine 是利用DNA重组技术制备的只含保护性抗原的纯化疫苗 优点 不含活的病原体和病毒核酸 安全有效 成本低廉 目前获准使用的有乙型肝炎疫苗 重组载体疫苗 recombinantvectorvaccine 是将编码病原体有效免疫原的基因插入载体 减毒的病毒或细菌疫苗株 基因组中 接种后 随疫苗株在体内的增殖 大量所需的抗原得以表达 如果将多种病原体的有关基因插入载体 则成为可表达多种保护性抗原的多价疫苗 载体 痘苗病毒转基因植物疫苗用转基因方法 将编码有效免疫原的基因导入可食用植物细胞的基因组中 免疫原即可在植物的可食用部分稳定的表达和积累 人类和动物通过摄食达到免疫接种的目的 常用的植物有蕃茄 马铃薯 香蕉等 疫苗和其它药物的不同点 疫苗是药物 有特殊性 1用于预防 2用于健康人群 尤其是儿童 3用途不是减轻症状而是产生免疫 4使用后人群中发病死亡减少 消灭疾病 减毒活疫苗 减毒活疫苗是模拟自然感染后免疫过程 通过不同方法使病原体的毒力 致病性减弱或丧失后获得一完整的微生物组成的疫苗制品 它引起机体感染但不发生临床症状 其免疫原性能刺激机体免疫系统产生免疫反应 如牛痘 麻疹苗等 灭活疫苗 优点 安全 有效 灭活疫苗是将病原体培养繁殖后杀死病原体 再进行纯化处理使之完全失去感染性 保留病原体的免疫原性 如甲肝灭活疫苗 乙脑灭活疫苗 脊髓灰质炎灭活疫苗等 脊髓灰质炎灭活疫苗 1953年由美国Salk制成并在美国欧洲国家应用 能产生高的血清中和抗体 但防止野毒株病人发生的效果不如活疫苗 20世纪80年代后制成增效脊髓灰质炎灭活疫苗 接种3个剂量后中和抗体达99 100 现在美国已由使用脊灰活疫苗改为脊髓灰质炎灭活疫苗 常规免疫3针间隔6 8周 最后1针间隔6 12个月 可加强1 2次 甲肝灭活疫苗 甲肝病毒分离后用细胞株增殖 再用甲醛灭活 纯化 现有三个外国公司生产 而国内柯兴公司也生产了抗体阳转率100 的甲肝灭活疫苗 病毒的变异 由于流感病毒野毒株变异最多 分为甲乙丙三大型 其中甲 和甲 型曾造成流感大流行 WHO世界流感监测中心不断分离流感病毒的毒株 每年两次向疫苗的生产单位提供新的流感病毒株 因此疫苗生产单位已经适应这种情况 麻疹病毒的变异 至 年代一些国家分离的麻疹野毒株与 至 年代 用疫苗前 的野毒株相比抗原性和生物特性上有差异 年代病毒野毒株无血凝和吸附特性 年代病毒野毒株不能在VeroBsc 1细胞中培养 年代病毒野毒株HN蛋白基因有漂移 其中H蛋白和疫苗株相比有 个核苷酸变异 N蛋白和疫苗株相比有 个核苷酸变异 4我国流行的H及A基因组病毒 H1H2为大多数 现行麻疹疫苗免疫血清能中和所有已知的病毒基因型 说明现有麻疹疫苗株仍对所有麻疹病毒基因型具有保护作用 一 特异性免疫治疗剂 1 抗毒素利用类病毒注射动物 产生特异性抗体 经采血 分离 纯化后制成的产品 2 抗病毒血清用病毒作抗原免疫动物制备的含有抗体的血清生物制品 3 4人工被动免疫类生物制品 还有 抗菌血清 免疫球蛋白 免疫核糖核酸等 二 非特异性免疫治疗剂 免疫调节剂 1 转移因子 2 白细胞介素 6 小棒杆菌 3 胸腺素 4 细胞毒T细胞 5 卡介苗 7 干扰素 返回目录 第二节 疫苗研究及其研制策略 疫苗的现代定义为 一切通过注射或黏膜途径接种 可以诱导机体产生针对特定致病原的特异性抗体或细胞免疫 从而使机体获得保护或消灭该致病原能力的生物制品统称为疫苗 包括蛋白质 多糖 核酸 活载体或感染因子 预防用生物制品按所用材料一般分细菌性疫苗 病毒性疫苗及类毒素三大类 1接种目的及作用 接种目的防止病原体进入机体建立抗感染免疫口服或注射疫苗激发宿主产生抗病原体的抗体暴露于病原体也不会生病进入机体的病原体被抗体失活 2疫苗的种类 返回目录 从疫苗研制技术又可将疫苗分为传统疫苗和新型疫苗两大类 2 1常规疫苗1 疫苗 1 活疫苗 减毒活疫苗 卡介苗 2 死疫苗 百日咳 霍乱等 2 类毒素破伤风类毒素 白喉类毒素3 自身疫苗由病人自身病灶中分离出的病原体制成的死疫苗 2 2新型疫苗 1 亚单位疫苗一类保留病原体中有效免疫原成分 而除去无效成分和有毒成分的化学纯疫苗 乙肝亚单位疫苗2 化学疫苗用化学方法提取病原体中有效免疫原成分体制成的化学纯疫苗 比亚单位疫苗更为简单 肺炎链球菌荚膜多糖3 多肽疫苗人工合成的高免疫原性多肽片段制成的疫苗 乙型肝炎表面抗原的各种合成肽段 4 基因工程疫苗利用基因工程构建重组基因序列 表达免疫原性强 无毒性的多肽制成的疫苗 乙型肝炎基因工程疫苗5 DNA疫苗用编码抗原基因制成的疫苗 流感病毒核蛋白DNA疫苗通常也习惯地将遗传重组疫苗 合成肽疫苗和抗独特型抗体疫苗包括在新型疫苗范畴 抗病血清 抗病血清是抗菌 抗病毒 抗毒血清的总称 凡是用细菌免疫马或其他大动物所取得的免疫血清 称为抗菌血清 凡是用病毒免疫马或其他大动物 所取得的免疫血清 称为抗病毒血清 凡是用细菌类毒素或毒素免疫马或其他大动物 所取得的免疫血清 称为抗毒素 或抗毒血清 3疫苗的基本成分 性质和特征 3 1疫苗的基本成分疫苗的基本成分包括抗原 佐剂 防腐剂 稳定剂 灭活剂及其他活性成分 抗原 是疫苗最主要的有效活性成分 它决定了疫苗的特异免疫原性 构成抗原的三个基本条件 异物性 特异性和一定的理化特性 可用作抗原的生物活性物质有 灭活病毒或细菌 活病毒或细菌通过实验室多次传代得到的减毒株 病毒或菌体提纯物 有效蛋白成分 类毒素 细菌多糖 合成多肽以及近年来发展DNA疫苗所用的核酸等 佐剂 能增强抗原的特异性免疫应答 目前常用的有铝佐剂和油制佐剂 3 2疫苗的基本性质包括免疫原性 安全性 稳定性 免疫原性 指疫苗接种进入机体后引起机体产生免疫应答的强度和持续时间 影响的因素包括机体的因素和疫苗的因素 从疫苗的角度看是由疫苗的抗原决定的 包括抗原的强弱 大小和稳定性以及抗原的理化性质 4疫苗制备的基本过程 疫苗因种类不同 其制备方法也不相同 但总的来说 经典疫苗制备的基本过程包括 选择适宜的培养基或细胞 进行菌 毒株大量繁殖 收集培养物 提纯 半成品检定 稀释 分装 成品检定 基因工程技术使疫苗研制方法发生了革命性的变化 5疫苗的研制策略 当代疫苗灭活疫苗杀死的病原体减活疫苗活的 无毒力的病原体 生产过程 组织培养病原体纯化病原体失活或减活并没失去激发免疫的能力 局限性 不是所有的病原体都能用组织培养细胞培养价格昂贵产量 生产率低需要特殊的安全预防措施失活或减活都必须100 保存期限短 需低温保藏不能预防所有的疾病 rDNA技术对疫苗研究的促进 减活疫苗通过清除致病基因实现基因工程疫苗 无致病性载体携带致病病原体的抗原性决定簇非组织培养 克隆基因和过量表达蛋白作为疫苗 亚单位疫苗 多种基因工程疫苗研制策略 亚单位疫苗肽疫苗减活疫苗DNA疫苗 5 1亚单位疫苗 通常是整个病原体制备减活或灭活疫苗免疫反应的激发通常是通过病原体的外壳蛋白起作用 动物病毒 是不是需要完整的病原体 亚单位疫苗 激发免疫反应仅仅需要病原体外壳蛋白利用病原体的某些成分而不是整个病原体是 亚基 疫苗 亚单位疫苗 优点采用纯化蛋白保证疫苗安全性和稳定性缺点纯化成本高分离的蛋白不具有与病原体相同的构象 因此可能没有相应的抗原性 单纯疱疹病毒 HSV 性传播疾病潜在致癌性脑炎和严重的眼部感染亚单位疫苗可能是最有效的减活或失活率必须是100 否则 人群有感染危险 亚单位疫苗 example 5 2减活疫苗 Attenuated 减活疫苗通常更有效 较前两种疫苗 但不能含有任何毒力 我国乙肝疫苗现状及存在的问题 乙肝疫苗第一代乙肝疫苗 属血源疫苗 由无症状乙型肝炎表面抗原阳性者的血浆制备而得 因提取工艺不同 疫苗所含成分也有一定的差别 但均含有22nm小颗粒乙型肝炎表面抗原 血源疫苗曾对防止乙肝流行发挥了重要作用 但是 疫苗的成本高 生产周期长 65周 还存在传播艾滋病和肝炎的潜在危险 第二代乙肝疫苗 将编码乙型肝炎表面抗原的基因在哺乳动物细胞或酵母菌中高效表达 得到乙肝基因工程疫苗 接种者中约有10 不产生应答反应 另有5 15 接种者属低应答者 低应答者不能获得完全保护作用 第三代乙肝疫苗 乙肝病毒包膜的抗原性主要由S抗原和前S1 前S2抗原组成组成 美国Medeva制药公司利用基因重组技术 在哺乳动物细胞成功地表达了包含S抗原和前S1 前S2抗原的第三代重组疫苗 1998年用于临床 能诱导更高的血清阳转率和抗体应答反应 新生婴儿 特别是母亲为乙型肝炎表面抗原阳性的新生婴儿 产后应立即给婴儿接种乙肝疫苗 学龄前和学龄儿童亦应接种 一般人群 包括新生婴儿 正常接种 上臂三角肌肌肉注射 全程注射三次 每次注射10 g 第一次注射后隔三个月和六个月注射第二次和第三次 一 国内乙肝疫苗生产和质量管理概况 1预防性疫苗种类和剂量酿酒酵母5 g 剂 0 5ml 10 g 剂 1 0ml汉逊酵母10 g 剂 1 0ml CHO疫苗10 g 剂 1 0ml 20 g 剂 1 0ml进口疫苗 GSK10 g 剂 0 5ml 20 g 剂 1 0ml联合疫苗 GSK 北京科兴 问题 种类多 但缺乏应用于特殊人群的剂型和加免程序 如肾透析病人的剂量等 2 国内上市前疫苗 预防性疫苗 1 含前 S1CHO乙肝疫苗临床前2 汉逊酵母改变工艺疫苗完成临床3 进口注册疫苗 韩国绿十字公司汉逊酵母疫苗临床前治疗性疫苗 免疫复合物疫苗60 g 剂 1 0mlII期多肽疫苗II期高剂量疫苗60 g 剂 1 0mlII期 表我国乙肝疫苗生产厂家一览表 问题 厂家多 规模小 竞争降价 不利于质量保证 3 生产厂家和品种 4 乙肝疫苗生产和质量管理 生产 2004年度共生产乙肝疫苗186批 其中酵母疫苗147批 1亿568万支 CHO疫苗39批1344万支 该年度我国生产的疫苗88 72 为酵母乙肝疫苗 质量管理 国家一级管理疫苗批签发 起始时间 2002年1月范围 国内及进口注册的每一批乙肝疫苗 用于上市销售 内容 资料审核 部分检验监督检验 成品全检 二 现有乙肝疫苗存在的问题 一 现有疫苗剂量和免疫策略函待改进 二 临床试验不规范 三 首针及时率和全程覆盖率急待提高 四 疫苗企业注册标准和说明书存在的问题 五 不良反应 SAE 无有效的报告 鉴别 处理以及反馈制度 网络 六 加强科研 成人与儿童乙肝疫苗免疫持久性比较 乙肝疫苗免疫后抗HBs阳转率与年龄的关系免后儿童成人时间阳转率 阳转率 797 3483 31290 0069 62477 9932 73671 4420 84865 696064 54 中华计划免疫杂志 2003 9 6 中国公共卫生杂志 2003 19 12 成人乙肝疫苗免疫效果 乙肝疫苗免疫后抗HBs阳转率与年龄的关系免疫后 35岁 35岁时间 月 人数阳转数 人数阳转数 3632336 5571933 37615488 5534177 412625283 9542851 9 24542138 9531426 436501428 046613 0 中华预防医学杂志 2002 36 6 常用疫苗介绍 一 冻干卡介苗疫苗性质 减毒活疫苗 冻干卡介苗外观为白色疏松体或粉末 按规定量加入稀释液后 应于3分钟内完全溶解成均匀悬液 规格 5人份 安瓿 接种对象 出生3个月以内的婴儿或用 PPD试验阴性的儿童 PPD试验后72小时局部硬结直径在5mm以下者为阴性 二 脊髓灰质炎疫苗 疫苗性质 减毒活疫苗 为三价糖丸 用法和剂量 口服 每次一粒 1 用消毒的药匙将脊髓灰质炎疫苗送入儿童口中 用凉开水送服咽下 2 月龄小的儿童 喂服糖丸疫苗时可将糖丸碾碎 放入药匙内 加少许凉开水溶解成糊状服用 3 口服疫苗时要看服下肚 如儿童服苗后吐出 应先饮少量凉开水 休息片刻后再服 三 麻疹疫苗 疫苗性质 减毒活疫苗 冻干疫苗为乳酪色疏松体 溶解后为橘红色澄明液体 规格 每安瓿为0 6ml 接种对象 8月龄初免一针 18 24月龄加强 可以用麻腮风疫苗 用法与剂量 按瓶签示量加灭菌注射用水 待完全溶解摇匀后使用 上臂外侧三角肌附着处皮肤用 酒精消毒 待干后皮下注射0 5ml 四 吸附百日咳 白喉 破伤风联合疫苗 疫苗性质 类毒素 吸附制剂为乳白色悬液 含防腐剂 放置后佐剂下沉 摇动后即成均匀悬液 规格 每安瓿2ml 接种对象 初免起始月龄3足月 周岁内完成三针 每针间隔不少于28天 18 24月龄加强一针 用法与剂量上臂外侧三角肌附着处皮肤经消毒后肌内注射 每次注射剂量为0 5ml 五 甲肝疫苗疫苗性质 冻干甲肝为减毒活疫苗 外观为乳酪色疏松体 溶解后为澄清无异物的浅红色流体 规格 重溶后每西林瓶1 0ml 接种对象 1周岁以上的甲肝易感者 我省免疫程序规定为2 3周岁接种 用法与剂量 加1 0ml灭菌注射水 等完全溶解摇匀后使用 上臂外侧三角肌附着处 用75 酒精皮肤消毒后 皮下一次注射 六 麻疹 腮腺炎 风疹减毒活疫苗 普祥立适 疫苗性质 冻干减毒活疫苗 小瓶装的疫苗为白色至淡粉色小丸 复溶后的疫苗会随PH值的微小变化 由浅橙色到浅红色 规格 0 5ml接种对象 适用于12月龄及以上儿童和成人 我省免疫程序规定18 24月龄接种一针 用法与剂量 0 5ml 皮下注射 七 冻干水痘减毒活疫苗 疫苗性质 减毒活疫苗 冻干疫苗为乳白色疏松体 溶解后应为乳白色澄明液体 无异物 规格 0 5ml 人份 接种对象 年龄为12月龄以上的水痘易感者 用法与剂量 加入疫苗附带的灭菌注射用水 重溶后0 5ml 待完全溶解摇匀后使用 上臂外侧三角肌附着处皮肤用酒精消毒 待干后皮下注射0 5ml 九 A群脑膜炎球菌多糖疫苗 组成与性状本品系用A群脑膜炎奈瑟氏菌培养液 经提纯获得多糖抗原并加入适宜稳定剂后冻干制成的多糖疫苗 成品外观为白色疏松体 加入所附PBS后可迅速溶解 溶液澄明无异物 规格本品规格为每安瓿300 g多糖 每人用剂量含30 g 十 乙型脑炎减毒活疫苗 组成和性状本品系用流行性乙型脑炎减毒株接种原代地鼠肾单层细胞 经培养后收获病毒液 加保护剂冻干制成 为淡黄色疏松体 溶解后为澄明橘红色液体 疫苗的发展前景 治疗性疫苗大剂量高度纯化的微生物抗原和能提高免疫功能的其他组分组合而成的治疗性疫苗 抗原量大 免疫原性强 对免疫系统有较强的刺激作用 而且疫苗通过不同的途径把微生物抗原递呈给免疫系统 能更有效地诱导免疫应答 且可消除免疫耐受 疫苗的发展前景 目前 已有治疗性疫苗治疗麻风 慢支 疱疹病毒感染 爱滋病和乙肝等疾病的临床试验报告 肿瘤疫苗也是研究的热点之一 通过食物摄取的疫苗和个性化疫苗 多价联合疫苗 疑问1 为什么疫苗有较低的毒性 却能增强抵抗能力 疑问2 为什么 第三节生物制品质量要求与检定 生物制品质量的特殊重要性所有预防制品都是直接用于大量健康人群 儿童 所用治疗制品都是通过非胃肠途径直接用于患者诊断试剂 其质量则关系到能否对患者或试样做出特异 敏感的正确诊断和分析生物制品的质量安全性有效性可接受性 生物制品的GMP管理 药品生产质量管理规范 GMP GoodManufacturingPracticesforDrugs 是对生物制品生产全过程的质量管理 涉及人员 厂房和设备 原料采购入库 检验 发料 加工 在制品及半成品检验 分包装 成品检定 出品销售 运输 用户意见及使用反应处理等在内的全过程的质量管理 主要包括以下三个方面 人员 厂房和设备和原材料 硬件 管理制度和要求 软件 3 1 1生物制品规程 中国生物制品规程 是我国生物制品生产 检定 经营和使用的技术法规 是监督检验生物制品质量的法定标准 3 1生物制品的标准化 3 1生物制品的标准化 3 1 2生物制品标准物质定义 系指用于生物制品效价 活性或含量测定的或其特性鉴别 检查的生物标准品或生物参考物质 国际标准品 由WHO制备 审定和分发国家生物标准品 由国家鉴定机构制备 审定和分发 种类 国际标准品国际参考品国际生物参考试剂 种类 国家生物标准品国家生物参考品国家生物参考试剂 3 1 3实验动物实验动物是指来源清楚或遗传背景明确 符合微生物控制指标要求 用于生物制品生产 检定及科研的动物 实验动物设施 选址 建筑要求 区域划分 环境条件实验动物的饲养管理实验动物的供应和使用实验动物的检疫和传染病的控制实验动物工作人员 3 1生物制品的标准化 3 1 3实验动物常用的几种实验动物小鼠金黄地鼠豚鼠家兔猕猴 3 1生物制品的标准化 3 2生物制品的质量检定 3 2 1生物制品的理化检定3 2 2生物制品的安全检定3 2 3生物制品的效力检定 3 2生物制品的质量检定 3 2 1生物制品的理化检定参照 生物制品化学检定规程 物理性状检查蛋白质含量测定防腐剂含量测定纯度检查其它 外观真空度及溶解时间 半微量定氮法酚试剂法紫外吸收法 苯酚含量测定汞类防腐剂含量测定氯仿含量测定游离甲醛含量测定 区带电泳免疫电泳凝胶层析 水份含量测定氢氧化铝与磷酸铝含量测定磷含量测定O 乙酰基含量测定 3 2 2生物制品的安全检定一般安全性检查杀菌 灭活和脱毒情况的检查外源性污染检查过敏性物质检查 3 2生物制品的质量检定 第四节 生物制品的一般制造方法 4 1病毒类疫苗制造方法疫苗制备工艺各异 但主要程序一致 疫苗制备工艺流程 4 1 1毒种的选择和减毒 毒株必须满足的条件抗原性典型形态 感染特定组织人工繁殖 不产生毒素无毒力回复不被病毒感染 4 1 2病毒繁殖 1 活体动物培养 牛痘牛皮下 乙脑鼠脑等 生产中已淘汰 2 鸡胚培养 较动物管理方便 易受支原体 沙门菌污染 3 组织培养 广泛用于病毒培养 4 细胞培养 4 1 3疫苗的灭活原则 充分破坏疫苗的毒力 尽量减少疫苗免疫力损失 0 2 0 4 的甲醛或酚溶液 4 1 4疫苗的纯化去除存在的动物组织 降低接种不良反应 4 1 5冻干升华 不使疫苗融解 疫苗稳定性提高1倍以上 4 2细菌类疫苗和类毒素的一般制造方法 细菌类疫苗和类毒素均由细菌培养开始 制备的主要程序相似 细菌类疫苗对菌体进一步加工类毒素对细菌分泌的外毒素加工 疫苗和类毒素制备工艺流程 4 2 1菌种的选择 抗原性典型形态 培养特性和理化特性易于在人工培养基上培养 不产生毒素培养过程中毒性小或无毒力回复制备毒素时泽培养过程中产生大量的典型毒素 4 2 2培养基的营养要求碳 氮源和无机盐等必需外 有时需添加生长因子 结核杆菌以甘油为碳源 百日咳杆菌需要谷氨酸 胱氨酸为氮源 4 2 3培养条件控制氧分压 温度 pH 避光4 2 4杀菌彻底杀死细菌不影响防病效力4 2 5稀释 分装和冻干含防腐剂的NS稀释 无菌分装 4 3生物制品的分包装 4 3 1分装分装前 检定合格 标签完整 明确 防止错批 混批 无菌操作 实际装量多于标签示量 4 3 2包装破漏检查 载名名称 批号 亚批号 有效期等 第五节重要生物制品的制备 乙型肝炎疫苗的制备乙型肝炎病毒 hepatitisBvirus HBV 属嗜肝DNA病毒科 hepadnaviridae HBV的发现源于表面抗原的研究 1963年Blumberg首先在澳大利亚土著人血清中发现一种新抗原 称为澳大利亚抗原 Australiaantigen 直至1968年确定这种抗原与血清型肝炎密切相关 称为肝炎相关抗原 hepatitisassociatedantigen HAA 1970年D S Dane在肝炎患者血清中发现具有传染性的颗粒 即Dane颗粒 Dane sparticle 从而HBV被确认 HBV是乙型肝炎病原体 主要经输血 注射 性行为和母婴传播 起病徐缓 部分患者可转为慢性 少数还可导致肝硬化和肝癌 乙肝病