安捷伦液相基本操作.ppt

安捷伦液相的基本操作 目录一 色谱基础知识二 Agilent液相色谱仪基本操作三 常见色谱故障 一 色谱基础知识 1 色谱法的分离原理溶于流动相 mobilephase 中的各组分经过固定相时 由于与固定相 stationaryphase 发生作用 吸附 分配 离子吸引 排阻 亲和 的大小 强弱不同 在固定相中滞留时间不同 从而先后从固定相中流出 2 HPLC的特点和优点 高压 流动相为液体 流经色谱柱时 受到的阻力较大 为了能迅速通过色谱柱 必须对载液加高压 高速 分析速度快 载液流速快 较经典液体色谱法速度快得多 通常分析一个样品在15 30分钟 有些样品甚至在5分钟内即可完成 一般小于1小时 高效 分离效能高 可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果 比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍 高灵敏度 紫外检测器可达0 01ng 进样量在 L数量级 应用范围广 百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析 特别是高沸点 大分子 强极性 热稳定性差化合物的分离分析 显示出优势 二 Agilent液相色谱仪基本操作 流动相瓶 排气阀 电源开关 二元泵 自动进样器 柱温箱 检测器 进入工作站 主界面 编辑完整方法 仪器方法设置 方法信息仪器 采集数据分析运行时选项表 仪器方法设置 仪器方法设置 仪器方法设置 仪器方法设置 单次样品 样品命名 工作站使用 序列样品 命名与序列表设置 工作站使用 打开仪器1脱机 数据文件夹 序列样品数据 单次样品数据 色谱图 样品数据 色谱图编辑 色谱峰数据 数据分析 数据分析 数据分析 调节积分参数 数据分析 报告 打印报告 三 常见色谱故障 常见色谱故障 基线噪音可能原因 a 检测池脏b 检测池灯能量下降c 由泵引起的脉冲d 检测器上的温度效应e 检测其中有气泡通过 常见色谱故障 基线漂移可能原因 a 梯度洗脱所用溶剂有吸收b 流动相脏c 色谱柱没有用流动相平衡d 系统中污染物溢出e 实验温度不稳定 常见色谱故障 拖尾峰可能原因 a 柱效降低或有柱塌陷b 进样体积过大c 柱外扩散效应d 碱性基质与硅羟基作用e 重金属反应常见色谱故障 前伸峰可能原因 a 色谱柱过载b 进样体积过大c 大峰之前有未彻底分离的小峰 常见色谱故障 负峰可能原因 a 样品吸收比流动相吸收小b 溶解样品的溶剂通过色谱柱平衡被破坏c 示差检测器中最常见 溶质的折光指数小于溶剂的折光指数 常见色谱故障 鬼峰常见原因是流动相脏 尤其是水相 要求使用超纯水 最多两天就换常见色谱故障 双峰可能原因 a 柱头塌陷或柱床运动b 柱前滤芯堵塞c 组分共流出d 样品量过大f 进样器的进样流路存在分叉流路 常见色谱故障 峰扩展可能原因 a 柱效降低或有柱塌陷b 进样体积过大c 流动相粘度大 常见色谱故障 压力过高可能原因 a 色谱柱进样口过滤芯被污染b 冲洗阀过滤芯被污染c 色谱柱被污染d 连接管路的毛细管堵塞e 进样器转子上凹槽被堵塞f 进样针或针座被阻塞常见色谱故障 压力过低可能原因 a