冻干粉针剂轧盖密封完好性验证方案.doc

冻干粉针剂轧盖密封完好性验证方案 制定人审核人批准人日 期日 期日 期生效日期修订日期1.目的：用微生物侵入试验对冻干粉针剂车间轧盖密封系统进行挑战性试验，以确认轧盖后容器密封系统的完好性。2.方法：取已经按相应清洗灭菌操作规程制备好的西林瓶、胶塞及铝塑组合盖进行如下试验，西林瓶内灌装入已灭菌的胆盐乳糖培养基，在正常生产线上抽真空、压塞、轧盖后，将容器密封面浸入高浓度运动性菌液中，取出并检查是否有微生物侵入，以确认容器密封系统的完好性；同时需做阳性对照试验，确认培养基的促菌生长能力。3.验证试验准备 3.1制备微生物菌悬液：从铜绿假单胞菌（ATCC 9027）的新鲜斜面上取一整环培养物，分别接入含6ml无菌培养基的试管中，在3035下培养1824h。3.2将每管的培养物分别转入含600ml相同培养基的容器内，于3035下培养1824h。在培养结束时，能明显见容器内培养基出现浑浊。3.3在微生物侵入试验开始时，所用菌悬液浓度（活菌数）必须达到1106CFU/ml。4验证试验步骤4.1试验样品的制备:取100瓶带盖试样品，将每一试样品倒转，使培养基与西林瓶内表面及胶塞充分接触，在3035竖立倒置培养14天。4.2微生物侵入试验 4.2.1将铜绿假单胞菌（ATCC 9027）的菌悬液倒入适当的容器内，从上述4.1 样品中取50只试验样品倒置于菌悬液中,使试样容器内的培养基充分接触封口内表面，样品的颈部及封口的外表面应完全浸泡在菌悬液中（如图1所示）。图1微生物挑战试验示意图4.2.2将试验样品在菌悬液中持续浸泡约4h后，取出试验样品，擦干容器外残余的菌悬液，其外表用含0.5%过乙酸的70%异丙醇消毒五分钟（注意不要破坏其密封口），放入塑料袋中，置3035下培养7天。检查试验样品内微生物生长情况，有生长记作“”，无生长记作“”。4.2.3阳性对照： 阳性对照试验样品不经菌悬液浸泡，其外表用含0.5%过乙酸的70%异丙醇消毒五分钟后，接种10100CFU铜绿假单胞菌，进行阳性对照试验。4.2.4确认培养基促菌生长能力营养试验：所有试样品培养14天均不长菌时，从上述4.1试验样品中随机取20个带盖试验样品，每个试验样品内接种100CFU铜绿假单胞菌。在3035下培养7天，或培养至所有试样品都呈阳性结果。5结果判断：5.1若7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试验样品中，微生物生长良好，则容器内培养基的促菌生长能力可判为合格。使用革兰染色镜检，置于紫外灯下，培养基呈蓝绿色荧光，则确认试验样品容器内生长的菌为接入的铜绿假单胞菌，即为阳性。 5.2若7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样品中，微生物生长条件不好或经鉴别后受其它菌种污染，则试验失败，需重新作营养试验。6结果评价:6.1营养试验和阳性对照试验都合格，微生物侵入试验才有效。6.2挑战试验中如有长菌，需记录长菌的瓶数并须按下述要求作进一步调查。6.2.1仔细去除微生物生长的容器的盖和塞，检查容器封口是否有缺损，造成微生物侵入。6.2.2将观察到试验样品封口的缺陷，采用拍照或其他适当方式详细记录。6.2.3如果任何挑战试验中长菌的试验样品不是由于容器封口明显的物理性缺损所致，容器密封性挑战试验作失败论。 7注意事项：7.1微生物侵入试验用菌悬液经灭菌后丢弃。7.2在培养期内，当试验中发现任何带盖试样品长菌时，则试验无效，须弃去全部试样品，重新从头开始试验。7.3微生物培养及侵入试验应在不影响生产环境的地方（中心化验室阳性室）进行。 8再验证周期8.1当轧盖设备发生变化时应进行再验证。8.2改变胶塞、西林瓶及铝盖尺寸、材质时应进行再验证。冻干粉针剂轧盖密封完好性试验报告试验日期：试验人员：审 核：批 准：报告人： 日期：1.概述本验证由生产部及质保部、质检科按各自所负责的验证项目共同实施完成，并在质保部的全过程监控下按已批准的方案实施验证；本次验证所使用的仪器、仪表均已校正合格。验证实施日期为 年 月 日至 年 月 日。2.验证结果：见附表营养试样和挑战性试样记录。3.结果分析：3.1若7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试验样品中，微生物生长良好，则容器内培养基的促菌生长能力可判为合格。使用革兰染色镜检，并置于紫外灯下，培养基呈蓝绿色荧光，则确认试样品容器内生长的菌为接入的铜绿假单胞菌，即为阳性。 3.2若7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样品中，微生物生长条件不好或经鉴别后受其它菌种污染，则试验失败，需重新作营养试验。3.3营养试验和阳性对照试验都合格，微生物侵入试验才有效。4.评价：本次验证结论：冻干粉针剂轧盖密封完好性验证合格，表明各项工艺卫生管理规程及轧盖、无菌操作程序、净化空调、灌装机、人员符合GMP及无菌制剂生产要求，可进行产品的正式生产。5.建议1当轧盖设备发生变化时应进行再验证。2改变胶塞、西林瓶及铝盖尺寸、材质时应进行再验证。表1营养试验检测记录验证项目：西林瓶轧盖完整性检测验证方法：按验证方案测试。验证结果：日期及验证天数123456789101112