医学课件致畸试验

致畸试验 哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生毒理学教研室任锐 某些化学物进入妊娠母体后 能对胚胎发育产生毒害作用 致使胎仔的器官形态结构发生缺陷而表现为畸形 这样的物质称为化学致畸物或致畸原 致畸试验是通过在致畸敏感期 器官形成期 对妊娠动物染毒 在妊娠末期观察胎仔有无发育障碍与畸形来评价受试物致畸作用的方法 对于全面评价化学毒物的毒性具有重要意义 妊娠母体接触某些具有致畸作用的化学物质 对于处在器官形成期的胚胎发育可产生不良影响 使胎仔形态结构发生缺陷而呈现畸形 因此 可以通过观察妊娠母体在敏感期接触受试物后胚胎及胎仔的发育状况来评价某种化学物有无致畸作用 基本原理 手术用剪刀 无齿镊子 单面刀片 上皿天平 感量0 1g 游标卡尺 玻璃标本瓶 平皿 实体显微镜 器材 生理盐水 灭菌 80 乙醇 Bouin固定液 茜素红S染色液 透明液 试剂 实验步骤 1 动物选择 2 剂量分组 3 染毒 4 孕鼠状况观察 5 动物剖检 动物选择 致畸试验中动物应选择 食性和对受试物代谢过程与人类接近 体型小 驯服 容易饲养和易繁殖及价廉外 还应特别注意妊娠过程较短 每窝产仔数较多和胎盘构造与人类接近的动物 致畸试验可选用二种哺乳动物 一般首先考虑大鼠 此外为小鼠或家兔 剂量分组在确定剂量时 一方面要求找出最大无作用剂量以及致畸阈剂量 同时还要保持母体生育能力 不致大批流产和过多胚胎死亡和避免母体死亡 一般应先进行预试 根据预试结果可以确定正式试验剂量 应最少设3个剂量组 另设对照组 一般最高剂量不超过LD50的1 5 1 3 低剂量可为1 100 1 30 动物交配处理将性成熟雌雄动物按雌雄1 1或2 1的比例同笼交配 每日将已确定受孕雌鼠随机分入各剂量组和对照组 每组至少需要有20只怀孕雌鼠存活 染毒在受孕大鼠器官形成期给予受试物 阴栓 显微镜下观察到的精子 一般状况 进食 状态称量体重 3天称量1次 孕鼠状况观察 胎仔检查自然分娩前1 2日将受孕动物处死剖腹 取出子宫及活产胎仔 记录死胎及吸收胎 一般大鼠在受孕后第19 20天 小鼠第18 19天 1 着床数活胎数 外观 光泽死胎数 早死胎 晚死胎子宫数黄体数 各类胎仔特征 摘出子宫连同子宫内胎仔一起称重 称为 窝重 剖开子宫及羊膜 逐个钳住剪断脐带 取出胎仔 剥离胎盘 称胎盘重量 窝重 仔鼠重 羊水 胎盘净增重 20d重 6d重 窝重 2 窝重 3 外观 首先观察是否有水肿 皮下淤血 然后从颈 胸腹 脊背到前后肢仔细观察记录 体重 身长 尾长 4 一般发育指标的测量 5 骨骼检查 徒手切片法 切面1 通过口经耳后作水平切面 检查颚与舌 切面2 将切下的头部沿眼球中央垂直通过眼球做额状切面 检查眼及嗅球 切面3 在切面2与鼻翼间作垂直额面切片 观察鼻道及鼻中隔 切面4 在切面2与后脑中间 检查脑 蛛网膜下腔及脑室 切面5 前肢上缘向后切 观察气管 食管和脊髓切面6 前肢下缘向后切 观察肺 纵隔 心房 脊髓切面7 剑突下向后切 观察肺 心室 心室中隔切面8 从脐至剑突1 2处向后切 检查肺 横隔切面9 从脐向后切 观察肝 胃 小部分 6 内脏检查 致畸实验中可见的主要内脏畸形或异常 结果判定 母鼠妊娠期体重变化 平均着床数 平均活胎率 着床后胚胎死亡率 活胎仔平均体重 身长 尾长畸形 外观 内脏及骨骼 总数 结果判定 雌雄鼠交配后并非全部怀孕 大鼠妊娠率约70 90 小鼠妊娠率较大鼠低 不