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维生素C含量测定方法综述 劲舞团SF 1 摘要 目前研究维生素C测定方法的报道较多 如滴定法 光度分析法 高效液相色谱法等 各种方法各有特点 特别是高效液相色谱法是近年来发展较快的一种方法 本文对近年来有关维生素C的测定方法进行了综述 2 关键词 维生素C滴定法光度分析法高效液相色普法等 3 概述 维生素C是可溶于水的无色结晶 是一种分子结构最简单的维生素 维生素C有防治坏血病的功能 所以在医药上常把它叫做抗坏血酸 维生素C能保持巯基酶的活性和谷胱甘肽的还原状态 起解毒作用等 其广泛存在于植物组织中 新鲜的水果 蔬菜 特别是枣 辣椒 苦瓜 柿子叶 猕猴桃 柑橘等食品中含量尤为丰富 准确测定维生素C的含量 对饮食健康 医疗保健都具有十分重要的意义 近年来报道的测定方法主要有滴定法 光度法 高效液相色谱法等 4 维生素C的结构式 维生素C 六碳的多羟基内酯 5 6 1滴定法测定维生素C 1 12 6一二氯靛酚法1 2微量滴定法 7 2 6 二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量 其能还原2 6 二氯酚靛酚染料 维生素C具有还原性的烯二醇基 我们通过氧化还原滴定来测定维生素C 8 2 6 二氯靛酚法 原理 2 6 二氯靛酚是一种染料 其氧化型在酸性介质中为红色 碱性介质中为蓝色 与Vc反应后 生成无色的还原型酚亚胺 因此 在酸性条件下 用2 6 二氯靛酚滴定至溶液显玫瑰红色 即为终点 无需另加指示剂 9 2 6 二氯靛酚法 方法 取本品适量 约相当于Vc50mg 用适量水溶解 置100ml量瓶中 加偏磷酸 醋酸试液20ml 再用水稀释置刻度 摇匀 精密量取稀释液适量 约相当于Vc2mg 置50ml的锥形瓶中 加偏磷酸 醋酸试液5ml 用2 6 二氯靛酚滴定液滴定 至溶液显玫瑰红色 并持续5s不褪 空白试验 取偏磷酸 醋酸试液5 5ml 加水15ml 用2 6 二氯靛酚滴定液滴定 计算 V V0 F T W W 标示量 标示量 反应摩尔比 100 10 维生素C2 6 二氯酚靛酚维生素C2 6 二氯酚靛酚 还原型 氧化型 粉红色 氧化型 还原型 2 6 二氯酚靛酚染料的钠盐在水溶液中显蓝色 在酸性溶液中呈红色 被还原后红色消失 11 碘量法 原理 由于维生素C分子中的烯二醇基有极强的还原性 能被碘氧化 用碘滴定VCEC6H6O6 C6H8O6 0 18 EI2 I 0 535终点 淀粉为指示剂 溶液出现稳定的蓝色即为终点反应式 12 碘量法 碘的浓度由已知浓度的Na2S2O3标准溶液标定反应式 计算式 Wvc C I2 V I2 M vc m vc 100 13 碘量法 注意 测定时 加HAC使溶液呈弱酸性原因 1 Vc还原性很强 在空气中很容易被氧化 在碱性介质中更甚 2 I2在碱性介质中会发生歧化反应加HAC可减少VC的副反应 避免实验误差 14 电位滴定法 原理 根据滴定过程中电池电动势的变化来确定反应终点 Pt为指示电极 甘汞作参比电极E池 E E E液接电位 EI2 I k 常数 15 电位滴定法 原理 具体来说 随着滴定剂的加入 由于发生化学反应 待测离子浓度将不断变化 从而指示电极电位发生相应变化 导致电池电动势发生相应变化 计量点附近离子浓度发生突变 引起电位的突变 因此由测量工作电池电动势的变化就能确定终点 16 电位滴定法 右图 电位滴定法基本仪器装置计算式 与碘量法相同 Wvc C I2 V I2 M vc m vc 100 优点 解决了滴定分析中遇到有色或浑浊溶液时无法指示终点的问题 17 2分光光度测定维生素C 2 12 4一二硝基苯肼分光光度法2 2钼蓝比色法2 3其他方法 18 2 4一二硝基苯肼分光光度法 原理 维生素C在空气中尤其在碱性介质中极易被氧化成脱氢抗坏血酸反应式 19 2 4一二硝基苯肼分光光度法 pH 5 脱氢抗坏血酸内环开裂 形成二酮古洛糖酸二酮古洛糖酸 20 2 4一二硝基苯肼分光光度法 脱氢抗坏血酸 二酮古洛糖酸均能和2 4 二硝基苯肼生成可溶于硫酸的脎脎在500nm波长有最大吸收脎的结构 21 分光光度法 样品溶液与VC标准溶液按上述方法同样处理500nm处测吸光度下图 721型分光光度计 22 钼蓝比色法 马占玲等用钼蓝比色法测定青椒中还原型维生素C含量的基本原理和方法 测定波长839nm 维生素C含量在0 004 0 024mg mL范围内呈线性关系 回收率为97 2 该方法简单 快速 准确 23 钼蓝比色法 逯家辉等提出了一种测定维生素C的新方法 它是基于FolinB试剂与抗坏血酸在pH 3的三氯乙酸酸性介质中反应生成脱氢抗坏血酸 反应产物在910nm波长处有最大吸光度进行定量分析 该方法的线性范围为0 50 0 g mL 相关系数r 0 99986 回收率为98 12 102 15 24 差示旋光法 原理 方法 结果 维生素C片在不同PH值的溶液中旋光度有显著差异 而片剂辅料旋光度保持不变差示旋光法消除辅料的影响 直接测出该制剂的含量 讨论 与 25 差示旋光法 方法 TEXT 1 标准溶液的配制准确称取维生素C精制品5 0g 乙二胺四乙酸钠0 37g 置于100mL容量瓶中 用新沸冷却的蒸馏水溶解 加水到指定刻度 配制成50mg mL的维生素C标准溶液 TEXT 原理 方法 结果 讨论 与 26 差示旋光法 2 比旋光度与溶液pH值的关系量取10 0mL维生素C标准液于50mL量瓶中 用水稀释至50mL 测定溶液的pH及旋光度 然后逐次分批加入氢氧化钠固体 每次约50mg 每次溶解后 测定一次溶液的pH及其旋光度 得到维生素C溶液的pH及旋光度关系 原理 方法 结果 讨论 与 27 差示旋光法 选定pH为2 2和6 2 28 差示旋光法 2 差示旋光度与溶液浓度关系吸取2 0 4 0 8 0 16 0 20 0mL的维生素C标准液各两份 分别置于50mL的容量瓶 一份用pH2 2的盐酸盐缓冲液定容 一份用pH6 2的磷酸盐缓冲液定容 静置3min后 用220mm测定管 以前者为空白 测定后者的差示旋光度 a 文献结果 线性方程为 a 0205 C 0 05 r 0 9964 原理 方法 结果 讨论 与 29 差示旋光法 3 辅料干扰试验取混合辅料20mg 淀粉 硬脂酸镁 EDTA 糊精等按处方比例混匀 两份分别置于50mL的容量瓶 一份用pH2 2的盐酸盐缓冲液定容 一份用pH6 2的磷酸盐缓冲液定容 滤去不溶物 滤液在两种pH值测定差示旋光度 文献结果 辅料的差示旋光度为零 说明辅料对维生素C含量的测定不干扰 原理 方法 结果 讨论 与 30 差示旋光法 4 稳定性试验同一测试样品 在120min内 每隔3min测定一次差示旋光度 文献结果 差示旋光度基本不变 原理 方法 结果 讨论 与 31 差示旋光法 5 回收率试验精密称取维生素C精制品500 0mg两份 分别置于50mL容量瓶中 各加入20mg辅料 分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液 测定差示旋光度 文献结果 平均回收率为97 8 变异系数cv为1 03 原理 方法 结果 讨论 与 32 差示旋光法 方法 TEXT 6 样品测定取维生素C片剂10片 称重研碎后分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液 相当于含Vc20mg mL 滤去不溶物 测定滤液的差示旋光度 根据回归方程计算其含量 TEXT 原理 讨论 方法 结果 与 33 差示旋光法 方法 TEXT 1 维生素易被氧化 空气及水中的氧均可使其氧化分解 配制溶液时使用新沸冷却水 同时加人EDTA作为稳定剂 2 样品测定时 片剂部分物质不能完全溶解 必须过滤除去 然后测定滤液的差示旋光度 TEXT 原理 讨论 方法 结果 与 34 3高效液相色谱法测定维生素C 3 1HYPERSIL C8色谱柱法3 2VenusilXBP C18柱法3 3其他方法 35 HYPERSIL C8色谱柱法 采用HYPERSIL C8色谱柱 用0 1 低浓度的草酸作流动相 陈昌云等采用0 05mol L磷酸二氢钾缓冲液 甲醇 80 20 v v 作流动相 流速为1 0mL min 二极管阵列检测器 检测波长为254nm 36 3 2VenusilXBP C18柱法 系统采用VenusilXBP C18柱 4 6x250mm 5 g 用0 2 的偏磷酸的水溶液作为流动相 流速1ml min 检测波长240nm 维生素C浓度在0 1 1 0mg mL范围内有良好的线性关系 该方法回收率99 89 标准偏差0 91 操作简便 灵敏 可靠 37 薄层扫描法 原理维生素C具有较强还原性 可使蓝色染料2 6 二氯靛酚钠定量地还原成无色的酚亚胺 而本身被氧化成去氢抗坏血酸 利用此特征进行薄层扫描法测定含量 38 薄层扫描法 操作方法与结果 1 试纸的制备2 6 二氯靛酚钠 DCP Na 溶于无水乙醇配成0 05 的DCP Na乙醇溶液 滤纸在盛有DCP Na乙醇溶液的展开缸中浸渍3min 边浸边摇展开缸 使滤纸均匀着色 充分被染料溶液所饱和 取出悬挂于暗处 晾干后 立即放入干燥器中避光保存 备用 39 薄层扫描法 2 缓冲溶液的配制称取柠檬酸水合物10g 放入1000ml容量瓶中 加入1M氢氧化钠420ml 并用蒸馏水稀释至刻度 此溶液的pH应为3 5 否则 用酸或碱调整pH值 保存于冰箱中 40 薄层扫描法 3 扫描条件确定在制备的染料试纸上定量点上维生素C对照品进行扫描 维生素C在290nm处有最大吸收 420nm处无吸收 故选择 1 290nm 2 420nm 双波长反射式锯齿扫描 原理 方法 结果 讨论 与 41 薄层扫描法 4 线性实验4 1 对照品溶液的配制精密称取维生素C标准品100mg 用缓冲溶液配成lmg ml的标准溶液 精密称取维生素C标准溶液1 2 3 4 5ml 分别置于10ml容量瓶中 用缓冲溶液稀释至刻度 4 2 测定用5 l定量毛细管 分别吸取上述溶液各5 l 点于试纸上 点样后晾干 并将试纸固定在20cm 20cm玻璃板上 放入薄层扫描仪 测定 A的积分值 峰面积 作为纵坐标Y 点样量为横坐标X 得一直线方程Y 15692X 130225 r 0 9991 原理 方法 结果 讨论 与 42 薄层扫描法 方法 TEXT 5 样品的含量测定取维生素C片10片 研细 精密称取平均片重一片的粉末 放入100ml容量瓶中 加入缓冲液至刻度 振摇 使维生素C溶解 放置 澄清 用吸液管取3ml移至10ml容量瓶中 用缓冲液稀释至刻度 用5 l定量毛细管点样品溶液与不同浓度的标准液于同一试纸上 然后扫描测定峰面积 由工作曲线法计算维生素C片中的维生素C含量 TEXT 原理 方法 结果 讨论 与 43 薄层扫描法 6 回收率实验精密称取维生素C对照品20mg 其它原辅料适量 置10ml容量瓶中 加缓冲液稀释至刻度 振摇 滤过 弃初滤液 分别吸取续滤液与对照品维生素C液各5 l点于同一试纸上 按上述条件进行扫描测定 44 薄层扫描法 点样时各点间距应大于10mm 扫描测不定期波长可做少量变动 但每次测定必须固定同一测定波长点样量在3 8 l之间线性关系较好 当点样量为10 l 线性关系较差 原理 方法 结果 讨论 与 45 结束语 总之 维生素C的测定方法很多 各种方法各有特点 常用的滴定法方法简单 但在滴定有色物质终点不易判断 分光光度法操作费时 高效液相色谱法是目前发展较快的一种方法 方法灵敏 选择性好 有较好的发展前景 毛细管电泳n51是近几年新兴的分析方法 具有效率高 分析时间短 样品处理简单等特点 但有待于进一步完善 46 参考文献 1 吴春艳 水果中维生素C含量的测定及比较 J 武汉理工大学学报 2oo7 29 3 90 91 2 王元秀 庄海燕 微量滴定法测定猕猴桃中维生素C的含量 J1 济南大学学报 自然科学版 2001 15 4 374 3 张颖 等 不同产地枸杞子中维生素C含量测定 J 中国医院药学杂志 2004 24 8 500 501 4 袁叶飞 甄汉深 欧贤红 分光光度法测定大枣中的维生素C含量 J 安徽中医学院学报 2006 25 2 40 41 5 马占玲 等 青椒中还原型维生素C含量的测定 J 渤海大学学报 自然科学版 2006 27 2 111 113 47 参考文献 6 逯家辉 等 F0linB分光光度法测定蔬菜中维生素C的含量 J 分析检测 2oo5 26 8 171 172 7 王艳颖 等 高效液相色谱法测定草莓中维生素C含量 J 大连大学学报 2006 27 2 21 22 8 姜波 范圣第 刘长建 花艳红 菠萝中维生素C的高效液相色谱分析 J 大连民族学院学报 2003 5 1 52 53 9 刘长建 青椒中维生素C的高效液相色谱分析 J 大连轻工业学院学报 2004 23 3 229 230 10 陈昌云 李小华 刘莉莉 高效液相色谱法测定蜜柚中维生素C的含量 J 化工时刊 2oo7 21 8 19 21 48 参考文献 11 王爱月 张向兵 李发生 高效液相色谱法测定食品及保健品中维生素C含量的研究 J 中国卫生检验杂志 2006 16 10 1175 1176 12 雍莉 等 高效液相色谱法快速测定保健食品和果蔬中的VitC J 现代预防医学 2005 32 3 247 248 13 胡志群 王惠聪 胡桂兵 高效液相色谱测定荔枝果肉中的糖 酸和维生素C J 果树学报 2005 22 5 582 14 张秀梅 等 高效液相色谱法测定菠萝