专题二.docx

选修一专题二1某市卫生计生委发布的卫生监测信息显示一些美容美发场所的毛巾、理发(美容)用具大肠杆菌严重超标。如图甲为大肠杆菌含量检测操作简图，图乙为伊红美蓝培养基配方。回答下列相关问题： （1）配制图乙中的基础培养基时，除了水分、无机盐以外，还应加入_(一种营养成分)，以及_。待各成分都溶化后和分装前，要进行的是_和灭菌，对培养基进行灭菌的常用器具是_。倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置，其主要目的是_。伊红美蓝培养基上生长的大肠杆菌菌落呈现深紫色，从功能上划分，该培养基属于_培养基。（2）用平板划线法分离样液中的大肠杆菌，操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线的目的是_。要检测样液中的大肠杆菌含量，取25 cm2毛巾样本，加5 mL蒸馏水，浸润半小时，然后在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL样液；在37 的培养箱中放置48小时，3个平板上的黑色菌落数分别为49、48和47。据此可得出25 cm2毛巾样液中的活菌数为_。2炭疽杆菌能引起人畜患炭疽病，而噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌。对炭疽病疑似患者，可通过图1所示鉴定炭疸杆菌的实验进行确诊，回答下列问题：（1）微生物生长所需的营养物质有水、无机盐、_。为从炭疽病疑似患者体内分离出炭疽杆菌，将采集到的患者皮肤脓胞渗出物稀释后取0.1 mL滴于培养基表面，用无菌_涂匀，这种接种方法称为涂布平板法。（2）制备图1中的液体培养基时采取高压蒸汽灭菌法灭菌，锅内水加热煮沸后，必须 _，以保证灭菌温度达到121。灭菌的目的是_。（3）图2中接种工具的名称是_，灼烧后必须先将接种工具冷却的原因是_。（4）据图1分析，接种可疑菌后，经35 培养24小时，液体培养基变浑浊，对照组试管中应加入_，与实验组同时培养6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组_（填“高”或“低”），则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。原理是实验组中_，溶液变澄清。3已知一种有机物X（仅含有C、H两种元素）不易降解，会造成环境污染。某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌（目标菌）。号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X（5 g/L）。号培养基：氯化钠（5 g/L），硝酸铵（3 g/L），其他无机盐（适量），X（15 g/L）。号培养基：氯化钠（5 g/L），硝酸铵（3 g/L），其他无机盐（适量）。X（45 g/L）。回答下列问题。（1）在号培养基中，为微生物提供氮源的是_。、号培养基中为微生物提供碳源的有机物是_。（2）若将土壤悬浮液接种在号液体培养基中，培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会_，其原因是_。（3）号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是_。（4）假设从号培养基中得到了能高效降解X的细菌，且该菌能将X代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长提供_和_。4微生物絮凝剂不仅具有絮凝沉降废水的作用，同时具有自身降解的能力，是一类无毒、安全、环保、不造成二次污染的絮凝剂。科研人员通过生物技术筛选稳定、高效的微生物絮凝剂产生菌。请回答问题：(1)将取自玉米地的土壤，加入_制成菌液，将菌液接种到培养基中进行富集培养，再通过_法接种到固体培养基，数天后，挑选出生长较好、表面光滑带黏性的单个菌落，分别接种到液体培养基中继续培养。(2)测定初选菌落对高岭土悬液的絮凝效果，挑选出_的菌株，通过测定该菌株基因序列，与产絮凝剂菌株系统发育进化树进行比对，确定为酱油曲霉。(3)为进一步确定起主要絮凝作用的是菌体细胞还是菌体释放到发酵上清液中的物质，分别测定发酵液中不同成分对高岭土悬液的絮凝效果，结果如图1。图1其中D组的作用是排除_。实验结果表明_。(4)为研究微生物絮凝剂对生活污水中有机物去除效果的影响因素（有机物污染程度用生化需氧量COD表示），科研人员又进行了如下实验。i.向生活污水中加入4 mL微生物絮凝剂，均分为多组，pH值分别调到19，将温度设定为该菌最适生活温度30，培养后取样测定COD去除率。结果见图2。ii.调节生活污水pH值为7，均分为多组，分别加入不同剂量的微生物絮凝剂，将温度设定为30，培养后取样测定COD去除率。结果见图3。由结果可知，COD去除效果最佳的条件是_。上述实验结论不严谨，请从实验设计中寻找原因_。5联苯（C12H10）是一种难以降解的环境污染物，研究发现联苯降解菌内的联苯水解酶是催化联苯降解的关键酶。为了从富含联苯的环境中分离出联苯降解菌，某同学设计了甲、乙两种培养基，成分如下表：维生素NH4NO3MgCl2联苯水琼脂培养基甲+培养基乙+（注：“+”表示添加该物质，“”表示没有添加该物质）（1）甲培养基中加入联苯作为_用于培养联苯降解菌，该培养基属于_（填“选择”或“鉴定”）培养基，接种前需采用_法进行灭菌。（2）为了便于测定培养基乙中联苯降解菌的数量，可以从培养基乙中取培养液1mL加入到_中稀释100倍之后进行显微计数，由此计算得到的培养基乙中联苯降解菌的数量是_（填“真实值”或“估算值”）。（3）关于图示接种方法的叙述，正确的是_A接种环正在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌B接种后的平板需倒置培养C该接种方法可得到单个菌落D酒精灯提供了局部无菌环境6（生物选修1:生物技术与实践）为研究某品牌酸奶中乳酸菌数量及其对抗生素的耐药性，某同学进行了如下实验。请分析回答下列问题：（1）配制的细菌培养基除了含有水、_和无机盐等主要营养成分外，还应加入适量的_和琼脂。（2）接种微生物的方法有很多，图1中过程所示的方法为_。用该方法统计样本菌落数后，所得数据需要乘以10n才可表示乳酸菌的数量（单位：个/mL)，这里的n=_。（3）为了检测乳酸菌对螺旋霉素的敏感性，取该单菌落适当稀释，接种于含适量螺旋霉素的固体培养基表面，在适宜条件下培养一段时间后，培养基上出现了两个菌落，可推测该种乳酸菌对螺旋霉素_（填“敏感”或“不敏感”)；在排除杂菌污染的情况下，这两个菌落是对螺旋霉素具有_的。7在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染，请回答下列问题：（1）日常生活中常用煮沸消毒法，在100煮沸6min可以杀死_。牛奶一般使用_消毒。（2）在微生物的培养过程中，操作者的双手需要进行清洗和_（填“消毒”或“灭菌”）。密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，紫外线能使蛋白质变性和_。在照射前，适量喷洒_可加强消毒效果。（3）玻璃器皿和金属用具一般采用_法灭菌，配制好的培养基一般采用_法灭菌。无菌技术要求实验操作在酒精灯_附近进行，以免周围环境中微生物的污染。8某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A（含碳元素和氮元素）。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如图所示。请分析回答下列问题:（1）为了筛选目的菌，培养基中必须加入_，这种培养基按功能划分属于_培养基。（2）化合物A 能为“目的菌”提供生长所需的_。实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”进行的呼吸作用类型是_。（3）在上述实验操作过程中，获得纯净“目的菌”的关键是防止_入侵。（4）转为固体培养基时，常采用平板划线的方法进行接种，此过程中所用的接种工具是_，接种操作时对其灭菌的方法为_。（5）某同学计划统计污水池中“目的菌”的总数，他选用10-4、10-5、10-6稀释液进行涂布平板接种，每种稀释液都设置了3个培养皿重复实验，目的是_。9细菌经人工诱变后，部分细菌由于不能合成某种酶，其细胞代谢中某些化学反应不能进行，就形成了营养缺陷型菌株，在工业生产上有广阔的应用前景。以下是实验人员利用影印接种法初检某种氨基酸缺陷型菌株的过程。请回答下列问题：（1）微生物生长需要的基本营养物质有水、碳源和_，制备图中的培养基一般还需要加入_作凝固剂。（2）制备图中培养基的基本步骤一般包括：计算_，若需调节pH值应该在灭菌之_（填“前”或“后”）。培养基的灭菌方法一般为_。（3）按照功能分类，图中的基本培养基属于_（填“选择”或“鉴别”）培养基。过程的接种方法为_，若用该方法进行微生物计数，统计结果一般用_（填“活菌数”或“菌落数”）来表示。（4）采用影印法培养的优点是不同培养基中同种菌株的接种位置相同。为了完成对初检的营养缺陷型菌株的鉴定，实验人员应挑选菌落_（填“A”或“B”）继续接种培养，并进一步鉴定。10研究人员从健康人肠道中分离筛选出乳酸杆菌，并对其进行体外益生特性（人工胃液耐受性、抑菌活性等）的研究。回答下列问题：（1）乳酸杆菌培养基的配方中应含有水、碳源、_和无机盐这四类物质及维生素等。为便于形成菌落，该培养基应为_培养基。培养基宜采用_方法进行灭菌，以杀死培养基中的所有的微生物，包括_。（2）要对乳酸杆菌进行活菌计数，应采用的接种方法是_，接种后必须置于适宜温度及_条件下培养。（3）乳酸杆菌的抑菌活性研究：用分离得到的三株乳酸杆菌对肠道中的三种其他细菌进行抑菌实验，结果如下表。细菌种类抑菌圈直径（mm） 乳酸杆菌菌株大肠杆菌粪肠球菌金黄色葡萄球菌LpMT39.6717.515.83LpMT59.1718.516.17LsAF712.6719.6715.9注：抑菌圈是乳酸杆菌在生活过程中分泌某些物质对其周围的其他细菌的生长产生抑制作用形成的透明圈。表中抑菌圈的大小表示_。根据实验结果，对粪肠球菌抑制作用最强的是_菌株；乳酸杆菌对_菌的抑制能力最弱。（4）乳酸杆菌对人工胃液的耐受性研究：配制适宜浓度的胃蛋白酶溶液，滴加HCl调节pH至酸性制成人工胃液。宜采用下列_方法对人工胃液进行除菌，之后进行乳酸杆菌耐受性测定。A过滤 B干热灭菌 C灼烧灭菌 D高压蒸汽灭菌胃液pH值在空腹时可低至1.5，正常饮食后胃液pH为3.0-5.0。食物在胃中停留时间约为1-2 h。研究发现，乳酸杆菌在pH为2.0的人工胃液中处理2h后的存活率几乎为0，而在pH为3.0的人工胃液中处理2 h后的存活率为86.65%。这一研究结果提示我们食用含有乳酸杆菌的酸奶应避免在_时食用。11下表为培养某种微生物的培养基配方，请回答有关问题： （1）该培养基只允许分解尿素的细菌生长，这种培养基称为_培养基。该培养基会 抑制其他种类微生物生长，其原因是该培养基_。 （2）若要通过统计培养基中菌落数来估计样品中的细菌数，上述培养基中还需要添加的成 分是_，接种时应采用_法，该方法接种培养基后的菌落，不可能是下图中的_（单选）。 （3）从土壤中分离出分解尿素的细菌后，要对其作进一步的鉴定，可在上述培养基中加入_指示剂，培养该菌后，如果指示剂变_，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。12尿素CO(NH2)2是一种重要的农业氮肥。但尿素并不能直接被农作物吸收，只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。某生物兴趣小组欲分离土壤中分解尿素的细菌，设计了如下实验流程：土壤取样选择培养梯度稀释涂布培养计数与鉴定请回答相关问题：（1）涂布培养前需要梯度稀释，其目的是_，如果得到了2个或2个以上菌落数目在_之间的平板，则说明稀释操作比较成功。（2）选择培养过程能够“浓缩”尿素分解菌是因为其培养基_（3）取1g土壤，按下图稀释后，在三个平板上分别接入0.1ml稀释液后，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别是52, 50和48。据此可计算出每克土样中的活菌数为_，该数值与活菌的实际数目相比_（偏高偏低），原因是：_（4）在培养基上滴加酚红指示剂可以鉴定其上细菌能否分解尿素，其原理是_13反刍动物的瘤胃中有许多能利用尿素的微生物。为了研究利用尿素配制的反刍动物饲料，以替代部分蛋白质饲料，降低饲料成本，进行了相关实验。请回答下列问题：（1）瘤胃中的尿素分解菌能将尿素分解成_，其中的_可用于合成微生物蛋白，该蛋白质是反刍动物的优质氮源。（2）为研究瘤胃中尿素分解菌的种类，实验者配制以尿素为唯一氮源的培养基，该培养基从功能上属于_培养基。可在培养基中加入_指示剂以初步鉴定这些菌能够分解尿素，为确证这些菌是尿素分解菌，可通过酶活性测定及基因数据库比对，只有具有脲酶活性和_基因的菌，才是真正的尿素分解菌。（3）研究发现，如果只饲喂尿素配制的饲料，会导致反刍动物氨中毒，请根据高中所学知识分析其原因是_。（4）研究发现，瘤胃中尿素分解菌分解尿素的速度非常快，导致释放的物质没有被反刍动物充分利用就被排出，使尿素利用率偏低。如果你是研究者，希望通过哪些措施以减缓尿素分解提高利用率？_（答出两点）14尿素是一种重要的氮肥，农作物不能将其直接吸收利用，而是通过土壤中的细菌将其分解为氨和CO2后才能被农作物利用。回答下列问题：（1）土壤中的某些细菌能分解尿素，其根本原因是_。（2）为筛选尿素分解菌而制备的培养基中含有的营养物质除尿素外，还包括水、碳源和_等，该培养基能筛选出目的菌株的原因是_。（3）一般依据尿素分解菌菌落的_、隆起程度和颜色等特征来区分统计菌落数目。现将10mL尿素分解菌悬液进行梯度稀释，分别取01mL稀释倍数为106的样液接种到3个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为152、155、158，则1mL悬液中活细菌数量为_个。上述过程采用的接种方法是_。（4）为检验培养基及培养皿灭菌是否合格，可采取的措施是_。15饮料酒在生产过程中会产生少量尿素，酒体呈酸性。尿素能与酒精反应生成有害物质，脲酶能分解酒体中的尿素。请回答下列问题：(1)对土壤溶液中酸性脲酶菌进行富集培养(初筛)时，培养基的氮源应选用_，与固体培养基相比，液体培养基更适于富集培养的原因是_。(2)复筛酸性脲酶菌的培养基为中性固体培养基，以酚红为指示剂。经接种、培养后，发现平板上有的菌落周围出现红色圈，有的没有。在挑选时，应选择_(“有红色圈的菌落”无红色圈的菌落”)。(3)从酸性脲酶菌中提取脲酶后，不宜直接将脲酶加入酒体中，原因是_。将酸性脲酶和海藻酸钠混合，用注射器滴入凝结液中形成珠粒，这种固化酶的方法称为_。研究发现海藻酸钠浓度过高时脲酶的活性偏低，原因是_。(4)工业化处理酒体中尿素时，若酒体在一次流经酸性脲酶凝胶反应柱后，尿素含量仍高于产品标准，在不增加柱高的前提下，改进生产工艺流程的措施是_。16现在大力提倡无纸化办公，但是仍然不可避免每年要产生大量的废纸，其主要成分是木质纤维，人类正努力将其转化为一种新的资源乙醇。如图是工业上利用微生物由纤维素生产乙醇的基本流程。（1）从土壤中筛选纤维素分解菌需要在培养基中需要加入_ 作为唯一碳源。（2）经过梯度稀释后，要将样品均匀涂布在用于鉴别纤维素分解菌的培养基上,在该培养基中需要加入的特殊染料是_。当形成菌落以后，可以根据菌落周围是否产生_来筛选纤维素分解菌。当利用涂布器涂布平板之后,需要对涂布器进行_处理。（3）如上所述的筛选中获得了三个菌落，对它们分别培养，并完成环节，三种等量酶液的活性_（填“一定相同”“不一定相同”或“一定不同”）,可以通过_进行定量的测定。（4）根据测定结果,环节常选择木霉,则中获得的酶是_酶。该酶至少包括_三种组分。17人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的营养价值。为了增强发酵效果，研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，实验流程示意图如下图所示。请回答下列问题：（1）步骤A是_，可以通过此步骤增加_。（2）研究人员用_法筛选纤维素分解菌，这种方法能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选。（3）研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株甲和乙，在不同pH条件下进行发酵，测得发酵液中酶活性的结果见下表，推测菌株_更适合用于人工瘤胃发酵，理由是_。注：纤维素酶活性用U表示。18植物秸秆中的纤维素可被从土壤中分离、培养的纤维素分解菌分解，请回答下列问题：（1）从土壤中分离纤维素分解菌时，首先要进行选择培养，该过程使用的培养基中要添加_作为唯一碳源；其次要鉴别纤维素分解菌是否存在，此过程中需要在鉴别培养基中加入刚果红溶液（CR），CR可与纤维素形成_色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的_。（2）采用稀释涂布平板法检测该菌的含量，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，这样做的目的是_；采用平板划线法分离该菌。操作时，接种环需通过_灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得_。（3）培养时，需要将培养皿倒置培养，其目的是_。19某些农作物秸秆富含纤维素，纤维素经过水解可以形成葡萄糖，葡萄糖再经过发酵可以生产酒精。如图是利用农作物秸秆生产酒精的大致流程，请回答下列问题：(1)农作物秸秆含有丰富的纤维素，纤维素要经过纤维素分解菌分解成葡萄糖。人们常常是从土壤中分离纤维素分解菌。分离纤维素分解菌常用的方法是_。其实验流程是：土壤取样选择培养_将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生_的菌落。(2)纤维素分解菌能合成纤维素酶，纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少含有三种组分，即_、_、_。前两种酶使纤维素分解成_，第三种酶将它分解成葡萄糖。(3)在分离纤维素分解菌的实验过程中，需要染色环节。该染色法有两种：第一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应；第二种是在_时就加入刚果红。但使用第二种方法有两个明显缺点，它们是_；_。(4)通过上述过程，只能是初步判定分离出了分解纤维素的微生物。为了确定是纤维素分解菌，还需要进行_的实验。纤维素酶的测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的_进行定量的测定。(5)图中发酵阶段常用的菌种是酵母菌，在酒精发酵时一般将温度控制在_。发酵后是否有酒精产生，可以用_来检验。(6)利用葡萄能生产果酒，进而生产果醋，生产果醋常用的菌种是醋酸杆菌，醋酸杆菌与酵母菌在代谢类型上的区别是_。试卷第11页，总11页本卷由系统自动生成，请仔细校对后使用，答案仅供参考。参考答案1氮源 琼脂 调整pH 高压蒸汽灭菌锅 防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染 鉴别 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 2.4103 【解析】【分析】试题分析：实验将待测水样进行过滤，得到的滤膜进行微生物培养，因此水中的大肠杆菌应留在滤膜上，则滤膜上小孔的直径大小需要控制.培养基的基本成分一般包括水、无机盐、碳源、氮源，另外鉴别培养基是固体培养基，必须加入凝固剂琼脂。【详解】（1）培养基的基本成分一般包括水、无机盐、碳源、氮源，另外鉴别培养基是固体培养基，必须加入凝固剂琼脂。图中乳糖为碳源，因此培养基中还应该加入氮源，待各成分都熔化后和分装前，要进行调整pH和灭菌的操作，培养基灭菌要用到高压蒸汽灭菌锅，倒平板后的培养皿要倒置，为了防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染，伊红美蓝培养基上生长的大肠杆菌菌落呈黑色，从功能上划分，该培养基属于鉴别培养基。（2）用平板划线法分离样液中的大肠杆菌，操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始划线的目的是将聚集的菌体逐步稀释，以便获得单个菌落；25cm2的毛巾样液中活菌数=(49+48+47)30.15=2.4103。【点睛】解答本题的关键是识记微生物培养基的成分、培育条件、培养过程以及注意事项，能够根据不同微生物的代谢类型判断其所需营养成分的种类，进而结合题干要求分析答题。2碳源、氮源、(和生长因子) 涂布器(玻璃刮铲) 将锅内冷空气彻底排除 杀死全部微生物，包括芽孢和孢子 接种环 避免高温杀死接种物 等量生理盐水 低 噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌，使细菌死亡 【解析】【分析】为微生物的生长繁殖提供营养基质的是培养基；虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、无机盐、碳源和氮源，此外培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质及氧气的需求。纯化微生物时常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法是指通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。稀释涂布平板法是指将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液用涂布器(玻璃刮铲)分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染。依题意和分析图1可知：该实验的自变量为是否加入噬菌体。该实验的原理是：加入的噬菌体能够特异性地侵染炭疽杆菌，导致炭疽杆菌裂解死亡，使溶液变澄清。图2中的接种工具是接种环。【详解】(1) 微生物生长所需的营养物质有水、无机盐、碳源、氮源、(和生长因子)。采用涂布平板法接种微生物时使用的接种工具为涂布器(玻璃刮铲)。(2) 用高压蒸汽灭菌法对液体培养基进行灭菌时，锅内水加热煮沸后，必须将锅内冷空气彻底排除，以保证灭菌温度达到121。灭菌的目的是杀死全部微生物，包括芽孢和孢子。(3) 图2中的接种工具是接种环。为了避免高温杀死接种物，对于灼烧后的接种环，必须先将其冷却后才能用于划线操作。(4) 接种可疑菌后，该菌大量繁殖，导致培养液变浑浊。图1显示：实验组加入的是用生理盐水配制的澄清噬菌体液，据此可推知：对照组试管中应加入等量生理盐水。加入的噬菌体能够特异性地侵染炭疽杆菌，若该患者被炭疽杆菌感染，则培养液中的炭疽杆菌会因裂解死亡而使其数量下降，进而降低培养液的浑浊度，所以若实验组液体培养基的浑浊度比对照组低，则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。此实验的原理是：实验组中加入的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌，使细菌死亡，溶液变澄清。【点睛】解答本题的关键是识记并理解培养基与微生物的营养、无菌技术的主要内容、微生物的纯化培养方法、对照实验等相关知识。在此基础上，结合问题情境，从题意和图示中提取有效信息进行相关问题的解答。3牛肉膏、蛋白胨 X 下降 不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的细菌能够增殖 稀释涂布平板法 能量 合成其他物质的原料 【解析】【分析】（1）实验室中目的菌株的筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。（2）常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。（3）培养基的成分主要是水、无机盐、碳源、氮源。【详解】（1）在号培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，故提供氮源的是牛肉膏、蛋白胨，、号培养基是以有机物X为唯一碳源的选择培养基。（2）号培养基是以有机物X为唯一碳源的选择培养基，故只有能利用有机物X的微生物才能存活，而其他微生物由于不能降解X的细菌因缺少碳源而不能增殖，其比例会下降。（3）要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是稀释涂布平板法。（4）该菌能将X代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙酮酸可进行有氧呼吸，为该菌的生长提供能量和合成其他物质的原料。【点睛】易错点：在实验室中培养菌类的必要条件是有适合的环境，需要人工提供氮源，例如在1号培养基中加入的牛肉膏和蛋白胨就是氮源。4无菌水 稀释涂布平板（或平板划线） 絮凝率最高 培养基成分对高岭土悬液絮凝效果的干扰 起主要絮凝作用的是菌体释放到发酵上清液中的物质 pH为7，投加量为1 ml 4 mL微生物絮凝剂下测得的最适pH不一定是该菌生活的最适pH，应该是各组pH下均设系列投放量，或各组投放量下均设系列pH或ii实验中加入不同剂量的微生物絮凝剂导致各组实验的液体总量存在差异 【解析】【分析】1、纯化细菌或真菌的方法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。2、分析图1，絮凝率从大到小依次是：上清液菌体细胞壁悬液菌体细胞内液培养基，其中D组的作用是排除培养基成分对高岭土悬液絮凝效果的干扰，实验结果表明起主要絮凝作用的是菌体释放到发酵上清液中的物质。3、向生活污水中加入4 mL微生物絮凝剂，均分为多组，pH值分别调到19，将温度设定为该菌最适生活温度30，培养后取样测定COD去除率，结果如图2，pH为7时，对COD的去除率最高。低于7或高于7，去除率都降低。4、调节生活污水pH值为7，均分为多组，分别加入不同剂量的微生物絮凝剂，将温度设定为30，培养后取样测定COD去除率，结果见图3，投加量为1 ml，对COD的去除率最高，但投加入不同剂量的微生物絮凝剂比未投加的对COD的去除率高。【详解】据微生物培养的原理和过程：（1）将取自玉米地的土壤，加入无菌水制成菌液，将菌液接种到培养基中进行富集培养，再通过稀释涂布平板法或平板划线法接种到固体培养基。（2）由于本实验筛选的是微生物絮凝剂产生菌，在测定初选菌落对高岭土悬液的絮凝效果，挑选出絮凝率最高的菌株。（3）由图1可知，其中D组只含培养基，作用是排除培养基成分对高岭土悬液絮凝效果的干扰；絮凝率从大到小依次是：上清液菌体细胞壁悬液菌体细胞内液培养基，表明起主要絮凝作用的是菌体释放到发酵上清液中的物质。（4）由结果可知，COD去除效果最佳的条件是pH为7和投放量为1mL时。上述实验结论不严谨，因为4 mL微生物絮凝剂下测得的最适pH不一定是该菌生活的最适pH，因此可将实验改进为在各组pH下均设系列投放量，或各组投放量下均设系列pH或ii实验中加入不同剂量的微生物絮凝剂导致各组实验的液体总量存在差异。【点睛】分析题图，结合生物实验原则，判断或推测实验的方案设计意图及合理性、科学性，是解题的关键。5碳源 选择 高压蒸汽灭菌 99ml无菌水 估算值 BCD（全对才得分） 【解析】【分析】培养基一般含有水、碳源、氮源、无机盐等。常用的接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法。常用的灭菌方法：干热灭菌法、灼烧灭菌法、高压蒸汽灭菌法。【详解】（1）甲培养基中加入联苯作为碳源用于培养联苯降解菌，属于选择培养基，只有能利用联苯的微生物才能存活，对培养基应该进行高压蒸汽灭菌处理。（2）乙为液体培养基，要对培养基乙中培养液稀释100倍需要取培养液1mL加入到99ml无菌水中处理之后进行显微计数，由此可以估算出培养基乙中联苯降解菌的数量，是估算值。（3）A、接种环正在酒精灯火焰旁进行接种，A错误；B、接种后的平板需倒置培养，避免污染，B正确；C、该接种方法为平板划线法，可得到单个菌落，C正确；D、酒精灯提供了局部无菌环境，D正确。故选BCD。【点睛】用稀释涂布平板法统计菌落数时，由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。6碳源、氮源 维生素 稀释涂布平板法 6 敏感 耐药性 【解析】【试题分析】本题考查了微生物的分离与培养的有关知识，要求考生识记培养基的成分，掌握培养基配置的步骤，结合题图信息确定酸奶样品稀释的倍数，然后根据所学知识对各小题进行分析作答。分析图解可知，图示过程为微生物分离与纯化过程中的稀释涂布平板法，即将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。（1）配制的细菌培养基都含有水、碳源、氮源和无机盐等主要营养成分，此外，在培养乳酸菌的培养基中还应加人适量的维生素，以满足乳酸菌特殊的应用需求，琼脂可作为凝固剂。（2）图1中过程表示系列稀释操作，则过程应表示涂布平板操作，过程所示的接种方法为稀释涂布平板法；分析图解可知，图中酸奶样品总共稀释105倍，并且稀释涂布平板时只取了0.1ml，而已知乳酸菌的数量单位是个/mL，所以这里的n6。（3）根据题意可知，取乳酸菌单菌落适当稀释，接种于含适量螺旋霉素的固体培养基表面，在适宜条件下培养一段时间后，培养基上只出现了两个菌落，说明该种乳酸菌对螺旋霉素敏感；这两个菌落在含有螺旋霉素的培养基中仍能生长，在排除杂菌污染的情况下，说明这两个菌落是对螺旋霉素具有耐药性的，即螺旋霉素对乳酸菌的耐药性进行了选择。7微生物细胞和一部分芽孢 巴氏消毒法 消毒 损伤DNA的结构 石炭酸或煤酚皂溶液 干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰 【解析】【分析】1、无菌技术的主要内容对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。2、消毒和灭菌 消毒灭菌概念使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）常用方法煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌适用对象操作空间、某些液体、双手等接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等【详解】（1）消毒是使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子），日常生活中常用煮沸消毒法，在100煮沸6min可以杀死微生物细胞和一部分芽孢；牛奶一般使用巴氏消毒法消毒，与煮沸消毒法相比，巴氏消毒法或高温瞬时消毒法在较低温度下，既可以杀死病菌，又能保持物品中营养物质风味不变。（2）微生物培养中，需要对培养基和所用器具进行灭菌，操作者的双手需要进行清洗和消毒；静止空气中密闭空间内的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能损伤DNA的结构；在照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液可加强消毒效果。（3）在微生物培养中，培养基的配制和无菌技术非常关键，对玻璃器皿一般采用干热灭菌法灭菌；配制好的培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌；无菌技术要求实验操作如接种等在酒精灯火焰附近进行，可以防止操作过程中杂菌污染。【点睛】易错点：注意区分灭菌或消毒，微生物实验室培养过程中，不同的物体选择不同的方法消毒或灭菌，要考虑到物体的耐受能力。8化合物A 选择 氮源和碳源 有氧呼吸 外来杂菌 接种环 灼烧 减少实验误差，确保实验结果的准确性 【解析】【分析】筛选目的菌，可根据所培养微生物的代谢特点配制选择培养基，并提供该微生物生长、繁殖所需要的适宜条件。【详解】（1）筛选能高效降解化合物A的细菌，可在培养基中加入有害的化合物A，其他微生物无法在该培养基上繁殖，这种培养基按功能划分属于选择培养基。（2）化合物A含碳元素和氮元素，能为“目的菌”提供生长所需的碳源和氮源。振荡培养可以增加培养液中的溶氧量，由此推测“目的菌”进行有氧呼吸。（3）筛选能高效降解化合物A的细菌，获得纯净“目的菌”的关键是防止外来杂菌的入侵。（4）转为固体培养基时，常采用平板划线的方法进行分离，此过程中常用接种环接种，接种环为金属制品，常采用灼烧灭菌。（5）进行稀释涂布平板法分离、计数，每种稀释液设置3个培养皿进行重复实验，实验数据取3各培养皿的平均值，可以减少实验误差，确保实验结果的准确性。【点睛】消毒和灭菌的比较项目条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属工具高压蒸汽灭菌法培养基及容器的灭菌9氮源、无机盐 琼脂 称量、溶化、灭菌、倒平板 前 高压蒸汽灭菌 选择 稀释涂布平板法 菌落数 A 【解析】【分析】分析图示可知：图中首先用稀释涂布平板法分离细菌，之后运用“影印法”将菌种分别接种到基本培养基与完全培养基中培养。氨基酸缺陷型菌株在基本培养基中不能生长，但在完全培养基中可以生长，所以图示过程可以筛选出氨基酸缺陷型菌株。【详解】(1) 微生物生长需要的营养物质有水、无机盐、碳源、氮源等。图示的培养基上均长出了菌落，说明是固体培养基。制备固体培养基需要加入凝固剂，琼脂是常见的凝固剂。(2) 制备培养基的基本步骤一般包括：计算称量溶化灭菌倒平板。若需要调节pH值，则应在灭菌之前进行，以防止杂菌污染。常采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。(3) 图示过程可最终筛选出“某种氨基酸缺陷型菌株”，说明图中的基本培养基属于选择培养基。过程的操作使菌落在培养基中均匀分布，说明所使用的接种方法为稀释涂布平板法。用稀释涂布平板法进行微生物计数时，统计结果一般用菌落数来表示。(4) 比较基本培养基与完全培养基中的菌落可知：菌落A为“某种氨基酸缺陷型菌株”，因此应挑选菌落A继续接种培养，并进一步鉴定。【点睛】解答本题的关键是理清培养基的营养与类型及用途，识记和理解实验室微生物的纯化培养的方法、平板培养基配制的基本流程与无菌技术、微生物的分离与计数等相关知识。在此基础上，从题意和图示中提取有效信息，结合问题情境对各问题进行分析解答。10氮源 固体 高压蒸汽 芽孢和孢子 稀释涂布平板法 无氧 抑菌能力的强弱 LsAF7 大肠杆菌 A 空腹 【解析】【分析】培养基的基本成分：水、无机盐、碳源、氮源及特殊生长因子；无菌操作包括灭菌和消毒两种方式，消毒的方法有巴氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法，灭菌的方法有干热灭菌、灼烧灭菌和高压蒸汽灭菌；微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，常用来统计样品活菌数目的方法是稀释涂布平板法。根据表格分析，该实验的自变量是乳酸菌的种类和细菌的种类，由实验结果可知，不同的乳酸菌对粪肠球菌的抑菌效果都比较突出，其中LsAF7的抑菌效果最明显。【详解】（1）乳酸杆菌等微生物的培养基中都应该含有水、无机盐、碳源、氮源等物质；菌落是在固体培养基上形成的；微生物的培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌处理，以杀死培养基中的所有的微生物，包括芽孢和孢子。（2）微生物常见的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，其中后者可以用于菌种的计数；乳酸菌是厌氧菌，所以接种后必须置于适宜温度及无氧条件下培养。（3）表格中抑菌圈的大小代表了乳酸菌抑菌能力的强弱，抑菌圈越大，其抑菌能力越强。结合表格数据可知，对粪肠球菌抑制作用最强的是LsAF7菌株，乳酸杆菌对大肠杆菌的抑制能力最弱。（4）人工胃液适宜采用过滤方法除菌，A正确；干热灭菌不适宜由于液体的灭菌，B错误；人工胃液是液体状态的，不能进行灼烧灭菌，C错误；高压蒸汽灭菌会破坏人工胃液中的胃蛋白酶的空间结构，使其丧失活性，D错误。根据题意分析，胃液pH值在空腹时可低至1.5，正常饮食后胃液pH为3.0-5.0，而乳酸杆菌在pH为2.0的人工胃液中处理2h后的存活率几乎为0，而在pH为3.0的人工胃液中处理2 h后的存活率为86.65%，说明含有乳酸杆菌的酸奶不能在空腹时使用，否则会导致乳酸杆菌全部死亡。【点睛】解答本题的关键是了解微生物培养基的成分、无菌操作、接种方法等知识点，能够根据表格内容找出实验的自变量和因变量，明确抑菌圈直径越大，则乳酸菌对细菌的抑制作用越强，进而分不同的析乳酸菌对不同细菌抑制能力的大小。11选择 以尿素为唯一的氮源 琼脂 稀释涂布平板法 D 酚红 红 【解析】【分析】微生物的营养物质主要包括体液、氮源、水和二氧化碳等；分离和纯化微生物的接种方法主要有稀释涂布平板法和平板划线法；尿素分解菌可以用酚红指示剂进行鉴定。【详解】（1）根据表格分析，该培养基以尿素为唯一氮源，属于选择培养基，只允许分解尿素的细菌生长，而其他微生物不能生长。（2）菌落的分离和计数应该用固体培养基，因此上述培养基中还应该加凝固剂琼脂；微生物常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法，两者都可以用于菌种的分离，而后者还可以用于菌种的计数，因此计数时应该常用稀释涂布平板法，图中A、B、C都是该方法，而D是平板划线法。（3）土壤中分解尿素的细菌体内的脲酶能够将尿素分解为氨和水，氨可以与酚红指示剂发生反应而呈红色，所以鉴定该菌可以在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，说明该菌能够分解尿素。【点睛】以题干中“培养基的配方”为切入点，结合(1)(3)的问题情境并围绕“微生物的实验室”培养的基础知识展开联想，对(1)(3)题进行分析作答。12将聚在一起的微生物分散成单个细胞，从而在培养基上形成单个菌落（或培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌） 30300 以尿素作为唯一氮源 形状 大小 5.0O107个 偏低 因为两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 分解尿素的细菌能(合成脲酶)将尿素分解成氨，使培养基碱性增强，酚酞指示剂变红 【解析】【分析】统计菌落数目的方法（1）显微镜直接计数法原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；方法：用计数板计数； 缺点：不能区分死菌与活菌。（2）间接计数法（活菌计数法）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。操作a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性。b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。计算公式：每克样品中的菌株数=（cV）M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。【详解】（1）涂布培养前需要梯度稀释，其目的是将聚在一起的微生物分散成单个细胞，从而在培