口服避孕药对多囊卵巢综合征中GDF9的影响.doc

口服避孕药对多囊卵巢综合征中GDF9的影响作者：郭燕红,甄秀丽,张娜,郭丽娜,吕翠婷,贾单位：050011 河北省石家庄市第四医院(郭燕红)；河北医科大学第四医院生殖医学科(甄秀丽、张娜、郭丽娜、吕翠婷、贾新转、刘复权)【关键词】 避孕药，口服；多囊卵巢综合征多囊卵巢综合征(PCOS)主要合并雄激素增高，临床常用口服避孕药达英35降低雄激素后促排卵，使PCOS患者妊娠。为探讨口服达英35后GDF9在PCOS卵巢表达如何，笔者进行本研究。 1 材料与方法 1.1 实验动物 85 d龄左右雌性SD大鼠55只，随机分成2组，A组35只，B组20只。A组利用Poretsy法制成大鼠PCOS模型，B组为正常对照组。A组随机分为2组，其中C组18只、D组17只。C组口服避孕药达英-35，D组口服安慰剂。 1.2 免疫组织化学采用SP方法 (生物素链霉卵白素过氧化酶系统)。结果判定：以背景清晰、细胞质着色呈棕黄色为阳性，据阳性颗粒的强度及阳性细胞的比例进行判断，分为、(<25%)、(25%50%)、(>50%) 4个等级。总阳性率为(+、+、+)之和。 1.3 流式细胞术(FCM)检测条件 采用美国Beckman Coulter公司生产的流式细胞仪EpicsXL 型，激发光源为15 mW氩离子激光器，激发波长为488 nm，应用Expo32ADC软件进行免疫荧光数据分析。检测前以flowcheck TMF luorpheres(10 μm)荧光微球(REF 6605359 Coulter, Inc. Fullerton, CA 92835)作为标准样品调整仪器CV值在2%以内。GDF9的FCM定量分析：蛋白的相对含量以Xmode均值荧光强度表示，公式为：lg(Xmode)×340=线性值均值。 1.4 统计学分析 应用SPSS 11.5统计软件进行统计学分析。计量资料以±s表示，组间比较采用t检验。计数资料采用χ2检验，P0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 GDF9在颗粒细胞和卵泡膜细胞中的表达 GDF9在A组颗粒细胞表达低于B组(P<0.05)。GDF9在A组卵泡膜细胞表达高于B组(P<0.05)。见表1。 2.2 GDF9在卵巢中的表达 GDF9在A组表达量为15±10，明显低于B组的46±24(P0.01)。 2.3 口服避孕药达英35后GDF9在颗粒细胞和卵泡膜细胞中的表达 A组GDF9在卵泡膜细胞表达低于B组卵泡膜细胞表达(P<0.05)，在颗粒细胞表达与B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。表1 2组GDF9在颗粒细胞和卵泡膜细胞中的表达例注：与B组比较，P0.05表2 2组用药后GDF9在核粒细胞和卵泡膜细胞的表达注：与D组比较，P0.05 3 讨论 作为主要由卵巢分泌的细胞因子，GDF9对卵母细胞的生长、有丝分裂，颗粒细胞的增殖及卵泡膜层的形成，对雌、孕、雄激素的合成具有重要作用，与FSH协同刺激卵泡的生长，故其在卵泡发育，尤其是较早期卵泡发育过程中所起的作用是必不可少的。在对人的卵泡培养中，GDF9能更明显地促进卵泡膜细胞的增生，卵泡膜细胞对GDF9比较敏感，表明其可能是GDF9的原始靶点1。故缺失GDF9可导致卵泡膜形成缺陷。 Teixeira等2采用原位杂交方法研究，表明正常女性GDF9 mRNA从卵泡募集之初的始基卵泡卵母细胞开始表达，随着卵泡的发育稳步增高，至排卵前卵泡的卵母细胞维持较高水平，而PCOS、多囊卵巢(PCO)的妇女卵巢中GDF9 mRNA表达却直到初级/次级卵泡转化阶段才出现，并均低于正常女性同期阶段的卵母细胞GDF9 mRNA的表达水平，表明在PCOS、PCO女性卵母细胞生长及分化阶段GDF9 mRNA表达被推迟或减少，故认为卵母细胞GDF9 mRNA表达调节障碍可能促使PCOS、PCO女性卵泡发生异常。 在人的增殖期颗粒细胞和卵泡膜细胞，GDF9通过阻断StAR、P450scc及P450芳香化酶mRNA的cAMP依赖性表达而抑制类固醇产生，减少孕激素合成。含有GDF9的人卵泡膜细胞能阻断Forskolin刺激的孕激素、17α羟孕酮和脱氢表雄酮的合成。表明GDF9在卵泡类固醇生成，特别是卵泡膜细胞功能方面具有调节作用1。 本实验免疫组化发现，GDF9在A组卵泡膜细胞表达高于B组(P0.05)，卵泡膜细胞合成的雄激素透过基膜进入颗粒细胞，在芳香化酶系的作用下雄激素转变为雌激素。在PCOS卵巢中，卵泡膜细胞增生，颗粒细胞数量减少伴其功能不足，导致雄激素相对过多。口服避孕药达英35后GDF9在A组颗粒细胞的表达未见明显改变，在卵泡膜细胞的表达明显低于D组。可能是由于口服避孕药达英35后，体内雄激素明显降低抑制GDF9的表达。其机制有待于进一步研究。 阐明GDF9在正常人类卵巢中的分子生物学机制，明确其调节卵泡发育的信号传导机制等将有助于更深入了解卵巢的内分泌功能，进一步探讨GDF9与卵巢早衰(prematare ovarian failure,POF)、PCOS等卵泡发育异常疾病间的关系，更好地阐明这些疾病的发病机制，寻求有效的治疗方法。【参考文献】 1 Yamamoto N, Christenson LK, Mcallister JM, et al. Growth differentiation factor9 inhibits 3’5’adenosine monopho sphate stimulated steroidogenesis in human granulose and theca cells. J Clin Endicrinol Metab, 2002,87:28492856.2 Teixeira Filho FL, Baracat EC, Lee TH, et al. Aberrant expression of growth differentiation factor9 in oocytes