幽门螺旋杆菌感染有哪些检测方法.doc

幽门螺旋杆菌感染有哪些检测方法(2003-04-10 16:07:08)幽门螺旋杆菌感染的检查方法很多，主要包括细菌的直接检查、尿毒酶活性测定、免疫学检测及聚合酶链反应等方法。(1)细菌的直接检查：是指通过胃镜检查钳取胃粘膜(多为胃窦粘膜)作直接涂片、染色，组织切片染色及细菌培养来检测HP。其中胃粘膜细菌培养是诊断HP最可靠的方法，可作为验证其他诊断性试验的“金标准”，同时又能进行药敏试验，指导临床选用药物。 (2)尿毒酶检查：因为HP是人胃内唯一能够产生大量尿毒酶的细菌，故可通过检测尿毒酶来诊断HP感染。尿毒酶分解胃内尿毒生成氨和二氧化碳，使尿素浓度降低、氨浓度升高。基于此原理已发展了多种检测方法：胃活检组织尿毒酶试验；呼吸试验；胃液尿素或尿素氮测定；15N-尿素试验。 (3)免疫学检测：目前已有多种免疫学检测方法，通过测定血清中的HP抗体来检测HP感染，包括补体结合试验、凝集试验、被动血凝测定、免疫印迹技术和酶联合吸附测定(ELISA)等。 (4)聚合酶链反应技术：正常胃粘膜很少检出HP(06%)，慢性胃炎患者HP的检出率很高，约50%80%，慢性活动性胃炎患者HP检出率则更高，达90%以上。金标法快速胃幽门螺旋杆菌(H.Pylori)抗体检测发布时间:02年08月28日 11:51一、应用范围 -ABI公司的SureStep(H.Pylori)快速诊断检测盒直接用于体外定性检测人体血清、血浆或全血中胃幽门螺旋杆菌的特异性抗体。本检测盒用于辅助诊断有胃病症状的病例人是否感染了胃幽门螺旋杆菌，此检测盒仅供临床实验室用，仅用于体外诊断。二、检测原理-ABI SureStep胃幽门螺旋杆菌检测盒是利用免疫层析技术定性检测人血清、血浆或全血中抗胃幽门螺旋杆菌抗体。在检测条硝酸纤维薄膜的测试区上包被有胃幽门螺旋杆菌抗原。对照区标有胃幽门螺旋杆特异性单克隆抗体。在样品端的反应垫上吸附有抗原胶体金颗粒。检测时，加入的样品首先与包被H.Pylori抗原的胶体混匀，并因毛细管作用沿膜向检测区移动。当病人样品中含有胃幽门螺旋杆菌特异性抗体时，即与T线上的抗原-抗体-抗原胶体金颗粒复合物。并显示出红线。检测区不出现颜色带，表明阴性结果。对照区总会有一条色带形成，该色带出现表明检测及操作系统工作正常。三、试剂与材料w检测盒：由包被有胃幽门螺旋杆菌抗原的硝酸纤维薄膜和吸附有抗原胶体金颗粒的反应板组成。w缓冲液(8ml)：0.05Mtris缓冲盐及0.1%叠氮钠。w一次性吸管w说明书四、保存条件-未启封的检测盒可在室温(15-30摄氏度)或者在冰箱内(2-8摄氏度)保存至其有效期。五、注意事项：1、仅使用于体外诊断。2、所有样品和对照液均作为传染物品处理。3、缓冲液及对照液内含有的叠氮钠、有潜在金属氮物的爆炸可能。当处理这些溶液时，应用大量的清水冲洗。4、勿将不同批号的试剂混用，检测盒过期请勿使用。5、在未准备进行测试时请勿打开密封袋。6、超过3天的全血样品请勿再使用。7、加热处理过及污染的血样有可能导致错误的结果。六、样品收集和制备：指尖采血：1、用酒精棉清洁采血部位。2、挤压指端使其充血，然后用消毒针头取血。3、用消毒布或棉签擦去第一点血。4、让第二点血直接滴入加样孔内，或用尖吸管吸取40ul以上的新鲜全血。往加样孔中垂直滴加2滴。全血：1、根据标准实验操作规程，由静脉抽取全血，将全血样品加入有抗凝剂（EDTA，枸橼酸及肝素，均可作为本实验抗凝剂）样品收集管中。2、全血应立即检测或保存在2-8下，但不得超过3天。血浆：1、根据标准实验操作规程，由静脉抽取全血，将全血样品加入有抗凝剂（EDTA，枸橼酸盐及肝素，均可作为本实验抗凝剂）样品收集管中。2、离心分离血浆。3、小心将血清吸出。血浆可直接用于检测，或在2-8冰箱内存放2周，也可在-20冰柜中冷冻至一年。血清：1、标准实验操作规程，由静脉抽取全血，将全血样品加入不含有抗凝剂的样品收集管中。2、等待全血凝固，室温静置30分钟。3、离心分离血清。4、小心将血清吸出。血清可直接用于检测，或在2-8冰箱内存放2周，也可在-20冰柜中冷冻至一年。七、检测步骤：1、测试前，将检测盒、缓冲液、患者样品及阴阳性对照液恢复至室温（20-30）。2、待一切准备就绪之后再打开检测盒的密封袋。标明患者姓名或对照。3、加样：（1）血清或血浆样品：用所提供的吸管往加样孔内垂直滴加1滴（大约20ul）血清或血浆，或者使用定量加样器滴加20ul血清或血浆。（2）全血样品：用吸管往加样孔内垂直滴加2滴（大约40ul）全血，或者使用定时加样器滴加40ul全血。（3）指尖血样品：用吸管吸取至少40ul的全血，往加样孔内垂直滴加2滴新鲜全血。4、然后加入3-4滴缓冲液。5、计时、观察结果。5分钟读结果。强阳性结果可能会在反应不久出现。请勿在8分钟之后读结果。八、 结果判断：1、 阴性结果：仅在对照区（C）有一条红线，检测区（T）无红线出现。2、 阳性结果：除对照线区外，另有一条红线在检测区（T）出现。对于强阳性样品，对照线C可能会较淡。3、 无效结果：对照区出现线红，则结果无效。可能由于不正确操作、检测系统失效或试剂变质而引起UBT：呼气中测出HP李天舒 汪言安自从1982年4月澳洲的马歇尔（Marshall）医师由胃炎病人的胃部切片分离出幽门螺旋杆菌（以下简称HP）以来，目前医学界已证实 HP是引起胃黏膜内发炎（胃炎）和十二指肠溃疡或胃溃疡的罪魁祸首，同时是胃癌的重要诱因之一。有关统计数据足以说明幽门螺旋杆菌感染率与胃肠疾病是一对孪生兄弟：胃炎患者中100伴有HP感染；胃溃疡80；十二指肠溃疡95；胃淋巴瘤80；胃癌90。研究还显示如果在儿童时期即感染HP，则较有可能演变成胃癌；成人被感染后，细菌聚居在前庭幽门部，造成慢性胃炎以及十二指肠溃疡或者胃溃疡。联合国卫生组织已将幽门螺旋杆菌定为一级致癌物。 由于幽门螺旋杆菌在胃肠疾病中的重要性被发现，消化性溃疡的致病成因理论也起了重大改变，从以往认为“无酸即无溃疡”的传统治疗观，到现在的“无HP即可能无溃疡”的现代治疗观。正因为如此，在临床上，有消化性溃疡、消化不良、胃淋巴瘤的患者，以及有胃癌家族史的公众，医院会建议其检查是否有幽门螺旋杆菌感染，以便早期发现，早期治疗。因此，医生的诊断治疗离不开对HP的精确检测，一些发达国家的医疗机构也将HP检测作为防癌的重点项目之一。 其次，国内外的文献报告显示十二指肠溃疡并幽门螺旋杆菌感染的病人，不论使用何种治疗方法，如果在治愈溃疡同时也根除HP，则在一年以上长期追踪发现溃疡复发率不到21。然而没有根除HP的病人，溃疡的复发率则高达33到85，所以消化性溃疡（包括十二指肠溃疡及胃溃疡）的治疗除了要注意溃疡愈合与否，还要确认HP是否已经消除，这也对HP的检测提出了更高的要求。 近日，广州金域医学检验中心发起的“广东省消化性疾病和幽门螺旋杆菌报告会”上，台湾胃肠科专家何爱生、广州医学院第二附属医院内科主任赵英衡等就“消化性溃疡与幽门螺旋杆菌”专题，探讨了最新的幽门螺旋杆菌检测技术碳13尿素呼气法（UBT）在临床检验中的优势以及检测幽门螺旋杆菌感染的重要性。 据了解，目前幽门螺旋杆菌的诊断可分为二大类，一类是侵袭性的检查法，另一类为非侵袭性的检测方法。从幽门螺旋杆菌强致病特点的发现至今的20年里，HP感染诊断的方法中最常见的有ELISA检验H P抗原法、ELISA检测IgG血清学抗体法、胃镜检测法、碳14呼气试验法以及新一代的碳13呼气试验法等。侵袭性的检查法是经由胃镜取胃黏膜做病理学检查及细菌培养。这种方法最大的好处是可以做种种检测确认培养出来的细菌就是幽门螺旋杆菌，而且可以分析个别菌株毒性强弱及对抗生素抗药性的有无，对使用哪一种杀菌药物组合的选择有很强的指导意义，另外更可以在胃镜检查时，查看胃内是否有其他的病变如胃癌、胃淋巴瘤等。但是胃镜缺点也是明显的，由于必须使用胃镜检查，属于轻微创伤性，有些病人有胃镜恐惧症而无法接受这样的检查。另一类的检测方法为非侵袭性，包括血清检查及尿素氮呼气试验。血清检查简单、便宜又快速，但准确性较低，而且即使幽门螺旋杆菌已被消除，血中的抗幽门螺旋杆菌抗体仍然会持续六个月以上甚至达到一年才会消失，所以血清检测没办法及时反应HP感染的情形。 尿素氮呼气试验是利用喝下试药而检测呼出气体中的某种成分而来检测HP存在与否，这是惟一不经胃镜检查而能正确检测HP的方法。通常HP会分泌许多酵素，其中的尿素酶（urease）可使尿素转化成氨，这些碱性的氨与胃酸中和，可保护HP免受胃酸的伤害。当患者服用特殊的试剂后，胃中的HP会分泌大量的尿素酵素，快速把尿素分解成氨及二氧化碳，全过程只需要20分钟，检查服用试剂前后呼气中二氧化碳含量的变化，即可发现有无HP感染，准确度高达96。这就是尿素氮呼气试验的简单原理。 近几年已经被人们普遍认知的碳14呼气法，相比较胃镜、血清学检查已有了长足的进步，但碳14有一定的放射性，对人体有害，针对这种放射性危害，我国国家药品监督管理局1999年7月23日还特意下发了“关于加强碳14尿素呼气实验药盒管理的通知”，要求碳14诊断药盒的研制、生产、经营、使用等要严格按照放射性药品管理办法的规定执行。放射性也成了碳14继续发展的“瓶颈”。正因为此，没有放射性的“碳13呼气法”应运而生，这项检测技术全称为“碳13尿素呼气法”，是目前全球最先进的一种属于非侵袭性检测HP的方法。何爱生医师是全球首位将碳13稳定同位素运用于人体实验的先驱者，临床上对每一种检测方法的检测原理、敏感性、特异性、可操作性等作了一次清晰的比较。目前，碳13呼气法在业内被广泛认为将是幽门螺旋杆菌检测的“首选方法”诺贝尔医学奖 - 胃幽门螺旋菌 - 公筷母勺诺贝尔医学奖 - 胃幽门螺旋菌 - 公筷母勺林 克二零零五年的诺贝尔医学奖颁发给澳大利亚的医生 贝瑞马歇尔 (Barry J. Marshall) 及病理学家 罗宾沃伦 (Robin Warren) 二人分享。他们的成就是发现并研究了生长在胃部的一种细菌叫”胃幽门螺旋杆菌”.胃幽门螺旋杆菌的学名叫 Helicobacter pylori.发现得较晚,是因为人们一直不相信细菌可以在高酸度胃液的恶劣环境中存活并且可以生长及为害胃部.因此胃幽门螺旋杆菌迟至 1979 年才被贝瑞马歇尔单独发现.中国人患胃病的特多,可能为世界之最.往往在与人会话的时侯会感觉到对方的呼吸中发出一阵带酸的臭气.这种气味尤其在空腹的时后为甚.这时你不妨问问他(她)，是不是胃不大好.十有九次,这人是为胃疾所苦.如果去做一下胃幽门螺旋杆菌血清检定,十个有九个的血清有胃幽门螺旋杆菌的阳性反应.胃幽门螺旋杆菌血清阳性反应的意义是该人以前曾经被胃幽门螺旋杆菌感染过,或是现在正为胃幽门螺旋杆菌感染之中.听听他们的诉苦吧,大多都说是工作压力太大,上司对他不好,老婆孩子太烦,等等等等,才有了胃溃疡或是这样那样的胃病.其实;这些都不是真正的原因.真正的原因是因为他的胃里有胃幽门螺旋杆菌在作祟. 胃幽门螺旋杆菌也可以用放射性同位素从人的呼吸中来测试,或由胃镜直接检查及割取生物活体的手段来诊断.有迹象显示,胃幽门螺旋杆菌与胃癌有牵连.而根据某些报导,中国人感染胃幽门螺旋杆菌者竟高达百分之五十!一旦确定自己有了胃幽门螺旋杆菌以后怎麽办呢?现在的疗法之一是用三种不同的抗生素连服十天到两星期.这种疗法可以根治极大部分患者(94% 以上).只有少数患者的细菌有抗药性,无法根治.有抗药性的患者要继续接受特别治疗.与其他的传染病不太一样.经过第一次胃幽门螺旋杆菌感染后,在血液中产生的抗体无法保证能抵抗第二次同类细菌的再度感染.因此;一旦治愈以后,平时饮食要特别注意,免得再感染.一旦再感染了,因为是第一次感染血清反应已经是阳性,所以就不能再由检查血清抗体的手段来诊断了.必需要用其它的手段诊断.虽然胃幽门螺旋杆菌的传染方式还在研究探索之中.但是有迹象显示主要是经由”口传口”,及”排泄物传口”的途径传染.由于口传口是主要途径之一,因此不能排除这种感染与中国人吃饭的习惯,大家用自己的筷子或自己的汤匙往同一个菜碗汤碗里夹菜喝汤有直接的关系.一个民族如果不能处理好吃饭与排泄这两件事,那麽不论它的 GDP 有多高,也不能 称为一个现代民族.而我们中华民族无论过去有多麽光辉的厉史与文化,但恰恰在这两件事上做得实在太差劲!除了排泄这件事不谈.光是吃饭,我们做得就不怎麽高明,甚至相当野蛮.我们中华文化中最值得骄傲的“食”文化其实有极多值得改进的地方.除了烹调的方法不合理,不科学,大有改进馀地之外,我们吃饭的习惯可能是全世界最不卫生,最野蛮的吃饭方式之一.其实海外其他地方的中国人如在北美,欧洲,澳洲,新加坡,一部分台湾,一部分香港的华人都早已习观了”公筷母勺”的吃饭方式,吃饭的时侯用”公筷母勺”来夹菜盛汤.”公筷母勺”不与食者的口接触,菜夹到了自己碗上再用自己的筷子夹到口中.即使一家人吃饭也是这样.国内的较大的宾馆里也有用这个方式吃饭的.但这一种吃饭的习惯还未能为国内大部分人所接受.在稍为偏僻的一些地方,甚至连听也没听说过.如果同桌吃饭,你一人如此吃法,非被人认为怪物不可.虽说是生活的习惯与经济发达的程度有不可分的密切关系,但是我认为这件事也可以反映出中华文化的”文化惰性”,与故步自封，不求改进,文化中缺乏了去陈布新的创造力,不能精益求精有直接的关系.中国人最乐道的事情之一莫不就是说中国是创造性的民族，日本是模仿性的民族。可是我们仔细盘点一下，