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第九章 分光光度法简介例1 将精制的纯品氯霉素(Mr=323.15)配成2.0010-2gL-1的溶液,在波长278nm处,用1.00cm吸收池测得溶液的吸光度A=0.614,试求氯霉素的摩尔吸光系数。解 将有关数据代入例2. 某遵守Lambert-Beer定律的溶液,当浓度为c1时,透光率为T1,当浓度为0.5 c1、2 c1时,在液层不变的情况下,相应的透光率分别为多少?何者最大?解 根据Beer定律 A= -lgT = kc当浓度为c1时 -lg T1= k c1当浓度为0.5 c1时 -lg T2= k c2 = k(0.5 c1) = 0.5(-lg T1) -lg T2= -lg (T1)1/2 T2= T11/2当浓度为2 c1时 -lg T3= k c3 = 2(k c1) = 2(-lg T1) T3= T12 0T1 T2为最大例3 某化合物,其相对分子质量Mr =125,摩尔吸光系数e = 2.5105Lmol-1cm-1,今欲准确配制该化合物溶液1 L,使其在稀释200倍后,于1.00cm吸收池中测得的吸光度A = 0.600,问应称取该化合物多少克?解 设应称取该化合物x克 A = ebc0.600=2.50105Lmol-1cm-1x = 0.0600g例4 为测定某试液铁含量,称0.4320g (NH4) Fe (SO4)212H2O溶于水配成50.00ml标准铁溶液,吸取此溶液4.00ml,加磺基水杨酸显色后,稀释成50.00ml,测得A = 0.408。取未知试液5.00ml稀释成25.00ml,再吸取稀释后试液4.00ml在上述相同条件下显色后,稀释成50.00ml,测得A = 0.413,试计算试样中的铁含量(gL-1)。解 (NH4) Fe (SO4)212H2O : Fe481.85 55.850.4320 x稀释后标准铁溶液浓度已知 As = 0.408, Ax = 0.413 设样品铁含量为cx故未知试液铁含量为:例5 未知相对分子质量的胺试样,通过用苦味酸(Mr = 229)处理后转化为胺苦味酸盐(1:1加成化合物)。当波长为380nm时,胺苦味酸盐在95%乙醇中的摩尔吸光系数为1.35104mol-1Lcm-1。现将0.0300g胺苦味酸盐溶于95%乙醇中,准确配制1.00 L溶液,在380nm,b = 1.00cm时,测得溶液吸光度A = 0.800,试计算未知胺的相对分子质量。解 设未知胺的相对分子质量为x 胺与苦味酸形成的胺苦味酸盐为1:1加成化合物 胺苦味酸盐的相对分子质量为(229+x)v = 1.00 L,M为229+x 代入0.800 = 1.35104mol-1Lcm-11.00cm229+x =506 x = 227一、判断题(对的打,错的打)1. 分光光度法灵敏度高,特别适用于常量组分的测定。 ( )2. 光照射有色溶液时,A与T的关系为lgT=A。 ( )3. 当某一波长的单色光照射某溶液时,若T=100%,说明该溶液对此波长的光无吸收。 ( )4. 符合Lambert-Beer定律的某有色溶液,其浓度越大,透光率越大。 ( )5. 如果吸收池的厚度增加1倍,则溶液的透光率将减少1倍。 ( )6. 吸光系数与入射光波长、溶剂及溶液浓度有关。 ( )7. e (max)只与物质的性质有关,是物质的特性常数。 ( )8. e 愈大,表明溶液对入射光愈易吸收,测定的灵敏度愈高。 ( )9. 一般e 值在103以上即可进行分光光度法测定。 ( )10. 吸收曲线的基本形状与浓度无关。 ( )二、选择题(将每题一个正确答案的标号选出)1下列叙述错误的是 ( )A. 光的能量与波长成反比 B. 物质对光的吸收有选择性C. 不同物质的吸收光谱不同,因此可根据吸收光谱进行定性分析D. 有色物质的颜色是其所吸收光的颜色E. 有色溶液越浓,对一定能量的光的吸收也越多。2在分光光度法中的吸光度A可表示为 ( )A. It/I0 B. lg(It/I0) C. I0/It D. lg(I0/It) E. lgT3关于Lambert-Beer定律,下述正确的是 ( )A. 该定律仅适用于可见光区的单色光。B. 该定律仅适用于有色物质的含量测定。C. 其他条件不变,溶液浓度改变,吸光度和吸光系数都会改变。D. 其他条件不变,入射光波长改变,吸光度和吸光系数都会改变。E. 其他条件不变,溶液厚度改变,吸光度和吸光系数都会改变。4下列哪种情况下,Lambert-Beer定律不能成立 ( )A. 入射光波长为260nm B. 溶液透明、均匀、无散射 C. 溶液中待测物质的浓度为1.0 molL-1D. 溶剂为甲醇 E. 溶液中吸光物质稳定。5某一有色溶液浓度为c,测得透光率为T0,把浓度稀释到原来的1/2,在同样条件下测得的透光率为( )A. 2T0 B. T0/2 C. T01/2 D. T02 E. T0 6吸光物质(Mr=180)的=6103,稀释10倍后,在1cm吸收池中测得的吸光度为0.30,则原溶液的质量浓度为 ( )A. 90mgL-1 B. 900 mgL-1 C. 9 mgL-1 D. 0.9 mgL-1 E. 0.0005 mgL-17将某波长的单色光通过厚度为1cm的溶液,则透射光强度为入射光强度的1/2,若该溶液厚度为2cm时,吸光度应为 ( )A. 0.151 B. 0.250 C. 0.301 D. 0.500 E. 0.6028用波长相同的单色光测定甲乙两个浓度不同的同一种有色物质,若甲溶液用厚度为1cm的吸收池,乙溶液用2cm的吸收池进行测定,结果吸光度相同,甲乙两溶液浓度的关系是 ( )A. 甲与乙浓度相等 B. 乙的浓度是甲的2倍 C. 甲的浓度是乙的1/4 D. 甲的浓度是乙的2倍 E. 乙的浓度是甲的1/49有一浓度为2.0010-4molL-1的有色溶液,在某一波长处,用3.00cm的吸收池测得其吸光度为0.120,将此溶液稀释一倍,在同样波长处于5.00cm的吸收池中测得其吸光度仍为0.120,则此溶液的吸光度与溶液浓度、液层厚度的关系 ( )A. 呈线性关系 B. 符合Beer定律,但不符合Lambert定律 C. 符合Lambert定律,但不符合Beer定律D. 不符合Lambert-Beer定律 E. 符合Lambert-Beer定律10在可见分光光度法中,影响吸光系数的因素是 ( )A. 入射光波长 B. 溶液浓度 C. 溶液厚度 D. 入射光强度 E. 吸收池大小11摩尔吸光系数与下列哪个因素无关 ( )A. 溶液的浓度 B. 溶液的性质 C.溶液的温度 D. 入射光波长 E. 溶剂性质12质量吸光系数a与摩尔吸光系数e的关系可用下式表示 ( )A. ae=1 B. a=e C. ae=M D. a=e M E. e=aM13下面说法正确的是 ( )A. 吸收光谱的基本形状与溶液的浓度无关 B. 吸收光谱与物质的特性无关C. 浓度愈大,吸光系数愈大 D. 其他因素一定时,吸光度值与测定波长成正比 E. 波长一定时,测定不同浓度溶液的A值可绘制吸收光谱曲线14符合Beer定律的某有色物质溶液,当其浓度改变时,其吸收光谱曲线上的最大吸收峰的位置将( )A. 向短波方向移动 B. 向长波方向移动 C. 不改变,但峰高度改变 D. 不改变,峰高度也不变 E. 改变,但峰高度不变15溶液偏离Beer定律的重要原因之一是 ( )A. 显色剂过量 B. 存在干扰物质 C. 仪器测量误差 D. 单色光不纯 E. 读数不准16关于选择max作入射光进行分光光度法测定的原因,下列叙述中不正确的是 ( )A. 在max处,单色光纯度最高 B. 在max处,e 最大C. 在max处的一个较小范围内,e 随波长的变化较小D. 在max处,溶液的A与c成直线关系E. 以max为入射光,测定的灵敏度最高17分光光度计显示透光率T(%)为0时,相应的吸光度A为 ( )A. 0 B. 100% C. D. I0 E. It18下面有关显色剂的叙述正确的是 ( )A. 能与被测物质生成稳定的有色物质B. 必须是本身有颜色的物质 C. 与被测物质的颜色互补D. 本身必须是无色试剂 E. 在测定波长处,应有明显吸收19分光光度法中使用试剂空白作对照的目的是 ( )A. 用以消除仪器测量误差B. 用以消除溶液偏离Beer定律引起的误差C. 用以消除单色光纯度差引起的误差D. 用以消除溶剂、显色剂等物质对入射光的吸收E. 用来掩蔽干扰离子20相同条件下,测得1.010-3molL-1标准溶液的透光率为50%,待测溶液的透光率为55%,则待测溶液的浓度为 ( )A. 1.210-3molL-1 B. 1.110-3molL-1 C. 1.010-3molL-1D. 8.610-4molL-1 E. 9.110-4molL-1三、填空题1. 分光光度法是根据物质的_光谱及光的_定律,对物质进行定性定量分析的一种方法。2. 可见分光光度计测定的波长范围为_,紫外分光光度计测定的波长范围为_。3. 以不同波长单色光作入射光测得的某一溶液吸光度作纵坐标,入射光的波长作横坐标作图,所得的曲线叫_。溶液浓度越大,吸收峰值_,最大吸收波长_。4. 朗伯-比尔定律只有在入射光为_时才适用。5. 为提高测定的准确度,溶液的吸光度读数范围应调节在_为好,可通过调节溶液的_和_来达到。6. 分光光度计是通过_ _来获得单色光的。7. 当空白溶液置入光路时,应使T=_, A=_ 。8. 吸光度A=0.30,则透光率T=_。当其他条件不变,而溶液浓度增大至原来2倍时,吸光度A=_, 透光率T=_。9. 某有色溶液,在一定波长下用1cm吸收池测得A=0.30。相同条件下,若用2cm吸收池测定,则A=_,T=_。10. 分光光度法中选择入射光波长的原则是 _。四、问答题1. 写出Lambert-Beer定律的数学表达式,简述各数学符号的物理意义。2. 列出构成分光光度计的主要部件(用方框图表示)。可见分光光度计与紫外分光光度计的玻璃元件有何不同?五、计算题1.在波长为520nm处,KMnO4(Mr=158.04)的摩尔吸光系数等于2235Lmol-1cm-1,问在此波长下,在2.00cm吸收池中,1.0010-2 gL-1的溶液的透光率为多少?2. 维生素D2在264nm处有最大吸收,e 264=1.84104 Lmol-1cm-1,Mr=397,称取维生素D2粗品0.8100g,配成1000ml溶液,从该溶液中吸取10.0ml,再稀释至1000ml,取稀释液在1.50cm吸收池中用264nm紫外光测得该溶液吸光度A=0.456,计算粗品中维生素D2的含量。3. 取2.00ml含2molL-1NH3的Cu2+溶液放入1.00cm的吸收池中。测得在某一确定波长的吸光度为0.60。然后取0.010 molL-1CuSO4溶液1.00ml添加到第一个吸收池中。再测得的吸光度为0.80。试指出第一个溶液中Cu2+的浓度为多少?答案:一、判断题1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 二、选择题1.D 2.C 3.D 4.C 5.C 6.A 7.E 8.D 9.D 10.A 11.A 12.E 13.A 14.C 15.D 16.A 17.C 18.A 19.B 20.D三、填空题1. 吸收; 吸收2. 380780nm; 200380nm3. 吸收曲线; 越大; 不变4. 单色光5. 0.20.7; 浓度; 选择厚度适当的吸收池6. 单色光器7. 100%; 0.008. 50%; 0.60; 25%9. 0.60; 25%10.

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