微生物初步鉴定程序.doc

1 读碟（该步骤初学者应经验丰富老师的带教下进行）：痰液：G+菌：BA生长、Choc（）、MecK（），Gram染色：分G+co ,G+ b G+co 依靠溶血特征，菌落形态、菌落颜色、菌体形态区分:葡萄球菌：淡黄色/白色，中等大小，较凸，规则圆形，/溶血，较湿润微球菌：黄色/白色，中等大小，较凸，规则圆形，不溶血，较干燥，不易乳化链球菌：白色、凸起小菌落，溶血为溶血型链球菌；灰白隆起中心扁平或凹陷，1.0-1.5mm大小的宽大溶血为肺炎链球菌；细如针尖，白色凸起溶血的为草绿色链球菌肠球菌：灰白，低凸，2.0mm左右之溶血菌落，较湿润费克蓝母菌：灰白凸起小菌落，0.5mm左右大小，/溶血，湿润易乳化口腔球菌：白色凸起较大菌落，不溶血，黏着，接种针挑之则整个菌落挑起，琼脂上不留痕迹 G+ b依靠溶血特征，菌落形态、菌落大小、菌体形态区分：棒状杆菌：白色1.0-1.5mm左右大小，较干燥，不溶血/狭窄溶血的为白喉或一般棒状杆菌；小而湿润，灰白/无色，半透明的为J-K棒状杆菌；灰白细小，溶血的可能为假结核、化脓放线菌、溶血分泌杆菌；芽孢杆菌：灰白大菌落，表面粗糙如毛玻璃状，宽大溶血BA生长、Choc生长、MecK（），Gram染色：G+co 平面球菌、藻球菌：血琼脂上为溶血，0.5-1.0mm大小，在Choc上呈现金属色泽G-菌：BA生长、Choc生长、MecK生长，Gram染色：G- b氧化酶、分科琼脂颜色 肠杆菌：氧化酶（），分科琼脂上黄色湿润大菌落 弧菌：氧化酶（+），分科琼脂上淡黄色干燥大菌落 非发酵菌：氧化酶（），分科琼脂上蓝色/无色透明小菌落鲍曼不动杆菌为中等大小，菌落聚集处产不扩散黄色色素，分离菌落为兰色BA生长、Choc生长、MecK（），Gram染色：G-co氧化酶（+）、触酶（+） 奈瑟菌：白色/黄色中等大小菌落， 卡他莫拉菌：白色小菌落（24h内），菌落有脆性，用接种环推之可移BA（）/细小、Choc生长、MecK（），Gram染色：G-b、菌体细小或呈扭曲之长丝状 嗜血杆菌：灰色/无色，半透明，1.5-2.0mm的多为流感嗜血杆菌；灰色略黄，不透明，1.0-1.5mm的多为副流感嗜血杆菌BA（）、Choc（）、MecK（）、BCYE-生长/或在含有L-半胱氨酸、铁离子、复合抗生素选择剂的强化血琼脂上生长Gram染色：G-b、菌体细、长丝状 军团菌：小菌落，灰色，较粘着真菌及奴卡菌：BA、Choc、分科琼脂、CHROMagar均生长Gram染色形态、生长速度 真菌：中等大小，生长快，多数可在CHROMagar上显色 奴卡菌：小菌落，生长慢，菌落皱褶，呈颗粒状，有时产生褐色、黄色、黑色等色素肺炎支原体：固体培养基上，低倍镜或解剖显微镜下为典型“荷包蛋”样菌落，在Hayflick双相培养基的液体中使培养基变黄。大便：沙门菌：SS:中心黑色之乳糖阴性菌落（亚利桑拉群可以为阳性）,SMC: 无色透明菌落志贺菌：SS、SMC均为无色透明之乳糖阴性菌落O-157大肠埃希菌：SS：为红色乳糖阳性菌落，SMC为无色透明之山梨醇阴性菌落 其他致病性大肠埃希菌多数为：SS、SMC均为红色 其中A-D大肠埃希菌在SS上可能为无色菌落霍乱弧菌：SS：无色菌落，TCBS：黄色大菌落 其他弧菌：SS、TCBS均为无色或淡绿色菌落小肠结肠耶尔森菌：SS为无色小菌落，SMC为红色牛眼状小菌落气单胞菌：所有气单胞菌转种血琼脂均呈现溶血嗜水气单胞菌，SS红色菌落，TCBS为黄色，SMC无色之大菌落 其他气单胞菌：SS无色菌落，TCBS为黄色，SMC无色之大菌落邻单胞菌：SS、TCBS及SMC均为无色菌落尿液: 肠杆菌、非发酵菌、弧菌，葡萄球菌、肠球菌、参照痰液读碟方法；J-K棒状杆菌：小而湿润，灰白/无色，半透明，生长慢；真菌：中等大小，生长快，多数可在CHROMagar上显色支原体：固体培养基上，低倍镜或解剖显微镜下为典型“荷包蛋”样菌落 解脲支原体：含尿素和酚红的支原体液体培养基中使培养基变红； 人型支原体: 含精氨酸和酚红的支原体液体培养基中使培养基变红；各种生殖道标本：肠杆菌、非发酵菌，葡萄球菌、肠球菌、无乳链球菌参照痰液读碟方法；真菌：中等大小，生长快，多数可在CHROMagar上显色；支原体：固体培养基上，低倍镜或解剖显微镜下为典型“荷包蛋”样菌落 解脲支原体：含尿素和酚红的支原体液体培养基中使培养基变红；人型支原体: 含精氨酸和酚红的支原体液体培养基中使培养基变红；淋病奈瑟菌：在GC培养基上为灰/灰白半透明小菌落，非常湿润；在强化血琼脂上为灰白凸起，不溶血，有银色光泽1.0-2.0大小的菌落；阴道加德纳尔菌：GC培养基上不生长，强化血琼脂上无色/灰白，细小，狭窄溶血的菌落，生长缓慢，多数需48h才能形成明显小菌落。脑脊液：肠杆菌、非发酵菌、弧菌，葡萄球菌、肠球菌、链球菌、G+b、卡他莫拉菌、嗜血杆菌、奴卡菌等参照痰液读碟方法；真菌：中等大小，生长快，多数可在CHROMagar上显色；新型隐球菌：BA上为白色，1.0mm左右大小圆形凸起菌落，不溶血，CHROMagar上不显色。肺炎支原体：固体培养基上，低倍镜或解剖显微镜下为典型“荷包蛋”样菌落，在Hayflick双相培养基的液体中使培养基变黄。脑膜炎奈瑟菌：BA上为无色透明，凸起，1.0-1.5mm左右大小的露滴状菌落，Choc（营养强化，含奈瑟菌选择剂）上为灰色有银色光泽的，半透明，凸起，1.5mm左右大小的湿润菌落；血、骨髓标本：先经过增菌后转种，肠杆菌、非发酵菌、弧菌，葡萄球菌、肠球菌、链球菌、G+b、卡他莫拉菌、嗜血杆菌等参照痰液读碟方法；真菌：中等大小，生长快，多数可在CHROMagar上显色；新型隐球菌：BA上为白色，1.0mm左右大小圆形凸起菌落，不溶血，CHROMagar上不显色。肺炎支原体：固体培养基上，低倍镜或解剖显微镜下为典型“荷包蛋”样菌落，在Hayflick双相培养基的液体中使培养基变黄。脑膜炎奈瑟菌：BA上为无色透明，凸起，1.0-1.5mm左右大小的露滴状菌落，Choc（营养强化，含奈瑟菌选择剂）上为灰色有银色光泽的，半透明，凸起，1.5mm左右大小的湿润菌落红斑丹毒丝菌：可形成两种菌落，光滑型细小、圆形突起、有光泽、易乳化；粗糙型菌落大，表面颗粒状、边缘如卷发样，微溶血。其他标本：参照以上标本的读碟方法。2 鉴定（在读碟的基础上进行） G+co： 触酶阳性、易乳化葡萄球菌：鸟氨酸、尿素、ONPG、硝还采用酶法4-6h观察记录结果；试管法凝固酶，分别于1h、4h、24h观察一次；蕈糖、甘露醇、甘露糖、麦芽糖、蔗糖、木糖； 触酶阳性、不易乳化微球菌：葡OF、七叶苷、精氨酸、硝还、枸橼酸盐、动力、7.5%高盐肉汤； 溶血性链球菌触酶阴性6.5%高盐肉汤、CAMP试验、杆菌肽、胆七、蕈糖、乳糖、棉子糖、甘露醇、山梨醇、七叶苷、菊糖（所有糖类均需加入血清）； 肺炎链球菌Optochin如果R，需加6.5%高盐肉汤、胆七、乳糖、棉子糖、甘露醇、山梨醇、菊糖（所有糖类均需加入血清），必要时作胆汁溶菌试验； D群链球菌及肠球菌触酶阴性6.5%高盐肉汤、胆七、精氨酸双水解、棉子糖、甘露醇、山梨醇、阿拉伯糖、蔗糖、动力； 口腔球菌触酶阴性/弱阳葡OF； 草绿色链球菌Optochin（R）6.5%高盐肉汤、胆七、棉子糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、七叶苷、尿素；触酶（+）棒状杆菌：硝还、尿素、七叶苷、明胶、动力、葡、麦、蔗、甘醇、木 G+ b：触酶（+）芽孢杆菌：动力、卵磷脂水解、甘露醇、木糖、青霉素酶触酶（+）李斯特菌：20动力、CAMP、甘露醇、木糖、鼠李糖、七叶苷触酶（）红斑丹毒丝菌：H2S、精氨酸水解、七叶苷、动力、蕈糖、阿拉伯糖 肠杆菌科：氧化酶（）、KIAGYZ15e、API 20E等鉴定系统；沙门菌、志贺菌、致病性大肠埃希菌需作血清学试验； 弧菌科：氧化酶（+）、KIAGYZ9v、API 20E、或按操作规程上的经典双歧图表法鉴定； 非发酵菌：氧化酶（）、KIAGYZ11n、15n、API 20N、或按操作规程上的经典双歧图表法鉴定； G-co:氧化酶（+）、触酶（+）DNase、硝还、酶法葡、麦、蔗、甘