甲基红,石蕊牛乳,明胶液化,淀粉水解,吲哚,柠檬酸盐利用,分解尿素产氨,.doc

部分生化试验：1、甲基红（M.R）试验M.R试验用于测定细菌分解葡萄糖产酸的程度。若所产生的酸是以降低pH值到4.5或更低，此时加入的甲基红指示剂呈红色。甲基红指示剂的变色范围为pH4.2（红色）-6.3（黄色）。培养基：葡萄糖蛋白胨水 蛋白胨 1g 磷酸氢二钾 1g 葡萄糖 1g 蒸馏水 200ml将上述各成分混合于蒸馏水中，加热溶解，调节pH至7.2，加热煮沸，待冷却后用滤纸过滤。分装试管，115灭菌20min。试剂：0.1g甲基红溶于300ml95%乙醇中，加蒸馏水至500ml即成。试验方法及结果：将纯种细菌接种葡萄糖蛋白胨水中，37培养2-7 d，以每5ml培养基滴加5-6滴甲基红指示剂，呈鲜红色者为阳性，呈橘黄色者为弱阳性，阴性反应者不变色。2、石蕊牛乳试验：牛奶中主要含有乳糖和酪蛋白，在其中加入石蕊是作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。石蕊是在中性时呈粉红色；碱性是呈蓝色；还原时，则自下而上使牛奶褪色还原成白色。乳酸细菌发酵乳糖产酸，石蕊变红，当酸度很高时，可使牛奶凝固。如试验菌产生蛋白酶，使酪蛋白分解，则使牛奶变得较澄清略透明，表明牛奶已胨化。培养基：脱脂乳粉100g溶于1000ml蒸馏水中。每100ml脱脂牛奶加入4ml浓度为25g/l（石蕊2.5g，100ml蒸馏水，放置一夜或更长时间，过滤）的石蕊牛奶。分装试管，牛奶高度4-5cm。113高压蒸汽灭菌15-20min。3、明胶液化试验：培养基：在营养肉汤中加入10-15%的明胶，调节pH至7.2,115高压灭菌20min。在装有营养明胶的试管中穿刺接种，于20-25培养30d（培养5-7d，每天观察一次）。若菌种在25生长不好，应将试管放置在最合适的温度下培养。结果记录：如果空白对照使馆仍是固态而测试培养基被液化，则表明发生了水解作用，记录下明胶液化的程度和形状。如果试管在高于25进行培养，在检查是否发生水解之前，要将培养物在冰水中浸泡5min。4、淀粉水解试验：培养基：可使用固体或液体培养基进行测试，使用淀粉琼脂培养基可能更为方便。淀粉琼脂培养基是在营养琼脂中加入0.2%（或0.5g）的可溶性淀粉组成。在最佳生长温度培养2-14d（1-2d）。试剂：用于革兰氏染色的革兰氏碘液。取培养液少许置于比色盘内，同时取未接种的培养液作为对照，分别在其中滴加卢格氏碘液。如不显色表示淀粉水解，显黑色或蓝紫色时，表示淀粉未水解或水解不完全。5、靛基质（吲哚）试验：原理：某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质。靛基质与试剂中的对二甲氨苯甲醛相作用，形成可见的红色化合物，及玫瑰吲哚。培养基：蛋白胨水蛋白胨 1g 氯化钠 0.5g 蒸馏水 100ml将上述成分混合于蒸馏水中，加热溶解。调整pH至7.6，加热煮沸待冷却过滤，分装试管，每管约3ml。15磅高压灭菌20min。试剂：对二甲氨苯甲醛1g、95%乙醇95ml、浓盐酸20ml。配置时，应先用乙醇溶液溶解对二甲氨苯甲醛，再缓慢加入盐酸即成。此试剂不能久存，宜少量配制，并避光保存于冰箱中或阴凉处。试验方法及结果：将细菌纯培养物接种到蛋白胨水培养基中，37培养24-72h后，沿管壁缓慢加入2-3ml的试剂于培养物的液面上。在两层液体交界面出现红色环者为阳性，阴性反映者不变色。为了使颜色明显，在加入试剂之前，先向培养物种加入1ml乙醚，并充分振荡，使靛基质溶于乙醚中。静置片刻，使乙醚层浮于培养物的液面。此时，再按上述方法徐徐加入试剂5-10滴，并观察判定结果。6、柠檬酸盐利用试验：培养基：硫酸镁 0.2g 磷酸二氢铵 1.0g 磷酸氢二钾 1.0g 枸橼酸钠 5.0g 氯化钠 5.0g 琼脂 15.0g 1%溴麝香草酚蓝酒精溶液 8.0ml蒸馏水 990ml制法：将各物（除溴麝香草酚蓝溶液外）混合于蒸馏水内，加热溶解，校正pH7.0，再加入溴麝香草酚蓝液，混匀后分装试管，12120min高压灭菌后摆成斜面。培养基呈淡绿色。培养基摆成斜面。将培养物划线接种。在最佳生长温度培养7d。结果记录：微生物利用柠檬酸何在柠檬酸琼脂上的生长导致了碱性反应，因此培养基中的溴百里芬兰指示剂由绿色变为亮蓝色；如果微生物没有利用柠檬酸且在柠檬酸琼脂上没有生长，则培养基的颜色不发生变化。7、分解尿素产氨：培养基：蛋白胨 1.0g 0.2%酚红溶液6.0ml 氯化钠 5.0g 琼脂 20g 磷酸二氢钾 2.0g D-葡萄糖 1.0g 蒸馏水 1000ml加热溶解各成分于蒸馏水中。分装于试管，121灭菌15min，冷却至50，在每支试管中无菌加入足量20%灭菌尿素溶液（预先过滤灭菌），使最终含量为2%，将培养基制成斜面，放置，备用。按斜面接种培养方法接种