常见缓冲液的配制.doc

附溶液配制方法：pH7.2 0.01mol/L PBSKH2PO4 0.38gNa2HPO4 1.02g(或Na2HPO412H2O2.58g)NaCl 8.0g蒸馏水加至 1000mLpH7.4 PBS/TNaCl 8.0gKH2PO4 0.2gNa2HPO412H2O(或Na2HPO47H2O) 2.89g（或2.16g）KCl 0.2g吐温20 0.5mL蒸馏水加至 1000mLpH9.6碳酸盐缓冲液Na2CO3 1.59gNaHCO3 2.93g蒸馏水加至 1000mL0.075mol/L氯化钾低渗液氯化钾 0.559g，蒸馏水 100ml甲醇冰醋酸（3:1）固定液甲醇 3份 冰醋（乙）酸 1份姬姆萨染液Giemsa原液 1ml 1/15mol/L磷酸缓冲液（pH6.8或7.4）10ml2.3% 柠檬酸钠溶液柠檬酸钠（Na C H O 2H O） 2.3g 蒸馏水 100ml明胶显影液明胶粉 0.2g 三蒸水 10ml 甲酸 0.1ml1% 醋酸冰醋（乙）酸 1ml 蒸馏水 99mlHo33342-若丹明123染液Ho33342（Hoechst 33342）0.25g 若丹明123（Rhodamine 123） 1.0g PBS 1mlDPH贮备液DPH（1.6-Dipnenyl-1,3, 5hexatriene, 4.65mg） 四氢呋喃 10mlDPH工作液(210-6mol/L)DPH贮备液 0.1ml PBS 100mlFDA贮备液二醋酸脂荧光素(Fluorescein diacetate,FDA) 5.0mg 丙酮 1mlFDA工作液FDA贮备液 0.1ml PBS 100mlM-缓冲液（pH7.2）咪唑50mmol/L 3.404g 氯化钾50mmol/L 3.7g 氯化镁（MgCl 6H O）0.5mol/L 101.65mg EGTA(乙二醇双（a-氨基乙基）醚四乙酸) 1mmol/L 380.35mg EDTA(乙二胺四乙酸) 0.1mmol/L 29.22mg 疏基乙醇1mmol 0.07ml 4mol/L甘油292ml 蒸馏水 加至1000ml1% TritonX-100液Triton X-100（聚乙二醇辛基苯基醚） 1ml M-缓冲液 99ml3% 戊二醛液戊二醛25% 3ml PBS 液（pH7.2） 97ml0.2% 考马斯亮蓝R250染液考马斯亮蓝R250（Coomassie brilliant blue R250） 0.2g甲醇 46.5ml 冰醋（乙）酸 7ml 蒸馏水 46.5ml生理盐水(0.85%氯化钠)氯化钠 8.5g 三蒸水 1000ml0.25mol/L蔗糖水溶液（含0.003mol/L氯华钙）蔗糖 85.5g 无水氯华钙 0.33g 蒸馏水 1000ml0.17mol/L氯化铵液氯化铵 4.574g 蒸馏水 500ml0.17mol/L硝酸钠液硝酸钠 7.224g 蒸馏水 500ml0.12mol/L硫酸钠液硫酸钠（Na SO H O） 19.333g 蒸馏水 500ml0.12mol/L草酸铵液草酸铵（NH ）C o H O） 8.527g 蒸馏水 500ml0.17mol/L醋酸铵液醋酸铵 6.552g 蒸馏水 500ml0.32mol/L葡萄糖液葡萄糖 28.83g 蒸馏水 500ml0.32mol/L甘油液甘油（C H (OH) 1.26g/ml) 11.7ml 蒸馏水 500ml0.32mol/L乙醇液无水乙醇 9.33ml 蒸馏水 500ml0.32mol/L丙醇液正丙醇（比重0.803） 11.976ml 蒸馏水 500ml化学名：2-4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinylethanesulfonic acid 中文名：羟乙基哌嗪乙硫磺酸分子式：C8H18N2O4S HEPES是一种非离子两性缓冲液,其在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力。其最大优点是在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的PH值.在这种培养条件下,细胞培养瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中.大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色.HEPES有些昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒. 原则上,HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制.实际操作中并非如此简单. 溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长也是很重要的。 HEPES使用方法有两种： (1)HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中,再过滤除菌.每1000ml培养液中加入2.38克HEPES,待溶后用lN NaOH 调pH至7.2,滤过除菌后使用.此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L. (2)亦可配成 100 x 贮存液（l mol/L），使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液，最终应用浓度仍为10mmol/L。