GB-T 8312-2002 茶 咖啡碱测定.pdf

G B / r 8 3 1 2 -2 0 0 2前言 本标准是对G B / T 8 3 1 2 -1 9 8 7 茶咖啡碱的测定 的修订。 本标准“ 第一法高效液相色谱法” 等效采用I S O 1 0 7 2 7 : 1 9 9 5 ( 高效液相色谱法测定茶和固态速溶茶中的咖啡碱含量 。 本标准与I S O 1 0 7 2 7 : 1 9 9 5 的主要差异是: 将等效采用的I S O 1 0 7 2 7 : 1 9 9 5 方法作为本标准的第一法 。 本标准与G B / T 8 3 1 2 -1 9 8 7的主要差异是: 增加了第一法高效液相色谱法， 并将G B / T 8 3 1 2 -1 9 8 7 中“ 紫外分光光度法” 作为本标准的第二法。 本标准第一法和第二法可获得相同的结果。 本标准自 实施之日 起， 同时代替G B / T 8 3 1 2 -1 9 8 7 , 本标准由中华全国供销合作总社提出。 本标准由中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院归口。 本标准起草单位: 中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院。 本标准主要起草人: 周卫龙、 孙安华、 钟萝。 本标准由中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院负责解释。免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t )免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载GB / T 8 3 1 2 -2 0 0 2I S O前言 I S O( 国际标准化组织) 是一个各国标准化组织机构( I S O成员团体) 的国际性联盟。通常制定国际标准的7 一 作是由I S O技术委员会承担， 每个成员团体如有兴趣， 都有权成为该项目委员会的代表， 与I S O有联系的官方或非官方的国际标准组织也参与工作 I S O与国际电工委员会( I E C ) 在电工标准文件紧密合作 技术委员会所采纳的国际标准草案提交各成员团体表决， 国际标准的出版必须取得不少于成员团体7 5 环的赞成票。 国际标准I S O 1 0 7 2 7 是由I S O / T C 3 4 农产食品技术委员会制定。 国际标准I S) 1 0 7 2 7 的附录A和附录B仅供参考免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t )免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准茶咖啡碱测定 G B / T 8 3 1 2 - - 2 0 0 2e 4 v I S O 1 0 7 2 7 : 1 9 9 5Te a - De t e r mi n a t i o n o f c a f f e i n e c o n t e n t代替 G t 4 / T 8 3 1 2 1 9 8 71 范围 本标准规定了用高效液相色谱法、 紫外分光光度法对茶叶中咖啡碱测定的原理、 仪器和用具、 试剂和溶液、 操作方法及结果计算方法。本标准适用于茶叶中咖啡碱的测定2 引用标准 下列标准所包含的条文， 通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时， 所示版本均为有效。所有标准都会被修订， 使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性G B / T 8 3 0 2 -2 0 0 2 茶取样G B / T 8 3 0 3 -2 0 0 2 茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定第一法高效液相色谱法3 原理 茶叶中咖啡碱经沸水和氧化镁混合提取后， 经高效液相色谱仪、 C。 分离柱、 紫外检测器检测， 与标准系列比较定量。4 仪器 和用具 实验室常规仪器及下列各项:4 . 1 高效液相色谱仪。4 . 2 紫外检测器: 检测波长2 8 0 n m4 . 3 分析柱: C , a ( O D S柱) 。4 . 4 分析天平: 感量 0 . 0 0 0 1 K e5 试荆和溶液 甲醇为色谱纯， 水为重蒸馏水。5 ， ， 氧化镁: 分析纯。5 . 2 高效液相色谱流动相: 取 6 0 0 m L甲醇倒人 1 4 0 0 m 工重蒸馏水， 混匀， 脱气。5 . 3 咖啡碱标准液: 称取 1 2 5 m g咖啡碱( 纯度不低于”%) 加乙醇 : 水( 1 : 4 ) 溶解， 定容至2 5 0 m 工使用时， 待标准液至室温后， 取 2 m工加水至1 0 0 m L作为工作液。6 操作方法6 . 1 取样中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局2 0 0 2 - 0 6 - 1 7 批准2 0 0 2 一 1 2 一 0 1实施免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t )免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / r 8 3 1 2 -2 0 0 2 按 G B / T 8 3 0 2 的规定。6 . 2 试样制备 按 G B / T 8 3 0 3的规定。6 . 3 测定步骤6 . 3 . 1 试液制备 称取 1 . 0 g ( 准确至0 . 0 0 0 1 g ) 磨碎茶样( 6 . 2 ) , 置于5 0 0 m l , 烧瓶中. 加4 . 5 g 氧化镁及3 0 0 m l沸水， 于沸水浴中加热， 浸提 2 0 m i n每隔5 m i n摇动一次) ， 浸提完毕后立即趁热减压过滤， 滤液移入5 0 0 m L 容量瓶中， 冷却后， 用水定容至刻度， 混匀。取一部分试液， 通过。 . 4 5 p m滤膜过滤， 待用6 . 3 . 2 色谱条件6 . 3 - 2 . 1 检测波长: 紫外检测器， 波长 2 8 0 n mo6 . 3 - 2 . 2 流动相: 水 : 甲醇的体积分数为 7: 3 ,6 . 3 . 2 . 3 流速: 0 . 5 m L / m i n 一1 . 5 m L / m i n6 . 3 - 2 . 4 柱温; 4 0 C。6 . 3 . 2 . 5 进样量: 1 0 p L - - - 2 0 1A6 . 13 测定 准确吸取制备液( 6 - 3 . 1 ) 1 0 p L -2 0 川 一 ， 注人高效液相色谱仪， 并用咖啡碱标准液( 5 . 3 ) 制作标准曲线， 进行色谱测定了 结果计算了 门计算方法 比较试样和标准样的峰面积， 按式( L ) 计算:咖啡碱( %) =M: X m, 只 1 0 0 0又 1 0 0 。 。 (1)几一么 X C式中: C 一一 测定液中咖啡碱含量， K g ; L , 一 一 样品总体积 ， mL; L 2 进样体积， 1 L ; M 一一 试样的质量， 9 ; 川. 试样干物质含量， % 如果符合重复性( 7 - 2 ) 的要求， 取两次测定的算术平均值作为结果， 结果保留小数点后一位。了 . 2 重复性 同一样品的两次测定值之差， 每1 0 0 g 试样不得超过。 . 2 g .第二法紫外分光光度法8 原理茶叶中的咖啡碱易溶于水， 除去干扰物质后， 用特定波长测定其含量。9 仪器和用具 实验室常规仪器及下列各项:9 . 1 紫外分光光度仪。9 . 2 分析天平: 感量。 . o 01R0 . 0 0 1免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t )免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 8 3 1 2 -2 0 0 21 0 试荆和溶液 所用试剂应为分析纯( A R) ， 水为蒸馏水。1 0 . 1 碱式乙酸铅溶液: 称取5 0 g 碱式乙酸铅， 加水1 0 0 m l ， 静置过夜， 倾出上清液过滤。1 0 . 2 盐酸: 0 . 0 1 m o t / L溶液， 取 0 . 9 ml浓盐酸， 用水稀释1 L , 摇匀1 0 . 3 硫酸: 4 . 5 mo t 儿 溶液， 取浓硫酸 2 5 0 m l， 用水稀释至 I I， 摇匀1 0 . 4 咖啡碱标准液: 称取 1 0 0 m g 咖啡碱( 纯度不低于9 9 %) 溶于1 0 0 m l水中， 作为母液， 准确吸取5 m l , 加水至1 0 0 m L 作为工作液t 1 r o t含咖啡碱0 . 0 5 m g )1 1 测定步骤1 1飞 试液制备 称取3 创准确至0 . 0 0 1 g ) 磨碎试样( 6 - 2 ) 于5 0 0 m L锥形瓶中， 加沸蒸馏水4 5 0 m L ， 立即移人沸水浴中， 浸提4 5 m i n ( 每隔 1 0 m i n 摇动一次、 。浸提完毕后立即趁热减压过滤。滤液移入5 0 0 ml容量瓶中， 残渣用少量热蒸馏水洗涤 2 -3 次， 并将滤液滤入上述容量瓶中， 冷却后用蒸馏水稀释至刻度1 1 . 2 用移液管准确吸取试液( I t . 1 ) 1 0 m 工 ， 移人 1 0 0 m L容ff瓶中， 加人 4 m t , 0 . 0 1 m o t / L盐酸( 1 0 . 2 ) 和1 ml碱式乙酸铅溶液( 1 0 . 1 ) ， 用水稀释至刻度， 提匀， 静置澄清过滤， 准确吸取滤液2 5 m L ,注人 5 0 m l容量瓶中， 加人。 . 1 m 工4 . 5 m o l l 硫酸溶液( 1 0 . 3 ) ， 加水稀释至刻度， 混匀， 静置澄清过滤。用1 0 m m比色杯， 在波长2 7 4 n m处 以试剂空白溶液作参比， 测定吸光度( A) d1 1 . 3 咖啡碱标准曲线的制作 分别吸取。 , 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 m l , 咖啡碱工作液( 1 0 . 4 ) 于一组 2 5 ml容量瓶中， 各加人 1 . 0 m L盐酸( 1 0 . 2 ) , 用水稀释至刻度， 混匀， 用1 0 m m石英比 色杯， 在波长2 7 4 n m处， 以试剂空自 溶液作参比， 测定吸光度( A ) 将测得的吸光度与对应的咖啡碱浓度绘制标准曲线1 2 结果计算 茶叶中咖啡碱含量以干态质量分数表示， 按式( 2 ) 计算;式中: C , I 咖啡碱( %)一根据试样测得的吸光度( A)C , L a 1 0 0 0_5 02 5