不同的植物叶片对水葫芦链格孢Ae09 菌株生长的影响.doc

不同的植物叶片对水葫芦链格孢 Ae09 菌株生长的影响 葛慈斌 刘波 朱育菁 蓝江林 福建省农业科学院生物技术研究所生物农药研究中心 福建 福州 350003 摘要 比较了水葫芦链格孢 Ae09 菌株在未灭菌和灭菌的水葫芦 茄子 豇豆和大蒜叶片汁液 琼脂平板上的生长状况 结 果表明 水葫芦叶片不会比豇豆和茄子提供更多的营养物质供水葫芦链格孢生长 Ae09 菌株在未灭菌的水葫芦 茄子 豇 豆叶片汁液 琼脂平板上培养 8 d 后 产生的孢子数分别为 3 3 104 4 0 104和 4 5 104 cfu ml 前者比后二者少 在灭菌的 水葫芦 茄子 豇豆叶片汁液 琼脂平板上 产生的孢子数分别为 2 1 104 5 2 104和 5 5 104 cfu ml 前者仍比后二者少 Ae09 菌株在灭菌后的豇豆 茄子和大蒜叶片汁液 琼脂平板上产生的孢子数均比未灭菌的相应平板上的孢子数多 但在未 灭菌的水葫芦叶片汁液 琼脂平板上产生的孢子数比在灭菌后的平板上产生的孢子数多 提示水葫芦叶片可能存在能够促进 水葫芦链格孢生长的某些物质 但高压灭菌处理会使该物质失去活性 而茄子 豇豆和大蒜叶片不存在这些物质 关键词 水葫芦链格孢 营养 孢子数 中图分类号 文献标识码 水葫芦 Eichhornia crassipes Solms 又名凤眼莲 凤眼兰 属雨久花科凤眼莲属 是一种漂 浮水面 或泥地 生长的大草本 水葫芦主要以匍匐根繁殖 速度极快 在适宜条件下 每 5 6d 就繁殖一 新的植株 1 水葫芦一旦在新的传入地定居 常在短时间内侵占邻近水域 形成单一植物群落 是目前世 界上危害最为严重的多年生水生杂草之一 我省的水葫芦危害情况也很严重 许多河道和湖泊也被水葫 芦覆盖 对水葫芦的防除 目前主要靠打捞和使用化学除草剂的方法 但也存在着效果不理想 2 或污染水 质等问题 水葫芦链格孢 Alternaria eichhorniae 是研究较早的水葫芦病原真菌 对水葫芦具有较强的 侵染能力 但基本不侵染其他的植物 即具有较强的寄主专一性 3 为从营养方面来探索水葫芦链格孢的 这种寄主专一性 本研究选取水葫芦 茄子 豇豆和大蒜的叶片 研磨成浆后与琼脂混合制成平板 观 察水葫芦链格孢在这些平板上的生长状况 分析这些叶片对其生长的影响 现将结果报告如下 1 材料与方法 1 1 菌株和培养基 水葫芦链格孢 Ae09 菌株 由中国农科院环发所万方浩研究员馈赠 马铃薯葡萄糖琼脂 PDA 培养 基 1 2 不同植物叶片汁液琼脂平板的制备 选取新鲜的水葫芦 茄子 豇豆和大蒜的叶片各0 6 g 用研钵研磨成浆后 加水定容至60 ml 装于 150 ml的三角瓶 再加入1 0g的琼脂 微波炉加热煮沸 稍冷却后 倒平板 8 8 cm 配制同样的4种植物叶片汁液 琼脂溶液各60 ml一份 120 高压灭菌20 m后倒平板 1 3 水葫芦链格孢的培养 在长满Ae09菌株菌丝的PDA平板上 用打孔器打取菌片 0 6 cm 接种1片到不同植物叶片汁 液 琼脂平板中央 置28 培养箱培养 分别以1 8 琼脂为空白对照 以PDA培养基为正常营养的对照 各类植物及对照均设3个重复 2 4 菌落直径和孢子浓度的测量 培养4 d和8 d后 观察各平板上的菌落生长状况 用 十 字测量法测量各平板上的菌落直径 培养 8 收稿日期 2006 作者简介 葛慈斌 1973 男 助理研究员 研究方向 生物防治 2 通讯作者 刘波 博士 研究员 e mail laeptb d 后 用 10 ml 无菌水覆盖平板表面 收集孢子悬液 用血球计数板测各悬液的孢子数 2 结果与分析 2 1 Ae09菌株在未灭菌的不同植物叶片汁液 琼脂平板上的生长状况 试验结果见表1 水葫芦链格孢Ae09菌株在未灭菌的不同植物叶片汁液 琼脂平板上培养4 d后 各菌 株菌落直径的大小存在差异 水葫芦叶片汁液 琼脂平板上的菌落直径为7 38cm 略微地比茄子和大蒜叶 片汁液 琼脂平板上的菌落直径6 95和6 81 cm大 但显著地大于豇豆叶片 琼脂平板上的菌落直径 6 53 cm 空白琼脂平板上的直径为4 16 cm 显著地比含有植物叶片汁液平板上的菌落直径小 P 0 01 培 养8 d后 除空白琼脂平板上的菌落直径为6 34 cm外 其它平板上的菌落长满整个平板 菌落直径为8 80 cm 豇豆和茄子叶片汁液 琼脂平板收集的孢子数分别为4 5 104和4 0 104 cfu ml 显著地比水葫芦平板的 孢子数 3 3 104 cfu ml 大 P 0 01 大蒜和空白琼脂平板的孢子数最低 均为1 0 104 cfu ml 表1 水葫芦链格孢Ae09菌株在未灭菌的不同植物叶片汁液 琼脂平板上的菌落直径和孢子数 植物名称菌落直径 4 d后 cm 菌落直径 8 d后 cm 孢子数 cfu ml 水葫芦7 38a8 80a3 3 104b 豇豆6 53b8 80a4 5 104a 大蒜6 81ab8 80a1 0 104c 茄子6 95ab8 80a4 0 104a CK 琼脂 4 16c6 34b1 0 104c 注 同一栏内 带相同字母的数字在Duncan s新复极差测验的多重比较P 0 01时没有显著差异 2 22 2 在灭菌后的不同植物汁液在灭菌后的不同植物汁液 琼脂平板上的生长状况琼脂平板上的生长状况 试验结果见表2 菌株Ae09在灭菌后的水葫芦 豇豆 大蒜和茄子叶片汁液 琼脂平板上培养4 d后 菌落直径分别为7 90 7 39 7 83和7 42 cm 彼此间不存在显著差异 但显著地比PDA培养基和空白琼脂 平板上的菌落直径 分别为4 96和4 23 cm 大 P 0 01 培养8 d后 除空白琼脂平板上的菌落直径为 6 76 cm外 其它平板上的菌落长满整个平板 菌落直径为8 80 cm 对比PDA平板和不同植物叶片汁液及 空白琼脂平板上的菌落状况 可以发现 PDA平板上的菌丝稠密 而其它平板的菌丝稀疏 菌丝稠密程 度的差异也表现在孢子数的差异上 从PDA平板收集的孢子数为4 3 105 cfu ml 显著大于其它平板上的 孢子数 在4种植物之间 豇豆和茄子叶片汁液 琼脂平板上的孢子数为5 5 104和5 2 104 cfu ml 显著比 水葫芦和大蒜叶片汁液 琼脂平板上的孢子数 2 1 104 cfu ml 大 P 0 01 空白琼脂平板的孢子数最 低 仅为1 3 104 cfu ml 表2 水葫芦链格孢Ae09菌株在灭菌后的不同植物叶片汁液 琼脂平板上的菌落直径和孢子数 植物叶片菌落直径 4 d后 cm 菌落直径 8 d后 cm 孢子浓度 cfu ml 水葫芦7 90a8 802 1 104c 豇豆7 39a8 805 5 104b 大蒜7 83a8 802 0 104c 茄子7 42a8 805 2 104b 琼脂4 23b6 761 3 104d PDA4 96b8 804 3 105a 3 3 讨论 在供试的各植物叶片汁液未经灭菌处理或经过灭菌处理的情况下 水葫芦链格孢Ae09菌株在水葫芦 叶片汁液 琼脂平板上的生长速度略比其它3种植物的快 表现为培养4 d后菌落直径更大 但是从水葫芦 叶片汁液 琼脂平板收集的孢子数均比豇豆和茄子的少 这说明水葫芦叶片汁液不会比豇豆和茄子叶片能 提供更多的营养物质供水葫芦链格孢的生长 比较灭菌处理和未经灭菌处理的同一种植物叶片汁液 琼脂平板上Ae09菌株的孢子浓度 可以发现 经过灭菌处理后的豇豆 茄子和大蒜的平板上的孢子数均比未经灭菌处理的相应平板上的孢子数多 这 可能是因为灭菌处理可以除去其它微生物对水葫芦链格孢生长的影响 但与豇豆 茄子和大蒜不同的是 未经灭菌处理的水葫芦叶片汁液琼脂平板上的孢子数却比经过灭菌处理的平板上的孢子数多 原因推测 是水葫芦叶片中存在某些物质 会促进水葫芦链格孢在水葫芦叶片上的生长 但高压灭菌会使该物质失 去活性 赵国刚测定了水葫芦链格孢 C416 菌株的寄主范围 结果表明 该菌株除侵染水葫芦外 对水稻 小 麦 玉米 茄子 大豆 棉花和苹果等 14 种植物均不会侵染 4 本试验结果表明 水葫芦链格孢对水葫 芦侵染的专一性 不是因为它能比茄子 豇豆等植物提供更多的营养 而可能是因为水葫芦植株内存在 着特殊的物质 有利于水葫芦链格孢的侵染 繁殖 而且这种物质可能对热不稳定 关于水葫芦链格孢 对水葫芦侵染的专一性原因 还有待于进一步的研究 参考文献 1 Perkins B D Release in the United States of Neochetina eichhorniae Warner an enemy of water hya