（食品科学专业论文）喹噁啉类定量分析方法及脱氧速率研究.pdf

喹嚯啉类定量分析方法及脱氧速率研究 喹嗯啉类定量分析方法及脱氧速率研究 研究生：吴玉杰导师：袁宗辉教授 国家兽药残留基准实验室( h z a u ) 农业部食品安全评价重点开放实验室， 华中农业大学，武汉4 3 0 0 7 0 ，中国 摘要 喹唾啉类是化学合成的具有抗菌、促生长作用的动物专用药，被广泛用作猪、 鸡、鱼等动物的饲料添加剂，主要包括卡巴氧、喹乙醇、喹赛多、喹烯酮和乙酰甲 喹等5 种药物。因毒副作用，卡巴氧和喹乙醇已被禁止或限制使用。中国相继批准 了乙酰甲喹和喹烯酮的使用，并正在开发较安全的喹赛多等同类替代产品。但喹嗯 啉类的滥用和非法使用现象普遍，药物毒性及残留造成的潜在的食品安全危害不容 忽视，开展这类药物毒性作用机制及其在饲料和动物源食品中的分析方法研究具有 重大意义。喹嗯啉类分析方法研究禁锢于单一基质、单组分，不同基质中多种喹曝 啉类分析方法研究未见报道。喹嗯啉类毒性研究也仅局限于推测其源于脱氧过程， 但未见毒性与脱氧速率关系的阐述。本课题从喹嗯啉类分析方法展开研究，深入探 索并建立饲料中喹嗯啉类和动物可食性组织中喹嗯啉类残留标示物的同时分析方 法，进而初步探讨喹嗯啉类脱氧速率和毒性的关系，具体为以下3 个研究体系内容。 这些研究为这类药物的残留监控和毒性作用机制等研究提供技术支持和理论依据， 对动物源食品安全评价具有指导意义和参考价值。 1 饲料中喹嗯啉类药物同时分析方法研究 深入探索样品前处理和检测方法，确定最佳条件，建立猪、鸡、鱼饲料中5 种 喹嗯啉类高效液相色谱同时分析方法。样品经甲醇水乙腈( 3 5 ：3 5 ：3 0 ，“v v ) 溶 剂超声提取，中性氧化铝固相萃取小柱净化，高效液相色谱梯度洗脱分离，3 8 0n l t l 紫 外波长测定。不同饲料样品中，5 种药物的c c 旺4 于0 4 5m g k g ，c c b 小于0 , 7 5m 影k g ； 在1 、5 、5 0 和2 0 0m 埏的添加浓度，除喹赛多( 7 5 ) 外，其它4 种药物的回 收率为9 2 1 1 0 4 3 ，日内、日间相对标准偏差为3 0 1 3 。 超声提取和固相萃取净化，可以节省样品前处理时间，避免有毒试剂的使用， 减少有机试剂用量，消除饲料基质对喹嗯啉类药物测定干扰。仪器测定条件选择过 程中，采用流动相梯度洗脱方式，考察了流动相成分和比例对5 种喹嗯啉类药物同 华中农业大学2 0 0 7 届博士学位论文 时分析的影响，选用3 8 0n l q 作为紫外检测器测定波长，进一步对5 种喹嗯啉类药物 进行筛选，对比不同溶剂对药物测定分析结果差异，确定5 种喹嚼啉类药物同时分 离分析的高效液相色谱条件。 本方法操作简便、材料易得、环境污染小，可以广泛应用于猪、鸡、鱼等饲料 中多种喹嗯啉类的监测，对饲料中其它化合物的多组分分析方法研究具有参考价值。 2 动物可食性组织中喹嚼啉类多残留分析方法研究 探讨样品提取、净化和测定溶剂等条件，建立猪、鸡、鱼肌肉及猪、鸡肝脏组 织中喹嗯啉2 羧酸和3 甲基喹嗯啉2 羧酸的高效液相色谱多残留分析方法。动物组 织样品采用偏磷酸甲醇溶液水解，乙酸乙酯提取，m a x 阴离子固相萃取小柱净化， 碱性甲醇溶解浓缩残渣，高效液相色谱分离，3 2 0i l m 紫外波长测定。猪、鸡、鱼肌 肉组织中喹嗯啉一2 羧酸的c c a 为0 7 1 0p g k g ，c c p 为1 3 - 1 7p 眺g ；3 甲基喹嗯 啉- 2 - 羧酸的c c a 为1 2 2 6p g k g ，c c d 为2 叫4p g k g 。猪、鸡肝脏组织中喹嗯啉 一2 一羧酸的c c a 为2 5 - 2 6 , g k g ，c c p 为4 3 5 6 “g k g ：3 一甲基喹噫啉- 2 一羧酸的c c a 为2 1 2 4p g k g ，c c p 为4 4 5 6 , g k g 。喹嗯啉- 2 一羧酸和3 一甲基喹嗯啉- 2 一羧酸在各 动物肌肉组织中添加浓度为2 0 - - 1 6 , g k g ，回收率为7 0 7 - 1 0 4 3 ，相对标准偏差 喹烯酮 喹乙醇 乙酰甲喹。 猪肝微粒体中5 种喹嗯啉类脱氧速率比较，验证喹嗯啉类脱氧速率关系。5 种 药物在加有还原型辅酶的猪肝微粒体中孵育，高效液相色谱测定不同时间原形药物 浓度，发现其脱氧还原反应符合一级化学动力学规律，5 种药物的半衰期为 l1 7 5 6 9 3lm i n 。脱氧速率喹赛多 喹烯酮 喹乙醇 卡巴氧 乙酰甲喹。 喹嗯啉类脱氧速率及毒理学研究结果，进行脱氧速率与毒性相关性分析，证明 脱氧速率为：喹赛多 喹烯酮 喹乙醇 卡巴氧 乙酰甲喹，速率越大毒性越低，脱氧 速率与毒性之间存在负相关性，可以作为喹嗯啉类毒性高低判断的重要参数，此结 论可为喹噫啉类毒性作用机制研究提供理论依据。 本课题开展喹嗯啉类分析方法和脱氧速率的研究，在国内外首次建立了饲料中 多种喹嗯啉类同时分析方法和不同动物可食性组织中喹嗯啉类多残留分析方法，比 较喹嗯啉类脱氧速率快慢，分析脱氧速率与毒性大小之间的关系，这些研究为喹噫 啉类残留监控和毒性机理研究提供了先进的检测方法和强有力的理论依据，对动物 性食品安全评价有重要参考价值。 关键词：喹噫啉类；饲料；动物可食性组织；残留；定量分析方法；脱氧速率 华中农业大学2 0 0 7 届博士学位论文 s t u d i e so nq u a n t i f i c a t i o na n a l y s i sm e t h o d sa n dd e o x i d a t i o nr a t e s o fq u i n o x a l i n e s c a n d i d a t e ：w uy u ji e s u p e r v i s o r ：p r o f e s s o ry u a nz o n g h u i n a t i o n a lr e f e r e n c el a b o r a t o r yo f v e t e r i n a r yd r u gr e s i d u e s ( h z a u ) m o ak e y l a b o r a t o r yo ff o o ds a f e t ye v a l u a t i o n ， h u a z h o n ga g r i c u l t u r a lu n i v e r s i t y , w u h a n4 3 0 0 7 0 p r c h i n a a b s t r a c t q u i n o x a l i n e sa r eag r o u po fs y n t h e t i ca n t i b a c t e r i a la g e n t sw h i c ha r ew i d e l yu s e d 弱 m e d i c i n a lf e e da d d i t i v e sa l sa n t i b a c t e r i a lg r o w t hp r o m o t e r s i ns o m ec o u n t r i e s ，c a r b a d o x a n do l a q u i n d o xh a v eb e e nb a n n e do rl i m i t e dt ob eu s e di nf o o da n i m a ld u et ot h e i r p o t e n t i a lt o x i c i t y m e q u i n d o xa n dq u i n o c e t o n eh a v eb e e ns u c c e s s i v e l yr e g i s t e r e da n dt h e s a f e rm e d i c i n eo fc y a d o xw h i c hb e l o n g st oq u i n o x a l i n e sf a m i l yi sb e i n gd e v e l o p e di n c h i n a h o w e v e r ，i tc a nn o tb en e g l e c t e do ft h eh a z a r d sf r o mt h er e s i d u e so nf o o ds a f e t y f o rs o m ea b u s ea n di l l e g a lu s eo ft h ed r u g s s oi ti sm o r ei m p o r t a n tt od od e e ps t u d i e so n t o x i c i t ym e c h a n i s mo fq u i n o x a l i n e sa n da n a l y s i sm e t h o d sf o rd e t e r m i n a t i o no ft h e s e d r u g si n f e e d sa n da n i m a lf o o d s t h o u g hs o m em e t h o d sh a v eb e e nr e p o r t e df o r d e t e r m i n a t i o no ft h ei n d i v i d u a lq u i n o x a l i n ei ns i m p l em a t r i x ，n om e t h o dh a sy e tb e e n d e v e l o p e df o rs i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o no ft h ef i v ec o m p o u n d si nd i f f e r e n tm a t r i c e s a n dt h e r ei so n l ys u p p o s et h a tt o x i c i t yi sr e l a t i v et od e s o x i d a t i o no ft h eq u i n o x a l i n e s h o w e v e r ，n or e p o r ti sf o rc l a r i f y i n gr e l a t i v i t yb e t w e e nd e o x i d a t i o nr a t e sa n dt o x i c i t yo f q u i n o x a l i n e s b a s e do nt h et w oa s p e c t s ，t h i ss t u d ya i m st oe x p l o r ea n a l y s i sm e t h o d sf o r d e t e r m i n a t i o no fm u l t iq u i n o x a l i n e si nf e e d sa n da n i m a le d i b l et i s s u e sd e e p l y ，a n d i n v e s t i g a t et h er e l a t i v i t yb e t w e e nd e o x i d a t i o nr a t e sa n dt o x i c i t yo fq u i n o x a l i n e sp r i m a r i l y ， t op r o v i d et e c h n i c a ls u p p o r tf o rm o n i t o r i n ga n dr e a s o n a b l ee v i d e n c ef o rs t u d y i n go n t o x i c i t ym e c h a n i s mo fq u i n o x a l i n e s t h es t u d ya l s oh a sag r e a tv a l u ef o re v a l u a t i o no n a n i m a lf o o ds a f e t y 1 d e v e l o p m e n to fam e t h o df o rs i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o no ft h e q u i n o x a l i n e si nf e e d s a nh p l cm e t h o dw i t hu vd e t e c t i o nh a sb e e ne s t a b l i s h e df o rs i m u l t a n e o u s q u a n t i t a t i v e d e t e r m i n a t i o no ft h e5q u i n o x a l i n e s ( c a r b a d o x ，o l a q u i n d o x ，c y a d o x ， 4 喹嗯啉类定量分析方法及脱氧这率研究 m e q u i n d o x ，q u i n o c e t o n e ) i np o r c i n e ，c h i c k e na n df i s hf e e d s f e e ds a m p l e sw e r ee x t r a c t e d w i t hm e t h a n o l - a c e t o n i t r i l e w a t e r ( 3 5 ：3 5 ：3 0 ，v v v ) i na l lu l t r a s o n i cb a t h ，a n dp u r i f i e db y s o l i dp h a s ee x t r a c t i o no na l u m i n an c a r t r i d g e s t h es a m p l e sw e r ea n a l y z e do na l le c l i p s e x d b c t sl i q u i dc h r o m a t o g r a p h yc o l u m nu s i n gag r a d i e n tp r o g r a mw i t hm e t h a n o la n d w a t e r e x c e p tf o rc y a d o x ( 7 5 ) ，r e c o v e r i e so ft h ed r u g sf r o mf e e ds a m p l e ss p i k e da t1 ， 5 ，5 0a n d 2 0 0m g k gr a n g e df r o m9 2 1 t o10 4 3 c o e f f i c i e n t so fv a r i a t i o nw e r e3 o 13 t h ed e c i s i o nl i m i t s ( c c a ) f o rt h ef i v ec o m p o u n d sw e r e 0 4 5m g k g ，a n dt h e d e t e c t i o nc a p a b i l i t i e s ( c c p ) w e r e o 7 5m g k g t h es a m p l ep r e t r e a t m e n th a sb e e ns i m p l i f i e df o ru s i n gt h eu l t r a s o n i ce x t r a c t i o na n d s o l i dp h a s ee x t r a c t i o ni nt h em e t h o d t h ev o l u m eo ft h eo r g a n i cs o l v e n tw a sd e c r e a s e d u s i n gt h es a m p l ep r e t r e a t m e n tm e t h o d ，a n da v o i d i n gt h et o x i c i t ys o l v e n tu s i n gi nt h e m e t h o d i nt h es a m et i m e ，t h ei n t e r f e r e n c ep e a k sw e r ed e l e t e d t h eg r a d i e n te l u t eo ft h e m o b i l ep h a s ew a su s e dt os e p a r a t ef i v eq u i n o x a l i n e si na l i q u i dc o l u m n t h ew a v e l e n g t h w a ss e ta t38 0n 1 i nt h ee x p e r i m e n t ，t h ec o n d i t i o n sf o rm o b i l ep h a s ea n dt h ew a v e l e n g t h h a v eb e e ni n v e s t i g a t e d t h i ss i m p l ya n dl i t t l ec o n t a m i n a t i v em e t h o dw i t ht h ef a m i l i a rm a t e r i a l sc a nb ea p p l i e d o nm o n i t o r i n gt h eu s eo fm u l t i - q u i n o x a l i n e si np o r c i n e ，c h i c k e n ，f i s hf e e d ，e t c t h i s r e s e a r c hc a na l s o p r o v i d e r e f e r e n c ef o r d e v e l o p i n gm e t h o d sf o r d e t e r m i n a t i o no f m u f f i n g r e d i e n ti nf e e d s 2 d e v e l o p m e n to fam e t h o df o rs i m u l t a n e o u sq u a n t i f i c a t i o no fm a r k e r r e s i d u e so fq u i n o x a l i n e si na n i m a le d i b l et i s s u e s am e t h o do fh i g h p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h yw i t hu vd e t e c t i o nh a sb e e n e s t a b l i s h e df o rs i m u l t a n e o u sq u a n t i t a t i v ed e t e r m i n a t i o no f q u i n o x a l i n e - 2 c a r b o x y l i ca c i d ( q c a ) a n dm e t h y l 3 一q u i n o x a l i n e 2 一c a r b o x y l i ca c i d ( m q c a ) ，t h em a r k e rr e s i d u e sf o r q u i n o x a l i n e s ，r e s p e c t i v e l y ，i nt h em u s c l e sa n dl i v e r so fp o r c i n ea n dc h i c k e na n di nt h e m u s c l eo ff i s h a n ds o m ec o n d i t i o n ss u c ha ss a m p l ee x t r a c t i o n ，p u r i f i c a t i o na n ds a m p l e s o l v e n th a v eb e e nd e e p l yi n v e s t i g a t e di nt h i se x p e r i m e n t t i s s u es a m p l e sw e r es u b j e c tt oa c i dh y d r o l y s i sf o l l o w e db yl i q u i d 1 i q u i de x t r a c t i o n a n do a s i sm a x s o l i d p h a s ee x t r a c t i o nc l e a n u p r e s i d u e so fc o n c e n t r a t i o nw e r es o l v e d w i t ha l k a l i n em e t h a n o la n dd e t e r m i n e db yh i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h yw i t h u vd e t e c t i o na tw a v e l e n g t ho f3 2 0 衄c c aw e r e0 7 1 0 - t g k g ，c c pw e r e1 3 1 7 p g k gf o rq c a a n dc c aw e r e1 2 2 6g g k ga n dc c pw e r e2 0 4 4g g k gf o rm q c a i nm u s c l et i s s u e s c c aw e r e2 5 5 6i - t g k g ，c c l bw e r e4 3 5 6g g k gf o rq c aa n d 5 华中农业大学2 0 0 7 届博士学位论文 c c aw e r e2 1 2 4g g k ga n dc c i 3w e r e4 4 5 6g g k gf o rm q c ai nl i v e rt i s s u e s r e c o v e r i e so fq c aa n dm q c a ，s p i k e di nm u s c l et i s s u e sa tl e v e l so f2 16g g k g ，w e r e f r o m7 0 7 t o10 4 3 ，t h er e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o nv a l u e sw e r e q u i n o c e t o n e o l a q u i n d o x m e q u i n d o x d e o x i d a t i o nr a t e so fq u i n o x a l i n e si np o r c i n el i v e rm i c r o s o m er e d u c t i v es y s t e mw e r e c o m p a r e d t h e5d r u g sw e r ei n c u b a t e di np o r c i n el i v e rm i c r o s o m ew i t hr e d u c i n gt y p e c o e n z y m e i ti sf o u n dt h a tt h er e a c t i o ni sa l s oa c c o r d i n gt ot h ef i r s to r d e rr u l ea n dt h e h a l f - l i v e sw e r eii 7 5 6 9 31m i nf o rt h ed r u g s d e o x i d a t i o nr a t e so fq u i n o x a l i n ed r u g s a r e ：c y a d o x q u i n o c e t o n e o l a q u i n d o x c a r b a d o x m e q u i n d o x a b o v er e s u l t sa r ec o n f i r m e dw i t ht o x i c o l o g ye x p e r i m e n t a lr e s u l to fq u i n o x a l i n e s i t i sp r o v e dt h a td e o x i d a t i o nr a t e so fq u i n o x a l i n ed r u g sa r e ：c y a d o x q u i n o c e t o n e o l a q u i n d o x c a r b a d o x m e q u i n d o x t o x i ci n t e n s i t yo fq u i n o x a l i n e sc o u l db eju d g e db y t h e i rd e o x i d a t i o nr a t e s 。i naw o r d ，f a s t e rt h er a t e s ，s t r o n g e rt h et o x i c i t y t h ee x p e r i m e n t s c o u l d p r o v i d e s o m er e a s o n a b l ee v i d e n c e sf o r s t u d yo nt o x i c i t ym e c h a n i s mo f 6 q u i n o x a l i n e s f r o ma b o v e ，a n a l y s i sm e t h o d sf o rd e t e r m i n a t i o no fq u i n o x a l i n e s a n dt o x i c i t y m e c h a n i s mo ft h ed r u g sw e r es t u d i e di nt h i sp a p e rc i r c l e do na n i m a lf o o ds a f e t y a n a l y s i s m e t h o d sf o rd e t e r m i n a t i o no fq u i n o x l a i n e si nf e e d sa n dm u l t i r e s i d u eo fq u i n o x a l i n e si n a n i m a le d i b l et i s s u e sh a v eb e e nf i r s t l ye s t a b l i s h e di n t h i ss t u d y t h er e l a t i v i t yb e t w e e n d e o x i d a t i o nr a t e sa n dt o x i c i t yo ft h ed r u g sw a si l l u s t r a t e d ，w h i c hc o u l db eo n eo f j u d g m e n t sf o rt o x i c i t yl e v e lo ft h ed r u g s a l lt h er e s u l t sf r o mt h es t u d yc a np r o v i d e a d v a n c e dt e c h n o l o g i e sa n dr e a s o n a b l ee v i d e n c ef o rm o n i t o r i n go rr e s i d u es u r v e i l l a n c ef o r q u i n o x l a i n e sa n ds t u d y i n go i lt o x i c i t ym e c h a n i s mo fq u i n o x a l i n e s a n da l lo ft h e mh a v e g r e a tv a l e sf o ra n i m a lf o o ds a f e t y k e yw o r d s ：q u i n o x a l i n e s ，f e e d ，a n i m a le d i b l et i s s u e ，r e s i d u e ，a n a l y s i sm e t h o d ， d e o x i d a t i o nr a t e 1 华中农业大学2 0 0 7 届博士学位论文 a n o v a c b x c c a c c p c y x d a d d e c y x d e o l a d e q c t d m f d m s o e i f a o h a c c p h p l c i r j e c f a l o d l o q l s 艮 m e q m q c a m i 也 m f u p l m s n m r 缩略语表 a n a l y s i so fv a r i a n c e 方差分析 c a r b a d o x 卡巴氧 d e c i s i o nl i m i t 检测限 d e t e c t i o nc a p a b i l i t y 定量限 c y a d o x 喹赛多 d i o d ea r r a yd e t e c t o r 二极管阵列检测器 d c s o x y c y a d o x脱二氧喹赛多 d e s o x y o l a q u i n d o x 脱二氧喹乙醇 d e s o x y q u i n o c e t o n e 脱二氧喹烯酮 n ，n d i m e t h y l f o r m a m i d en ，n 二甲基甲酰胺 d i m e t h y l s u l f o x i d e 二甲亚砜 e l e c t r o ni m p a c ti o n i z a t i o n 电子轰击电离 f o o da n d a g r i c u l t u r eo r g a n i z a t i o n 粮农组织 h a z a r d sa n a l y s i sc r i t i c a lc o n t r o lp o i n t 风险分析关键控制点 h i g h - p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y高效液相色谱 i n f r a r e ds p e c t r o p h o t o m e t e r 红外分光光度计 j o i n to ff a o w h oe x p e r tc o m m i t t e eo nf o o df a o w h o 食品添加剂 a d d i t i v e s 联合专家委员会 l i m i to fd e t e c t i o n 最低检测限 l i m i to fq u a n t i t a t i o n 最低定量限 l e a s ts i g n i f i c a n c er a n g e ，a = o 0 5最小显著范围 m e q u i n d o x 乙酰甲喹 m e t h y l 一3 - q u i n o x a l i n e 2 c a r b o x y l i ca c i d3 甲基喹噫啉2 羧酸 m a x i m u mr e s i d u el i m i t 最大残留限量 m i n i m u mr e q u i r e dp e r f o r m a n c el i m i t 最低允许性能限量 m a s ss p e c t r o m e t e r 质谱仪 n u c l e a rm a g n e t i cr e s o n a n c e 核磁共振 8 喹噫啉类定量分析方法及脱氧速率研究 o l a p d e q c a q c t r s d s d s p e t u v w h 0 o l a q u i n d o x p e r m i t t e dd a i l ye x p o s u r e q u i n o x a l i n e - 2 c a r b o x y l i ca c i d q u i n o c e t o n e r e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n s t a n d a r dd e v i a t i o n s o l i dp h a s ee x t r a c t i o n t e m p e r a t u r e u l t r a v i o l e ts p e c t r o p h o t o m e t e r w o r l dh e a l t ho r g a n i z a t i o n 9 喹乙醇 允许日暴露量 喹嗯啉2 羧酸 喹烯酮 相对标准偏差 标准偏差 固相萃取 温度 紫外分光光度计 世界卫生组织 j a n - 1 5 一己口3 8l o ：3 9 f r o m ： 华中农业大学学何论文独创性声明及使用授权书 乎位论文 是否保峦 如需保密，解密时闸年月u 独创性声明 本人声明所里交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果尽我所知。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，沦文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对j 叱进行了审定与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意 研究烙名：黑己。寺，卅珈叼年月 学位论文使用授权书 本人完全了解“华中农业大学关于保存使用学位论文的规定”。即学生必须按 照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本：学校有权保存提交论文的印刷版和中 子版，并提供目录检索和阅览服务可以采用彩印、缩印成目j 茄等爱制手段保存汇 编学位论文本人同患华中农业大学可以用不同方式在不同煤体上发表，传播学位论 文的全部或部分内容 注：保密学位论文在解密后适用于本授权书 黼签名知谚洲名：昙褥 签名日期：彬年 f 月，d 日 签名日期：彩哂每c d月f 3 日 华中农业大学2 0 0 7 届博士学位论文 l 前言 喹嗯啉类是化学合成的具有抗菌、促生长作用的动物专用药，主要包括卡巴氧 ( c a r b a d o x ) 、喹乙醇( o l a q u i n d o x ) 、喹赛多( c y a d o x ) 、喹烯酮( q u i n o c e t o n e ) 和乙酰甲喹( m e q u i n d o x ) 等，化学结构式如表1 1 所示。 表1 1 常见喹嗯啉类兽药 t a b l el 一1c o m m o nq u i n o x a l i n ed r u g s 卡巴氧和喹乙醇的使用较早。药理毒理研究( f e r r a n d o ，1 9 7 8 ；v o o g da n dv a n ， i o 喹嘿啉类定量分析方法及脱氧速率研究 1 9 8 0 ：c i h a ka n dv o n o t o r k o v a ，1 9 8 3 ；s r a me ta l ，1 9 8 6 ；p o w e r ，1 9 8 9 ；王树槐等， 1 9 9 1 ；王树槐，1 9 9 3 ) 发现其有明显的致癌、致畸、致突变和肾上腺皮质损坏等毒 副作用，对动物的健康生长有严重威胁，欧盟于1 9 9 8 年( f a o w h o ) 禁止了卡巴 氧和喹乙醇的使用，美国也限制其仅用于育成猪( 小于3 5k g ) 的抗菌作用。国内禁 止使用卡巴氧。2 0 0 1 年农业部1 6 8 号公告规定喹乙醇只能用作育成猪的饲料添加剂， 禁用于禽。为了降低药物毒性，抵抗食品动物病变，促进其生长，国内外力图研发 喹嗯啉类新型替代品种。国内相继研制的痢菌净和喹烯酮已被批准使用( 农业部9 5 号公告，1 9 9 8 ：农业部2 9 5 号公告，2 0 0 3 ) 。华中农业大学兽药研究所成功合成了 喹赛多，并进行了药理、毒理等实验研究，结果表明其无致畸、生殖和蓄积毒性， 有望成为喹嗯啉类新型优质的替代产品( y o s h i m u r ae ta l ，1 9 8 1 ；s y k o r ae ta l ，1 9 8 1 ； s c h e u t w i n k e l r r i c he ta l ，1 9 8 4 ：c i h a ke ta l ，1 9 8 5 ；v a n o v ae ta l ，1 9 8 6 ) 。 由于喹嗯啉类毒性作用机制尚不明确，必须按规定使用，严格控制用量和应用 对象，避免潜在的食品安全危害发生。但是喹嚼啉类的滥用和非法使用现象普遍， 在动物性食品中的残留已经成为危害消费者健康的一大隐患，开展喹嗯啉类分析方 法研究具有重要意义。喹嗯啉类分析方法研究的对象主要包括原形及其代谢残留标 示物。根据j e c f a 的评价，喹嗯啉类在动物体内的残留标示物为喹嗯啉2 - 羧酸 ( f i g d o r ，1 9 6 9 ：n a d an o 4 1 0 6 1 ；f a o w h o ，1 9 9 0 ；邱银生，2 0 0 3 ) 和3 - 甲基 喹嗯啉2 羧酸( m a u le ta l ，1 9 7 9 a ：1 9 7 9 b ：f a o w h o ，1 9 9 5 ) 。 饲料是喹嗯啉类药物在动物体内造成残留的主要源头。简便、灵敏的饲料中药 物的分析，可有效监测药物的使用情况，及时预警，降低残留危害程度。但是，目 前喹嗯啉类的分析方法研究样品基质主要为动物组织( m a c i n t o s he ta l ，1 9 8 4 ；a e r t s e ta l ，1 9 8 8 ：b i n n e n d i j ke ta l ，1 9 9 1 ：n a g a t ae ta l ，1 9 8 7 ；i v a n ae ta l ，1 9 8 8 ：曾振灵 等，1 9 9 5 ；王玉春，1 9 9 8 ；李剑勇等，2 0 0 2 ；艾晓辉等，2 0 0 3 ；李剑勇等，2 0 0 4 ) ， 饲料中的分析方法报道较少( g r a a f e ta l ，1 9 8 5 ；s p i e r e n b u r ge ta l ，1 9 8 8 ：l i na n dj e n g ， 2 0 0 1 ；v a ne ta l ，2 0 0 3 ；施杏芬等，2 0 0 4 ) ，而且测定的组分单一、前处理过程繁琐、 环境污染严重、结果准确度和精密度差、方法灵敏度低，不能满足禁用药物的监测 要求。简便、快速、灵敏的饲料中多种喹嗯啉类同时分析方法研究追在眉睫。 喹嗯啉类在动物可食性组织中的分析方法包括h p l c u v ( r o s ee ta l ，1 9 9 5 ：邱 银生等，2 0 0 3 ) 、g c e c d ( c a l ae ta l ，1 9 7 2 ) 、g c m s ( l y n c h ，1 9 8 2 ：l y n c he ta l ， 1 9 9 1 ) 、l c m s ( h o r i ee ta l ，2 0 0 4 ) 等，但样品前处理繁琐、试剂用量大、污染严 华中农业大学2 0 0 7 届博士学位论文 重、适用动物组织范围窄，灵敏度低，不能满足欧盟提出的用c c a 和c c p 评价分 析方法的灵敏度的要求( 2 0 0 2 6 5 7 e c ) 。目前国内外仅有h u t c h i n s o n 等( 2 0 0 2 ，2 0 0 5 ) 和s i n 等( 2 0 0 4 ) 报道的方法符合最新要求。h u t c h i n s o n 等( 2 0 0 2 ) 采用热碱水解 猪肝脏样品，液液提取，s c x 阳离子固相萃取小柱净化，l c 分离，m s 测定喹噫啉 2