（细胞生物学专业论文）桑黄巨原生质体生物学特性及其功能性研究.pdf

学位论文独创性声明 本人郑重声明： 1 、坚持以。求实、创新的科学精神从事研究工作。 2 、本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果。 3 、本论文中除引文外，所有实验、数据和有关材料均是真实的 4 、本论文中除引文和致谢的内容井，不包含其他人或其它机构已经 发表或撰写过的研究成果。 5 、其他同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了声明并表示了谢 意。 作者签名： 日期， 学位论文使用授权声明 本人完全了解南京师范大学有关保留、使用学位论文的规定，学 校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电 子版和纸质版i 有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论 文进入学校图书馆被查阅；有权将学位论文的内容编入有关数据库进 行检索；有权将学位论文的标题和摘要汇编出版保密的学位论文在 解密后适用本规定。 作者签名z 日 期： 2 0 0 5 器曩士毕业论文 桑黄巨原生质体生物学特性及其功能性研究 摘要：本实验以桑黄为实验材料分两个方面进行研究。第一方面主要对桑黄 的生物学特性进行研究，主要研究巨原生质体的分离、再生条件以及其显微和亚 显微结构的差别。实验结果表明：桑黄在3 的溶壁酶的作用下，3 7 酶解7 天即 可获得大量的巨原生质体，直径在( 1 5 1 7 ) um ：接种在再生培养基上，2 5 。c 培养 1 l 天后，即萌发出幼嫩的菌丝：透射电镜发现，桑黄巨原生质体的细胞结构有很 大的变化。首先，酶解时间的延长对细胞结构有一定的破坏作用，细胞膜出现部 分缺口。其次，邕原生质体最显著的特征就是液泡体积明显增大。最后，与普通 原生质体相比，巨原生质体线粒体的数目和体积也有相应的增多和变大，在木实 验中未发现细胞核增多这个现象。第二方面主要研究桑黄多糖的分离、纯化和牛 物学活性。桑黄子实体经过热水提取，减压浓缩，酒精沉淀，脱蛋白，乙醚、w 酮洗涤，真空干燥，得到桑黄水溶性粗多糖，经透析，s e p h a d e x g 一2 0 0 柱层析分 离纯化得到桑黄水溶性多糖纯品p i p s l 和p i p s 2 。两者经柱层析鉴定均为单一对 称峰，醋酸纤维薄膜电泳以及聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳均为单一条 带。根据洗脱体积与分子量的对数呈线性关系，本实验测得p i p s i 的分予量为4 7 1 0 5 i ( d ，p i p s 2 的分子量为8 6 1 0 4 k d 。经过提取纯化的多糖具有良好的生物学 活性，能够提高机体内细胞因子i l - 2 的表达：能够提高机体抗氧化酶的活性，提 高机体清除自由基的能力，减轻自由基对机体的损伤，能够改善肝脏局部的微循 环，及时修复损伤的肝细胞，减少谷草、谷丙转氨酶向血中的释放，对c c l 。引 起的化学性肝损伤具有很好的保护作用：本研究r 卜，桑黄多糖还初步显示对高脂 饲料引起的脂肪肝具有一定的抑制作用，主要是通过降低胆固醇和甘油三酯，提 高高密度脂蛋白的表达柬实现：体外抗肿瘤实验发现，桑黄多糖对体外培养的宫 颈癌细胞具有很明显的抑制效果，表现出良好的细胞毒性作用，对肝癌细胞的生 长也有一定的抑制作用。以上结果均说明，桑黄多糖具有良好的生物学活- 眭。 关键词：桑黄：亚显微结构：巨原生质体：生物学活性：保肝作用：体外培养：抗 肿瘤 2 0 0 5 最囊士毕盘论文 r e s e a r c ho i l b i o l o g i c a la c t i v i t yo fp h e l l i n u si g n i a r i u s sg i a n t p r o t o p l a s ta n di t sf u n c t i o n a b s t r a c t ：n l i se x p e r i m e n ti n d u d e st w op a n sb u s e d0 np h e l l i n u si g n i a r i s u 血 t h ef i r s tp a r t ，b i o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i co fg i g a n tp r o t o p l a s ts e p a r a t e df r o mp h e l l i n u s i g n i a r i u sw a ss t u d i e d w eo b s e r v e dt h a ti s o l a t i o n 、r e g e n e r a t i o no fg i a n tp r o t o p l a s ta n d i t su l t r a s t r u c t u r a p r o c e s s t h er e s u l t ss h o w e dt h a tp b e l l i n u si g n i a r i u sc o u l dy i e l dl a r g e n u m b e r so fg i a n tp r o t o p l a s td e a l e dw i t h 3 l y w a l l z y m ef o rs e v e r ld a y sw i t h i n 3 7 i t sd i a m e t e rr a n g e df r o m1 3t o2 0g r n t h em e c y l i af o r m e dw h e ng i a n tp r o t o p l a s t w e r ei n o c u l a t e do n r e g e n e r a t i o n m e d i u ma n dc u l t u r e df o re l e v e n d a y s a t 2 5 。c c o m p a r e dw i t hg e n e r a lp r o t o p l a s t ，g r e a tc h a n g e sh a p p e n e do ng i a n tp r o t o p l a s t b yt e m a tf i r s t ，c e l ls t r u c t u r eo fg i a n tp r o t o p l a s tw e r ea f f e c t e db yl o n gt i m ea n dt h e g a pc a m ei n t ob e i n gb e t w e e nc e l lm e m b r a n e ；s e c o n d l y , v a c u o l ei nt h eg i a n tp r o t o p l a s t b e c a m eo b v i o u s l yl a r g e rt h a nb e f o r e ；a tl a s t ，n u m b e r sa n dv a c u u mo fm ta l s ob e c a m e m o r e a n dl a r g e r i na d d i t i o n ，w ed i d n 7 td i s c o v e rt h ep h e n o m e n o no fn u c l e o l u s a b n o r m a l i nt h es e c o n dp a r t ，w a t e r - s o l u b i l a b l ep o l y s a c c h a r i d ew a se x t r a c t e db y b o i l i n gw a t e r 、i s o l a t e da n dp u r i f i e db y a l lv a r i e t i e so fb i o c h e m i c a lt e c h o n o l o g i e s t w o m a i na p e xw e r es e p a r a t e db y s e p h a d e x g 一2 0 0g e lc o l o u m g e le l e c t r o p h o r e s i s e x p e r i m e n t ss h o w e dt h a te a c hp o l y s a c c h a r i d ea p e xw a sv e r yp u r ea n dt h e i rm o l e c u l a r w e i g h t w e r e f o r t y - s e v e n h u n d r e dt h o u s a n da n do n eh u n d r e dt h o u s a n d r e s p e c t i v e l y p o l y s a c c h a r i d e h a dv e r y s t r o n gb i o l o g i c a l a c t i v i t i e sa f t e ri tw a s p u r i f i e d i tc o u l di m p r o v et h ee x p r e s s i o no fc y t o k i n e sl i k e 1 l 一2i nt h eb o d yo f r a t ，c o u l di n c r e a s ea n t i o x i d a n te n z y m ea c t i v i t ya n de n h a n c et h ea b i l i t yo fb o d yt o s c a n v a g ef r e er a d i c a l sa n dr e d u c et h ed a m a g ec a u s e db yf r e er a d i c a l s ，m e a n w h i l ei t c o u l dp r o m p tm i c r o c i r e l e so fl i v e ra n dr e s t o r el i v e rc e l l s d e c r e a s et h er e l e a s eo f 脚 a n da l t , s ot h ep o l y s a c c h a r i d eh a dp r o t e c t i v ee f f e c to nc h e m i c a lf i v e ri n j u r yc a u s e d b yc c h d u r i n gt h es t u d y , w eo b s e r v e d t h a t p o l y s a c c h a r i d e c o u l di n h i b i t t h e a p p e a r a n c eo ff a t t yl i v e r i nv i t r oa n t i t u m o re x p e r i m e n tp r o v e dt h a tp o l y s a c c h a f i d e p o s s e s s e dd i r e c tc e l lt o x i c i t yb e c a u s e o fi t si n h i b i t i o ne f f e c to nh e l at u m o rc e l l ! 丝型垡丝丝 k e y w o r d s ：p h e l l i n u si g n i a r i u s ；u l t r a s t r u c t u r e ；g i a n tp r o t o p l a s t ；b i o l o g i c a l a c t i v i t y ；h e p a t i c p r o t e c t i v ee f f e c t ；i nv i t r oc u l t u r e ；a n t i t u m o r 3 前言 2 0 0 5 强硬士毕韭 幺文 一、桑黄的概述 “桑黄”为担子菌亚f ( b a s i d i o m y c o t i n a ) ，层菌纲( h y m e n o m y c e t e s ) ，多孔菌目 ( p o l y p o r a l e s ) ，锈革孔菌 l - ( h y m e n o c h a e t a c a e ) ，针层孔菌属( p h e l l i n u s ) 的真菌，国 外主要分布在日本、韩国、朝鲜、俄罗斯、澳大利亚、北美、中南美等地。国内 集中分布区在黑龙江省东部乌苏里江与兴凯湖之间，西北地区陕两与甘肃交界的 “子午岭”自然保护区，东北的长自山林区、哈尔滨与吉林市之间的老爷岭、张 广才岭等地。另外，西南各省区亦出产少量的桑树生“桑黄”。其予实体入药，味微 苦肩利五脏、软坚、排毒；止血、活血；和胃止泻，民间用以治疗淋病、崩漏带下、 疮窟积聚、癖软、脾虚泄泻。因其良好的疗效而被誉为“菌中极品”，目前在东 南亚及国际市场上很受欢迎。有关桑黄的各类研究也屡见不鲜，在报道的文献中， 被称为“桑黄”的拉丁学名就有p h e u i n u sb a u m i i ，p h e l l i n u si g n i a r i u s , p h e l l i n u s l i n t e u s 三种。戴玉成【2 】等通过对模式标本的比较，给桑黄一个新的区域划分，认 为p h e l l i n u sb a u m i i , p h e l l i n u si g n i a r i u s 存在于中围及东亚地区，而p h e l l i n u sb a u m i i 的近似种p h e l l i n u sl i n t e u s 则存在中美地区。事实上，p h e l i i n u sb a u m i i , p h e l l i n u s i g n i a r i u s , p h e t l i n u st i n t e u s 三者在宏观和微观上是没有太人的差别。刘春辉i j i 等人 在前人的基础上，对三者的子实体、卣丝体形态以及孢子的结构进行了总结：子 实体多年生，无柄，木质化，蹄形或半球形，颜色黄褐色或咖啡色，老熟后龟裂。子实 层中通常有大量的锥形刚毛存在。菌丝均为二体型菌丝系统，其中e b a u m i i 的骨 架菌丝平行于菌管排列是其与其他种区分的特征之一。e b a u m i i 的担孢子广椭圆 形，大小为( 33 45 ) umx ( 24 35 ) u1 t i ，而e l i n t e u s 的担孢子近球形，大小为( 4 3 55 ) um ( 39 48 ) u1 t i ，明显比前者大，是两者的本质区别。 二、桑黄化学成分的分析 作为真菌，桑黄与其它药用真菌在主要化学成分上没有太大的差别。先前已 经报道过桑黄含有多糖、酚类色素、过氧化物酶、黑色素等。随着桑黄的广泛应 用和深入研究，越来越多的有效成分被细化以及其它成分被分离和鉴定。白日霞 4 1 等用o 1 氡氧化纳从r l i n t e u s 中提取得到多糖r l ，经鉴定为甘露聚糖。刘金荣 5 1 等将p _ i g i l i a r i u s 经石油醚提取，乙酸乙酯分馏得到麦角甾醇。莫顺燕 6 等首次从 4 2 0 0 5 甚馥士攀蹙论文 e i g n i a r i u s 中分离获得5 个黄酮和2 个香豆素类化合物：柚皮素、樱花亭、二氢莰 非素、7 甲氧基二氢莰非素、北美圣草素、香豆素、莨菪亭。并又在随后的研究 中分离到2 种新的二氢黄酮衍生物：47 ，5 ，7 三羟基8 邻苄基二氢黄酮和4 ，5 , 7 三羟基6 邻苄基二氢黄酬【7 1 。k i mg y 闻等从e l i n t e u s 中分得酸性蛋白聚糖。此 蛋白聚糖含7 22 的多糖和2 23 的蛋白质，蛋白聚糖巾的糖由甘露糖、半乳糖、 葡萄糖、阿拉伯糖和木糖组成，蛋白部分由天冬氨酸、谷氨酸、阿氨酸、甘氨酸、 丝氨酸聚合而成。 三、桑黄的药理研究 3 1 抗发炎作用 k i mg y 9 1 等使用高剂量的脂多糖( 8 m g k g ) 诱导, j , 鼠感染性休克( 败m 症) ，血 清中的细胞因子升高，用从p 1 i n t e u s 予实体中分离出的酸性多糖预处理小鼠( 1 0 0 m g k g ) ，发现能有效抑制细胞因子的上升( t n f y 、1 l 一1 2 、i l 一1b 的上升量分别f 降6 8 、4 5 、2 3 ) ；另外此多糖能调和细胞因子的释放以及b 细胞、巨噬细胞 中m h c i i 类分子的水平；此多糖的体内给药还能降低缸清中i l 2 ，i f n y 和t n f a 的含量，并加强由体外脂多糖激活的巨噬细胞和t 细胞的自发凋亡，缓和败血症 起到抗发炎的作用。j a n gb s 【l0 】等使用5 0ug 脂多糖侵染小鼠气管，发现在支气 管灌洗液中，总的臼细胞数由( o3 - - + _ 01 ) 1 0 6 升为( 2 4 4 0 4 ) 1 0 6 ，中性白细胞数 由( o0 9 + _ 00 6 ) 1 0 6 升为( 18 4 - o3 ) 1 0 6 ，t n f - d 的量h q ( 2 0 0 + 1 8 0 ) p g m l 升为 f 1 2 0 0 + 1 4 0 ) p g m 1 i l 一1b 的量f h ( 2 2 0 _ + 9 8 ) p g m l 升为( 6 5 0 + _ 8 0 ) p g m l 。用p b a u m i i 子实体水提液( p b e ) 腹腔注射预处理小鼠( 2 0 m g k g ) ，发现除t n f - 的量外，总的白 细胞数，中性白细胞数，i l 一11 3 的量都与生理盐水处理后的小鼠的相似。这个结果 表明，p b e 能够抑制炎症细胞( 包括中性白细胞、i l ，1 日) 的量的增加，在预防人类急 性肺炎中起重要作用。 3 2 抗氧化作用 s o n g y s 等发现e l i n t e u s 子实体多糖1 0ug m 1 抑制率( 3 0o l 27 2 ) 卜一 3 0 0 ug m 1 抑制率( 8 55 0 42 0 ) 范围内能直接清除稳定的d ，d 一二苯基0 苦基 肼基游离基( d p p h ) ，e c s o ( 半有效浓度) 为2 2 0 7ug m l ；也抑制过氧化脂质( l p o ) ， i c 5 0 ( 半有效抑制浓度) 为4 8 4 5ug m l ；3 0 0u r n l 时能完全抑制尿酸的形成，对黄 2 0 0 5 届曩毕业论之 嘌呤的i c c o 为1 4 68 0 l z 咖l 。 3 3 抑制肿瘤生成 3 3 1 抑制血管新生 s o n gy s l 等用鸡胚胎绒毛尿囊膜( c a m ) 化验法检测e l i n t e u s 子实体多糖 的抗新生血管作用，表明作用依赖于剂量，当浓度为2 0ug e g g 时，抑制率为7 89 。 3 3 2 抗突变 s h o n y h 旧等发现e l i n t e u s 提取物( p l 】，p l 一1 1 ) ，p i g n i a r i u s 提取物 ( p i i ，p i - i i ，p i f r d 对直接诱变剂：四硝肇苯二胺( n p d ) ( 3 40 ) ，叠氮化钠( n a n 3 ) ( 3 0 0 5 88 ) ；间接诱变剂：2 一氨基芴( 2 一a f ) ( 2 23 3 72 ) ，苯并芘( b ia 】p ) ( 3 2 7 5 62 ) 有很强的抗诱变作用。另外还发现它们能提高谷胱甘肽( g s h ) 的水半 在诱发醌氧化还原酶( q r ) 、谷胱甘肽转移酶( g s t ) 的活力，预防癌症等方面有重要 作用。 3 3 3 钝化酶、阻止磷酸化 c h oj h 旧等将e l i n t e u s 子实体醇提物( 5l - t g m a 和2 5ug ，1 1 1 1 ) 加入鼠肝上皮细 胞( w b f 3 4 4 ) 培养体系共培养2 4h ，再加入h 2 0 2 ( 5 0 0 m ) 共培养1h ，结果发现 h 2 晚篚抑制细胞缝隙连接通讯( g j i c ) ，引起连接蛋白4 3 重度磷酸化，激活胞外调 节蛋白激酶( e r k i 2 ) ，p 3 8 丝裂原活化蛋白激酶( p 3 8 m a p k ) 和c - j u n n 末端激酶。 p l 预防g j i c 被抑制，阻止连接蛋白4 3 重度磷酸化，钝化e r k l 2 ，p 3 8 m a p l ，从而 抑制癌症的激发，起到抗癌作用。 3 3 4 其他 李国俊等以s 一1 8 0 和l 一1 2 1 0 肿瘤为模型。检测p 1 i n t e u s 子实体( 2 5 9 ，k g ) 、菌 丝体( 2 0 9 k g ) 以及菌丝体粗多糖( o ，5 0 ，1 0 0 ，2 0 0 ，4 0 0 m g m 1 ) 抑制肿瘤的效果，结果：子 实体对s - 1 8 0 抑制率为3 6 8 ；菌丝体对s - 1 8 0 细胞抑制率为4 7 2 ；菌丝体多糖对 s - 1 8 0 抑制率为5 05 ；对l - 1 2 1 0 抑制率为5 0 。温克1 等以小鼠移植性胃癌 ( m f c ) 并ds 1 8 0 肿瘤为模型，e l i n t e u s ( 0 5 9 k g ) 灌胃给药，连续1 4d ，发现e l i n t e u s 对 m f c 的抑制率为4 3 0 9 ，对s - 1 8 0 的抑制率为4 6 0 7 ：单核吞噬细胞的吞噬指数 k 和吞噬系数a 明显增高，并可提高腺系数和胸腺系数，促进c o n a 诱导的t 淋巴 细胞增殖反应。h a ns b 【1 5 i 等检测了e l i n t e u s 菌丝体多糖和阿霉素对b 1 6 f 1 0 黑 右 2 0 0 5 屠硬士毕业论文 素瘤细胞、n c i h 2 3 人肺癌细胞的生长和转移的影响。结果：b 1 6 f 1 0 腹腔注射( 记 为0d ) ，对照组小鼠第2 0d 存活率0 ，p l ( 1 0 0 m g k g ) 单独作用，第4 0d 存活率1 0 ， 阿霉素单独作用，第4 0d ( o 1 m g k g ) 存活率0 ，第6 0d ( 0 3 m g k g ) 存活率2 0 ，此菌 丝体多糖( 1 0 0 m g k g ) 与阿霉素( 0 1 m g k g ) 复合作用，第6 0d 存活率 4 0 ，p l ( 1 0 0 m g k g ) 与阿霉素( 0 3 m g k g ) 复合作用，第6 0d 存活率达9 0 ；而且所有 存活的小鼠无肿瘤发生，体重也没变轻。n c i - h 2 3 皮下注射右腹，此菌丝体多糖 ( 1 0 0 m g k g ) 作用，肿瘤重量卜i 降5 7 ：以b 1 6 f 1 0 黑素瘤细胞建立肺部转移模型，此 菌丝体多糖( 1 0 0 m g k g ) 使b 1 6 f 1 0 转移f 降2 6 ，阿霉素( 1 m g k g ) 使转移下降为 3 1 ，阿霉素( 3 m g k g ) 使转移1 降4 4 ，p l ( 1 0 0m g k g ) 与阿霉素( 1m g k 曲使转移下 降4 6 ，此菌丝体多糖( 1 0 0m g k g ) 与阿霉素( 3m g k g ) 使转移下降4 0 。说明阿霉 素和多糖进行复合治疗，能有效的抑制肿瘤生长，增强患者的免疫力。 3 4 增强免疫力 3 4 1 对t 淋巴细胞的影响 k i m h m 【l “等采用单向混合淋巴细胞培养( o n e w a y m l r ) 和双向混合淋巴细 胞培养( t w o w a y m l r ) 2 种方法检测e l i n t e u s 菌丝体多糖对抗原引起的t 淋巴细胞 增殖的影响，结果：此菌丝体多糖力入量为0 0 1 m g m l ，细胞增殖3 0 2 ，加入量为 0 i m g m l ，细胞增殖5 1 2 ；此菌丝体多糖不仅使t 细胞增殖，而且促进其分化，p 3 8 8 细胞检测其分化细胞一自然杀伤细胞( n k ) 的毒力，体内单一注射此菌丝体多糖 ( 1 0 0m g k g ) ，毒力提高1 6 5 ，体外此菌丝体多糖处理，浓度为o 1 m g m l 时，毒力提高 1 6 1 ，浓度为l m g m l 时，毒力提高2 6 0 。 3 4 2 对b 淋巴细胞的影响 k i m g y n 7 j 等胸腺嘧啶标识法检测发现p 1 i n t e u s 子实体蛋白多糖( 2 0 0 m e f l k g ) 处理过的小鼠脾淋巴细胞( m s l s ) 增加4 倍，细胞数量变化的主要是c d l 9 + ，即目标 是b 细胞；也加强辅助信号分子，c d 8 0 和c d 8 6 的表达。 3 4 3 对细胞因子的影响 p a r k s k c l 8 等发现p 1 i n t e u s 子实体多糖( 1 0 01 1 n n ) 能诱导m h c i 和c d li c + 树突状细胞( d c ) 表面共刺激分子，c d 8 0 ，c d 8 6 的上调，i l 一1 2 p 4 0 p 7 0 的表达量由 2 4 9 0 上升为1 9 5 ，且不受多粘菌素b ( p b ) 的抑制；此子实体多糖能促进d c 同分 2 0 0 5 屠硬士事业论文 异构免疫能力，儿一2 提高2 倍多【由( 7 2 5 - t - 5 6 ) n e g i l l l 上升为( 1 7 5 9 4 3 ) n g m l l ；此外， 此子实体多糖诱导d c 迁移到淋巴组织，激活蛋白激酶c ( p k c ) 和磷酸化蛋白酪氨 酸激酶( p t k ) ，解除表面细胞和i f 一1 2 表达的抑制。总之，p l 加强d c 形态和功能上 的成熟，起到增强免疫的作用。k i mg y 17 】等试验发现p f i n t e u s 子实体酸性多糖 ( 1 0 0 m g k g ) ) 能提高腹膜巨噬细胞产生n o 的量，加强巨噬细胞的破坏瘤活力( 6 升高到4 8 ) ；p l ( 2 0 0l a l i l l ) 直接增加巨噬细胞蛋白激酶c ( p k c ) 活力，磷酸化酪氨 酸。 3 4 4 对抗体形成细胞的影响 k i mh m 1 1 9j 等试验中使用抗原如：脂多糖( l p s ) 、三硝基甲苯脂多糖 ( t n p l p s ) 、绵羊红细胞( s r b c ) 体内外刺激b 细胞产生k m 来检测e f i n t e u s 菌丝 体多糖在抗体产生中的作用，结果：此菌丝体多糖( 1 0 0 m g k g ) 与s r b c 一起注入体 内，抗体形成细胞增加2 5 0 ，体外此茵丝体多糖( 1 0 0 0ug m 1 ) 作用，抗体形成细胞 增加1 8 7 。 3 5 保护肝脏的作用 张万同2 0 l 等用p i g m a r i u s 子实体提取物灌胃给药( 5 9 k g ) ，发现能显著降低肝 纤维化人鼠的全血粘度、红细胞压积和红细胞刚性指数，【f 1 1 浆粘度和红细胞聚集 指数，改善血液动力学性能，提高肝区微循环，起到抗肝纤维化的作用；另外，血清氨 基酸转移酶水平显著降低，蛋白合成能力增强，血清活性氧显著减少，肝组织超氧 化物歧化酶活力提高；血清几_ 4 水平降低，i f n y 显著增高，表明r i g n i a r i u s 能抗脂 质过氧化具有调节炎症因子水平起到保护肝细胞的功能，此外，还能抑制h s c 细 胞和成纤维细胞的增殖及胶原合成能力，并有助于肝细胞再生等。j e o nt i 2 1 1 等观 察了r l i n t e u s ( 发芽糙米水提物培养) 菌丝提取物( e p b ) 对c c h 侵染的s d 鼠肝的作 用，发现e p b 能有效的抑制c c h 引起的过氧化物酶和超氧化物歧化酶活力的f 降 使肝过氧化物下降到1 0 。另外，e p b 直接阻碍c y p 2 b i 的表达，起到保护肝脏， 预防损伤的作用。s h o ny h 【2 2 1 等在培养基中加入o 1 0 桑木提取液，液体培养 e l i n t e u s ，观察_ r 发酵液多糖( b ) 和菌丝体多糖( m ) 对鼠肝微粒细胞色素p 4 5 0 ( c y p ) 的抑制作用，结果发现添加5 桑木提取液培养所得的b 对c y p l a l 、1 a 2 、2 b l 活性，添加1 0 桑木提取液培养所得的b 对c y p 2 8 1 活性有很强的抑制作用，表明 r f i n t e u s 多糖作为化学预防剂在预防肝损伤中有很大的潜能。 3 6 预防和治疗关节炎 k i mg y t 2 3 i 等以骨胶原诱导的关节炎( c 认) 作为自身免疫性疾病的实验模 型，r l i n t e u s 子实体蛋白聚糖口服给药( 3 次2 d ，剂量2 0 0 m g k g ) ，并记为第o d ，第7 d 用完全弗式佐) r j ( c f a ) f f , 化的i i 型骨胶原( 1 0 0g t 曲皮下注入小鼠尾部，第2 1 d 加强 注入爪垫；一组在第2 8 d 口服给药( 3 次，2 d ，剂量2 0 0 m g k g ) ；另设一组对照。结果发 现第1 组c i a 受到抑制，抑制作用与抗i i 型骨胶原的i g g 、i g g 2d 以及各种细胞 因子( 包括儿1 2 、t n f a 、i f n y ) 的下降有关。表明此蛋白聚糖虽然没有明确 的抗i i 型骨胶原抗体作用，但在预防和治疗自身免疫性关节炎如类风湿上有重要 作用。 四、桑黄的应用前景 桑黄由于其显著的治疗功效，现在正在受到前所未有的关注，目前，国内外 不少医药企业，生物公司己在生产销售桑黄的各种产品，这类产品也只是初级产 品，仅仅是刘原料进行简单的加工处理，没有太多的科技含量。同时，高额的利 润使得野生的桑黄被火量的采摘，桑黄的生长周期较长，自然资源极度缺乏，不 合理的开采使得桑黄不能进行正常的繁殖。目前，灵芝人工栽培已经取得成功， 但桑黄人工栽培成功的例子在国内还未见报道，日本和韩国也是刚刚起步，还没 有形成规模，显然完全靠野生资源是不能满足市场的需求。因此，解决桑黄的人 t 栽培和提高桑黄原料加工的科技含景，更大限度地发挥桑黄的作用，是今后发 展的一个趋势。 参考文献 1 刘波著中国药用真菌太原：山西人民出版社，1 9 7 4 ：7 l - 7 3 2 戴玉成药用担子菌鲍氏层孔菌( 桑黄) 的新认识中草药，2 0 0 3 ，3 4 ( 1 ) ： 9 4 9 5 3 刘春辉，陈体强，林跃鑫药用真菌桑黄的研究进展菌物研究，2 0 0 4 ，2 ( 2 ) 4 白日霞，陈华君，自日丽碱提水溶针裂蹄多糖r 1 的研究叽天然产物研究与开 发，1 9 9 5 ，7 ( 3 ) ：4 14 5 5 刘金荣，江发寿，李艳，等药用真菌桑黄甾类成分的提取和鉴定 j 农垦医 学，1 9 9 8 ，2 0 ( 3 ) ：1 4 1 9 2 0 0 5 器硬士毕业论文 6 莫顺燕，杨永春，石建功桑黄化学成分研究【j 中国中药杂志，2 0 0 3 ，2 8 ( 4 ) ：3 3 9 3 4 1 7 莫顺燕，杨永春，石建功桑黄黄酮a 和b 的分离与合成【j 化学学 报，2 0 0 3 ，6 1 ( 7 ) ：1 1 6 l1 1 6 3 8g i y o u n gk i m ，h y u n g s i k p a r k ，b y o n gh y o k n a m ，e ta 1 p u r i f i c a t i o na n d c h a r a c t e r i z a t i o no fa c i d i cp r o t e o h e t e r o g l y c a nf r o mt h ef r u i t i n gb o d yo fp h e l l i n u l i n t e u s ( b e r k m a c u r t i s ) t e n g j b i o r e s o u r t e c h n o l ，2 0 0 3 ，8 9 ( 1 ) ：8 1 8 7 9g iy o u n yk i m s ui nr o h ，s o o nk e wp a r k ，e ta 1 a l l e v i a t i o no fe x p e r i m e n t a ls e p t i c s h o c hi nm i c eb ya c i d i cp o l y s a c c h a r i d ei s o l a t e df r o mt h em e d i c i n a lm u s h r o o m p h e l l i n u sl i n t e u s j b i o l o g i c a l & p h a r m a c e u t i c a lb u l l e t i n 2 0 0 3 ，2 6 ( 1 0 ) ：1 4 1 8 - 1 4 2 3 10b o ms uj a n g ，j o n gc h u nk i m ，j a es a n gb a e ，e ta 1 e x 廿a c t so fp h e l l i n u s 垂l v u sa n d p h e l l i n u sb a u n t i ii n h i b i tp u l m o n a r yi n f l a m m a t i o ni n d u c e db yl i p o p o l y s a c c h a r i d e i nr a t s f j b i o t e c h n o ll e t t 2 0 0 4 ，2 6 ( 1 ) ：3 t 一3 3 11s u ns e o ns o n g ，s u nh y o u n gk i m ，j a eh o o ns a ，e ta 1 a n t i a n g i o g e n i c ，a n t i o x i d a n t a n de x a n t h i n e o x i d a s ei n h i b i t i o na c t i v i t i e so ft h em u s h r o o mp h e l l i n u sl i n t e u s j j o u r n a lo f e t h n o p h a r m a c o l ，2 0 0 3 ，8 8 ( 1 ) ：1 1 3 - 1 1 6 12y u nh e e s h o n ，k y u n g s o o n a m a n t i m u t a g e n i c i t y a n di n d u c t i o no f a n t i c a r c i n o g e n i cp h a s e i e n z y m e sb yb a s i d i o m y c e t e s j j o u r n a l o f e t h n o p h a r m a c 0 1 2 0 0 1 ，7 7 ( 1 ) ：1 0 3 1 0 9 1 3j o n gh oc h o ，s u n gd a ec h o ，h o n gb oh u ，e ta 1 t h er o l e so fe r k l 2a n dp 3 8 m a p k i n a s e si nt h ep r e v e n t i v em e c h a n i s m so fm u s h r o o mp h e l l i n u sl i n t e u sa g a i n s tt h e i n h i b i t i o no f g a p j u n c t i o n a li n t e r c e l l u l a rc o m m u n i c a t i o nb yh y d r o g e np e r o x i d e j c a r c i n o g e n e s i s ，2 0 0 2 ，2 3 ( 7 ) ：1 1 6 3 1 1 6 9 1 4 温克，陈劲，李红，等桑黄等四种抗癌药物抗癌活性比较 j 吉林大学学报医学 版，2 0 0 2 ，2 8 ( 3 ) ：2 4 72 4 9 1 5s a n gb a eh a n ，c h a n gw o ol e e ，y o u n gj i nj e o n ，e ta 1 t h ei n h i b i t o r ye f f e c to f p o l y s a c c h a r i d e si s o l a t e df r o mp h e l l i n u sl i n t e u so nt u m o rg r o w t ha n dm e t a s t a s i j i m m u n o p h a r m a c o l o g y , 1 9 9 9 ，4 1 ( 2 ) ：1 5 7 1 6 4 16h w a nm o o kk i n ，s a n gb a eh a n ，g o ot a e go h ，e ta 1 s t i m u l a t i o no fh u m o r a la n d c e l lm e d i a t e di m m u n i t yb yp o l y s a c c h a r i d ef r o mm u s h r o o mp h e l l i n u sl i n t e u s j 一1 0 i n t e r n a t i o n a lj o u r n a lo f i m m u n o p h a r m a c o l o g y , 1 9 9 6 ，1 8 ( 5 ) ：2 9 5 3 0 3 1 7g iy o u n gk i m ，y a n gh y oo h ，y e o n gm i np a r k a c i d i cp o l y s a c c h a r i d ei s o l a t e d f r o mp h e l l i n u sl i n t e u si n d u c e sn i l r i c o x i d em e d i a t e dt u m o r i c i d a la c t i v i t yo f m a c r o p h a g e st h r o u g hp r o t e i nt y r o s i n ek i n a s ea n dp r o t e i nk i n a s ec f j b i o c h e m b i o p h y sr e sc o m m u n ，2 0 0 3 ，3 0 9 ( 2 ) ：3 9 9 - 4 0 7 i8s o o nk e wp a r k ，g i y o u n gk i m ，j a ey o u n gk i m ，e ta 1 a c i d i cp o l y s a c c h a r i d e s i s o l a t e df r o mp h e l l i n u sl i n t e u si n d u c ep h e n o t y p i c a la n df u n c f i o n a lm a t u r a t i o no f m u r i n ed e n d r i t i cc e l l s j b i tc h e mb i o p h y sr e sc o m m u n ，2 0 0 3 ，3 1 2 ( 2 ) ：4 4 94 5 8 1 9g i y o u n gk i m ，s o o n k e wp a r k b ，m i nk il e e b ，e ta 1 p r o t e o g l c a ni s o l a t e d f r o m p h e l l i n u sl i n t e u sa c t i v i t i e sm u r i n eb l y m p h o c y t e sv i ap r o t e i nk i n a s eca n d p r o t e i n t y r o s i n ek i n a s e j i n t e r n a t i o n a li m m u n o p h a r m a c o l o g y , 2 0 0 3 ，3 ( 9 ) ：1 2 8 1 1 2 9 2 2 0 张万国桑黄抗肝纤维化及其作用机理的研究【d 】： 博上学位论文 上海：第二 军医大学，2 0 0 2 2 1t a e l lj e o n ，s e o n gg uh w a n g ，b e o n gq uu m ，e ta 1 e x t r a c t so fp h e u i