分光光度法测定水果.ppt

分光光度法测定水果、蔬菜及药物中的抗坏血酸,综合性实验,一、背景知识,抗坏血酸，也叫维生素C，易溶于水。自然界存在两种形式的维生素C：抗坏血酸（还原型VC）和脱氢抗坏血酸（氧化型DHVC），抗坏血酸易被氧化成脱氢抗坏血酸，脱氢抗坏血酸又易还原成抗坏血酸。化学名称为：L-3-氧代苏己糖醛酸内酯，分子式为C6H8O6，相对分子质量：176.13。两种天然形式都可被人体利用，体内也能有效地利用两种合成的L-抗坏血酸。,维生素C是目前人类所知道的用途最为广泛的治疗药，预防维生素C缺乏症，提高动物免疫力和抗应急能力，小剂量维生素C可以预防和治疗坏血病，大剂量VC可以提高动物在疾病、逆境和生理应急等情况下的抵抗能力，它帮助人体对铁的吸收，可防止有害(低密度)胆固醇的氧化。维生素也是非常有效的自由基清除剂。但维生素C极不稳定，它很容易氧化，加热、暴露于空气中，碱性溶液及金属离子Cu2、Fe3等,都能加速其氧化，易受光、湿和强力挤压等因素影响而被破坏。维生素C广泛存在于新鲜植物如水果、蔬菜中，由于植物中的有机酸及其他抗氧化剂的保护使它免受破坏。,二、实验目的1、掌握铁（II）-邻菲罗啉配合物测定抗坏血酸的原理与方法；2、理解铁（II）-邻菲罗啉配合物测定抗坏血酸的条件；3、掌握利用配位掩蔽法消除光还原作用的方法；4、掌握用Excel电子表格法绘制吸收曲线及标准曲线的方法；5、了解抗坏血酸测定的意义，6、了解样品处理与制备、含量测定的全过程。,三、实验原理,Fe2+3Phen（邻菲罗啉）=Fe(Phen)32+(红色，max=510nm)Fe3+(剩余)+3Phen（邻菲罗啉）=Fe(Phen)33+Fe(Phen)33+h=Fe(Phen)32+Fe(Phen)33+6F-=FeF63-+3Phen,四、仪器与试剂仪器：电子天平；分光光度计（1厘米比色皿）；移液管（5、10mL）；比色管或容量瓶(25或50mL)试剂：100g/LFe3+标准溶液；0.1%（W/V）邻菲罗啉(Phen)溶液；40g/mL抗坏血酸；0.2mol/LHAc-NaAc缓冲溶液（pH4.75）；1%（W/V）氟化钠溶液；1%HAc溶液。,五、实验步骤,1、吸收曲线的绘制,加入准确吸取的40g/L抗坏血酸标准溶液5.00mL置于系列洁净50mL容量瓶中，依次加入100g/LFe3+标准溶液2.0mL，摇匀；再加入5.0mL0.1%（W/V）邻菲罗啉(Phen)溶液，摇匀；加入5.0mLHAc-NaAc缓冲溶液，摇匀；再加入2.0mL1%（W/V）氟化钠溶液，用水稀释至50mL，摇匀。同时制作相应的试剂空白。以相应试剂空白作参比，测定不同波长条件下的吸光度A，绘制吸收曲线，选择最大测定波长max。,2.标准曲线的绘制,加入准确吸取的40g/L抗坏血酸标准溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00mL分别置于系列洁净50mL容量瓶中，依次加入100g/LFe3+标准溶液2.0mL，摇匀；再加入5.0mL0.1%（W/V）邻菲罗啉(Phen)溶液，摇匀；加入5.0mLHAc-NaAc缓冲溶液，摇匀；再加入2.0mL1%（W/V）氟化钠溶液，用水稀释至50mL，摇匀。以相应试剂空白作参比，在最大测定波长max处测定吸光度As,用Excel电子表格绘制标准曲线，并计算回归方程。,3、水果或蔬菜汁样品溶液的制备,新鲜水果去皮、去核后,准确称重,组织捣碎机中捣碎,转移至烧杯中,50mL1%HAc溶液浸泡、混匀,脱脂棉粗滤,精滤液转移至250mL容量瓶中,1%HAc溶液定容,摇匀，静置,蔬菜去根，洗干净，沥干,待测,或,4、药片溶液的制备,VC片20片,准确称重,求平均片重后研细,取适量(相当于VCl00mg)精确称重后,置1000mL容量瓶,加水到刻度,摇匀，并过滤,弃去初滤液，准确吸取续滤液2mL置50mL容量瓶中,待测,六、数据记录和结果处理,1、吸收曲线的绘制,分光光度计型号：比色皿厚度：年月日,2、标准曲线的绘制与待测样品测定,附:光度计的使用说明,数据处理要求,1要求利用计算机采用用Excel电子表格绘制吸收曲线,要求图形美观,大方,坐标选取合理;2要求利用计