《微生物实验室培养》.ppt

课题1微生物的实验室培养,霉菌,细菌,酵母菌,放线菌,上图都是一些常见的微生物，微生物是结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物，与人类关系密切。人工的培养和分离，使得我们更进一步认识微生物。今天我们就来学习如何培养和分离大肠杆菌！,1.通过阅读教材，结合观看培养基的相关素材，认识有关培养基的基础知识。2.通过观看无菌操作视频，结合教师详细讲解，能够掌握无菌操作技术。3.通过观看实验视频，结合实际实验操作，能够完成纯化大肠杆菌的操作。,微生物,1,培养基,2,无菌技术,3,1,基础知识,微生物,1,1.特点：结构都相当简单,个体多数十分微小，通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构，且体内一般不含有叶绿素，不能进行光合作用。,2.微生物包括五类,病毒细菌放线菌真菌原生动物,培养基,2,培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。,固体培养基液体培养基半固体培养基,1.培养基的类型,成分区别：琼脂,2.培养基的用途,液体培养基：增菌、工业生产固体培养基：纯化（分离），鉴定、活菌计数、保藏菌种半固体培养基：动力检测,3.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方,大肠杆菌配方酵母提取物：0.25g蛋白胨：0.5gNacl：0.5g琼脂：1g水：50ml,4.培养基内所含的基本物质,一般营养物质水、碳源、氮源、无机盐其他物质pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。,无菌技术,3,1.无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。无菌操作是培养微生物成功的关键！,（1）消毒定义：,2.消毒与灭菌的概念及两者的区别,（2）灭菌的定义：,是指杀灭病原微生物的方法。,是指杀灭或清除环境中一切微生物（包括芽胞、孢子）的方法,(1)消毒的方法：,常用的消毒与灭菌的方法,1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min；2、巴氏消毒法：70-75下煮30min或80下煮15min；3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源；4、紫外线消毒；,1.灼烧灭菌,(2)常用灭菌的方法,2.干热灭菌：160-170下加热1-2h。3.高压蒸气灭菌：100kPa、121下维持15-30min.,制备培养基,1,纯化大肠杆菌,2,实验操作,2,制备牛肉膏蛋白胨培养基,1,倒平板操作,2,灭菌后的培养基在无菌操作台上倒入4个培养皿中，倒后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。,1.培养基灭菌后，需要冷却到50左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？,答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。,2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。,二纯化大肠杆菌,1.平板划线法：1）灼烧接种环；2）接种环冷却后，蘸取带菌培养物；3）在近火焰处，让带菌接种环在固体培养基上划线。,2-3.从上次的末端开始，交叉23条线,4.最后的划线不能与第一区相连。,注意事项:1.接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次。2.划线首尾不能相接。3.划线后，培养皿倒置培养1224h。,分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选菌株的最简便方法之一。,2.稀释涂布平板法,稀释操作,注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰12cm处.,大肠杆菌分离后保存,5,1.临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4冰箱保存。2.长期保存：甘油冷冻管藏法,（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温12d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。,实验操作成果评价,3,（二）接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。,（三）是否进行了及时细致的观察与记录培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。,微生物的实验室培养,培养基,培养基的类型,培养基的营养物质,无菌技术,实验室常用的消毒方法,实验室常用的灭菌方法,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,计算、称量、溶化、灭菌、倒平板,纯化大肠杆菌,平板划线法,稀释涂布法,结果分析与评价,课题延伸,1关微生物营养物质的叙述中，正确的是（）A.是碳源的物质不可能同时是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外的无机物只提供无机盐D.无机氮源也能提供能量,D,解析：A、B选项的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源；有的碳源可同时是氮源；有的碳源同时是能源；有的碳源同时是氮源，也是能源。对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。,解析：发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），A正确；