（生药学专业论文）三黄泻心汤分煎与合煎有效成分对比研究.pdf

贵阳中医学院硕士学位论文相关声明 原创性声明 本文声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含 其他人已经发表论文中撰写过的研究成果，也不包含为获得贵阳中医学院或其他 单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均 已在论文中作了明确说明。 作者： 缈忽 同期：办泐年j 月弓j 同 关于学位论文使用授权说明 本文了解贵阳中医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留 学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内 容，可以采用复印、缩印或其他手段保存学位论文；学校可根据国家或贵州省有 关部门规定送交学位论文。 氆殛脚等：弘皖何雠州日 目录 中文摘要1 英文摘要3 前言5 正方部分6 第一章三黄泻心汤中药复方颗粒和中药配方颗粒的制备6 1 药材的鉴别和含量测定6 1 1 大黄药材的鉴别和含量测定6 1 2 黄连药材的鉴别和含量测定7 1 3 黄芩药材的鉴别和含量测定7 2 三黄泻心汤复方颗粒的制备8 2 1 煎煮器具的选择8 2 2 煎煮时间8 3 三黄泻心汤复方颗粒( 浸膏) 的制备工艺流程图8 4 三黄泻心汤单味中药颗粒( 浸膏) 的制备8 5 三黄泻心汤中药配方颗粒( 浸膏) 的制备工艺流程图9 6 干燥条件的优选1 1 6 1 真空干燥法1 l 6 2 常压干燥法1 1 6 3 得膏率1 1 6 4 黄连干燥条件优选1 l 6 5 黄芩干燥条件优选1 2 6 6 大黄干燥条件优选1 5 本章小结1 5 第二章三黄泻心汤中药复方颗粒剂和中药配方颗粒剂中五种指标性成分 含量测定的方法学考察及含量测定1 6 1 盐酸小檗碱的含量测定1 6 1 1 高效液相色谱法1 6 1 1 1 仪器、试药1 6 1 1 2 色谱条件1 6 1 1 3 供试品溶液的制备1 6 1 1 3 1 提取方法优选1 6 1 1 3 1 1 超声冷浸提取法1 7 1 1 3 1 2 超声提取法1 7 1 1 3 1 3 索氏提取法1 7 1 1 4 中药配方颗粒供试品溶液的制备1 8 1 1 5 黄连阴性供试溶液的制备1 8 1 1 6 系统适用性实验1 8 1 1 7 线性关系考察1 8 1 1 7 1 标准曲线的绘制1 8 1 1 7 2 精密度试验1 9 1 1 7 3 稳定性实验1 9 1 1 7 4 重复性实验1 9 1 1 7 5 加样回收率试验2 0 1 1 8 样品含量测定2 0 2 高效毛细管电泳法2 2 1 - 2 1 仪器与试药2 2 1 2 2 溶液的制备2 2 1 2 2 1 对照品溶液的制备2 2 1 2 2 2 供试品溶液的制备2 2 1 2 3 毛细管电泳条件2 2 1 2 4 方法与结果2 2 1 2 4 1 线性关系的考察2 2 1 2 4 2 精密度试验2 3 1 2 4 3 稳定性实验2 3 1 2 4 4 重复性实验2 3 1 2 4 5 加样回收率实验2 3 1 2 5 样品含量测定2 4 1 3 薄层扫描法2 6 1 3 1 仪器和试药2 6 1 3 2 溶液的制备j 2 6 1 3 2 1 对照品溶液的制备2 6 1 3 2 2 供试品溶液的制备2 6 1 3 2 3 色谱分析2 6 1 3 2 4 方法学与结果2 6 1 3 2 4 1 稳定性试验2 6 1 3 2 4 2 精密度试验2 7 1 3 2 4 3 线性关系考察2 8 1 3 2 4 4 重复性试验2 9 1 3 2 4 5 回收率试验3 0 1 3 2 5 样品含量测定3 0 2 黄芩苷的含量测定3 2 2 1 仪器、试药3 2 2 2 色谱条件3 2 2 3 中药复方颗粒剂供试品制备3 2 2 3 1 提取方法优选3 2 2 3 1 1 冷凝回流提取法3 2 2 3 1 2 超声提取法3 2 2 3 1 3 超声冷浸法3 2 2 4 中药配方颗粒剂供试品制备3 3 2 5 黄芩阴性供试溶液的制备3 3 2 6 系统适用性试验3 4 2 7 线性关系的考察3 4 2 7 1 标准曲线的绘制3 4 2 7 2 精密度试验3 4 2 7 3 稳定性实验3 4 2 7 4 重复性试验3 6 2 7 5 加样回收率试验3 6 2 8 样品含量测定3 7 3 芦荟大黄素、大黄酚、大黄素的含量测定3 9 3 1 仪器、试药3 9 3 2 色谱条件3 9 3 3 供试品溶液的制备3 9 3 3 1 提取方法优选3 9 3 3 1 1 冷凝回流提取法3 9 3 3 ，1 2 超声提取法3 9 3 3 1 3 索氏提取法4 0 3 4 中药配方颗粒剂供试品溶液的制备4 2 3 5 大黄阴性供试溶液的制备4 2 3 6 系统适用性实验4 3 3 7 线性关系的考察4 3 3 7 1 标准曲线的绘制4 3 3 7 2 精密度试验4 4 3 7 3 稳定性实验4 4 3 7 4 重复性试验4 6 3 7 5 加样回收率试验4 7 3 7 5 1 芦荟大黄素加样回收率试验4 7 3 7 5 2 大黄素加样回收率试验4 7 3 7 5 3 大黄酚加样回收率试验4 8 3 7 6 样品含量测定5 2 本章小结5 3 总结与展望5 4 创新点5 5 参考文献5 6 三黄泻心汤的研究综述5 7 附图6 7 致谢9 8 个人简历9 9 贵阳中医学院顾 j 学位论义 中文摘要 目的：“三黄泻心汤”出白张仲景金匮要略，本方由大黄、黄芩、黄连三 味药组成，功用泻火解毒，燥湿泄热。主治邪火内炽，迫血妄行，吐血，衄血， 便秘溲赤；三焦积热，眼目赤肿，口舌生疮，外证疮疡，心胸烦闷，大便秘 绪；湿热黄疸，胸中烦热痞满，舌苔黄腻，脉数实者。是中医临床治疗心胃 火邪内炽证的常用方剂。本课题分别对其中药复方颗粒剂、中药配方颗粒剂中主 要有效成分含量的对比考察，分析它们的差异，对中药配方颗粒剂应用于临床的 合理性进行研究和探讨。 方法：按照古方的煎煮方法制备传统汤剂，参照传统汤剂的制备方法结合颗 粒剂的制备方法，制备相应的复方颗粒，模拟工业生产制备单味浓缩颗粒并组合 为相应的配方颗粒剂，分别采用h p l c 、h p c e 、t l c s 测定两种剂型中有效成分含量 并进行对比研究。 结果：1 通过对汤剂煎煮的器具、煎煮时间、煎煮温度、加水量、浸泡时间 等的资料收集整理及考察，总结出一套合适的煎煮方法。 2 通过对中药复方颗粒剂的干燥条件、提取条件的优选比较，优选出以盐酸 小檗碱、黄芩苷、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚五个成分为指标性成分的最佳干 燥条件、提取条件的方法。盐酸小檗碱、黄芩苷、芦荟大黄素、大黄素、大黄 酚干燥条件均为在常压下于6 0 进行干燥为最佳；黄芩苷、芦荟大黄素、 大黄素、大黄酚最佳提取条件均为回流提取方法；盐酸小檗碱提取条件为超 声提取，冷浸过夜效果最好。 3 处方中五个指标性成分盐酸小檗碱、黄芩苷、芦荟大黄素、大黄素、大黄 酚在中药复方颗粒剂和中药配方颗粒剂中的含量都有显著差异。其中，中药配方 颗粒剂中盐酸小檗碱的含量大大超过中药复方颗粒剂的含量。而中药复方颗粒剂 中黄芩苷、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚的含量比中药配方颗粒剂中的含量高。 4 本课题首次采用了高效液相色谱、高效毛细管电泳、薄层扫描三种现代科 技手段分别对三黄泻心汤复方颗粒剂和配方颗粒剂中盐酸小檗碱的含量进行了测 定，将测定结果进行了对比研究。 结论：通过对三黄泻心汤中药复方颗粒剂和中药配方颗粒剂的有效成分含 量测定结果显示：如果以盐酸小檗碱为有效成分，中药配方颗粒剂较适宜；如果 贵阳中医学院硕卜学位论文 以黄芩苷、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚为有效成分，中药复方颗粒较适宜。 关键词：三黄泻心汤；中药复方颗粒剂；中药配方颗粒剂：高效液相色谱； 高效毛细管电泳；薄层扫描。 2 贵阳中医学院顾f ：学位论文 a b s t r a c t o b j e c t i v es a n h u a n gx i ex i nd e c o c t i o nf r o m z h a n g - z h o n g j i n g s ( ( j i n k u i y a o l u e ) ) ， t h et r a d i t i o n a l c h i n e s em e d i c i n ec o m p o u n do ft h er h u b a r b ，s c u t e l l a r i ab a i c a l e n s i s ， c o p t i ss h a m i s e n i ti su s e dt oc l e a r i n gh e a ta n dp u r g i n gf i r e t h i sm e d i c i n e si sw i d e l y u s e di ne x u b e r a n tf i r ei nh e a r t 、h e m a t e m e s i s 、c o n s t i p a t i o na n ds t o m a c h ，a n di th a s i m p r e s s i v e e f f e c ti nc l i n i c t h i s s u b j e c t o fw h i c hd r u g sw e r ep r e p a r e db yt h e t r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i c i n eg r a n u l e sa n dc h i n e s em e d i c i n ef o r m u l ag r a n u l e st h e m a i na c t i v ei n g r e d i e n t so ft h ec o m p a r i s o ns t u d y , a n a l y s i so ft h e i rs i m i l a r i t i e sa n d d i f f e r e n c e so ft h eg r a n u l e su s e di nt r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i c i n ec l i n i c a lr e s e a r c ha n do f r a t i o n a l i t y m e t h o d s c o m p a r e dt h ed e f f e r e n tw a y so ft w og r a n u l e st ot h ei n d i c a t o r sc o n t e n t s w a sd e t e r m i n e db yh p l c ，h p c e ，t l c s r e s u l t s 1 b yt h er e f e n c e sa n dt h er e s e a r c hi nt h ed e c o t i o no fm a n yf a c t o m ，s u c ha s b o i l i n gt h ea p p a r a t u s ，b o i l i n gt i m e ，b o i l i n gt e m p e r a t u r e ，w a t e r , s o a k i n gt i m ea n d c o l l e c t e do fs t u d yd a t a ，s u m m e du pas e to fa p p r o p r i a t eb o i l i n gm e t h o d 2 t r a d i t i o n a lc h i n e s eg r a n u l e sb yt h ed r yc o n d i t i o n s ，t h eo p t i m a le x t r a c t i o nc o n d i t i o n s c o m p a r e dw i t ho p t i m i z e db e r b e r i n e ，b a i c a l i n ，a l o ee m o d i n ，e m o d i n ，c h r y s o p h a n o lf i v e i n d e xc o m p o n e n t s ( b e r b e r i n eh y d r o c h l o r i d e 、b a i c a l i n 、a l o ee m o d i n 、e m o d i n 、 c h r y s o p h a n 0 1 ) o f t h eb e s td r y i n gc o n d i t i o n s ，m e t h o do fe x t r a c t i o nc o n d i t i o n s 3 t h ef i v ei n d e xc o m p o n e n t so ft h ep r e s c r i p t i o n ( b e r b e r i n eh y d r o c h l o r i d e 、b a i c a l i n 、 a l o ee m o d i n 、e m o d i n 、c h r y s o p h a n 0 1 ) i nt r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i c i n ea n dc h i n e s e m e d i c i n ef o r m u l a t i o n s g r a n u l e sh a v es i g n i f i c a n t l yd i f f e r e n tl e v e l s a m o n gt h e m ，t h e t r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i c i n eg r a n u l e so fb e r b e r i n eh y d r o c h l o r i d ei ns u b s t a n t i a l l ym o r e t h a nt h ec o n t e n to fc h i n e s em e d i c i n ef o r m u l a t i o n s g r a n u l e s b a i c a l i n 、a l o ee m o d i n 、 e m o d i n ，c h r y s o p h a n o lc o n t e n to ft h ec h i n e s em e d i c i n ef o r m u l a t i o n sg r a n u l e s h i g h e rt h a ni nt r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i c i n eg r a n u l e s 4 t h es u b j e c tf o rt h ef i r s tt i m eu s i n gh p l c 、h p c et l c st h r e et y p e so fm o d e r n t e c h n o l o g yt od e t e r m i n a t i o nb e r b e r i n eh y d r o c h l o r i d eo nt h et r a d i t i o nc h i n e s em e d i c i n e 3 贵阳中医学院硕i j 学位论义 w i l lb ec o m p a r e da n dr e a s e r c h c o n c l u s i o nb a s e do nt h et r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i c i n eg r a n u l e sa n dc h i n e s e m e d i c i n ef o r m u l ag r a n u l e so ft h es a nh u a n gx i e x i nd e c o c t i o nc o n t a i n i n gt h e a c t i v ei n g r e d i e n t st e s tr e s u l t ss h o wt h a ti fb e r b e r i n e h y d r o c h l o r i d ea sa na c t i v e i n g r e d i e n t ，t h e ni sm o r ea p p r o p r i a t e f o rt r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i c i n eg r a n u l e s ；i f b a i c a l i n 、a l o ee m o d i n 、e m o d i n ，c h r y s o p h a n o la sa na c t i v ei n g r e d i e n t ，t h e nc h i n e s e m e d i c i n ef o r m u l ag r a n u l e si sm o r ea p p r o p r i a t e k e yw o r d s s a nh u a n gx i e x i nd e c o c t i o n ；t r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i c i n e g r a n u l e s ；c h i n e s em e d i c i n ef o r m u l ag r a n u l e s ；h p l c 、h p c e 、t l c s 4 贵阳中医学院顾l ：学位论文 啦- 刖? 舌 中药汤剂有着几千年的悠久历史，将中草药饮片用煎煮或浸泡去渣取汁的方 法制成的液体剂型，适应中医辨证施治，采取随证加减的原则，其优点在于汤剂 多为复方，药物之间能相互促进，相互制约，达到增强疗效、缓和药性、减少药 物对人的毒副作用，能充分发挥中医方剂中各药物的配伍作用。近年来，采用现 代化科技手段将传统中药饮片进行提取、浓缩、干燥而制成的中药颗粒应用于临 床，代表了中药饮片的一个发展方向，它克服了中药饮片煎煮费时、服用量大的 缺点，避免了因煎煮方法不当而直接影响药物的临床疗效，有利于改善中药饮片 的“不确定性”和“随意性”，可使中医急诊和儿科用药得到极大的改观，有利于 中药工业化、产业化，加快与国际市场的接轨。 与传统汤剂相比，中药颗粒具有服用、携带、贮藏、组方、运输方便等特点。 但同时也存在一些问题，其中最关键的问题即采用分煎制备的单味中药配方颗粒 汤剂与直接采用传统汤剂制备的中药复方颗粒汤剂在化学组成、含量是否相近或 相等，中药配方颗粒采用精制提取单味中药，混合后直接冲服的方法，与直接采 用传统制备汤剂方法制备的中药复方颗粒剂比较，在化学组成、含量方面有无差 别，有多少差别，需要对中药复方颗粒剂与中药配方颗粒剂进行一系列有效成分 研究。 本课题为国家自然科学基会资助项目“中药经方及其加减方的复方颗粒汤剂 化学组成和药效学研究”的子课题，课题编号：3 0 8 6 0 3 6 4 。选取金匮要略中 用于邪热壅滞心下，气机痞塞证的经典名方“三黄泻心汤”为研究对象，优选制 备工艺，制备其中药复方颗粒剂和中要配方颗粒剂，分别采用h p l c 、h p c e 、t l c s 先进仪器进行分析，考察中药复方颗粒剂和中要配方颗粒剂主要有效成分的含量 差异，为进一步系统地研究中药复方颗粒剂和中要配方颗粒剂的化学组成及临床 应用提供一定理论依据。 贵阳中医学院顾i j 学位论文 正文 第一章三黄泻心汤复方颗粒剂与配方颗粒剂的制备 三黄泻心汤出自东汉时期金匮要略，其制法为：大黄二两，黄连一 两，黄芩一两，以水三升，煮取一升，顿服之。功用泻火消痞。主治邪热壅 滞心下，气机痞塞证。是中医临床治疗心胃活邪内炽证的常用方。1 妇1 方 中重用大黄为君药，取其釜底抽薪，泻火清热，苦降行瘀；佐以黄连、黄芩苦寒 直折，以增泻炎清热之力。因本方有清热止血而不留瘀之效，故自古以来就被视 为治血热出血之良方，深受医家所推崇。现代临床用于治疗急性胃肠炎、肝炎、 胆囊炎、1 ：3 腔炎、痢疾以及外科疮疡，儿属心胃火盛者，均可用本方加减治疗。1 查阅现行方剂教科书得知，东汉时的一两等于现代的0 4 4 5 5 市两，1 市两 等于5 0 9 ，也就是东汉时的一两等于现代的2 2 2 7 5g 。东汉时的一升等于现 代的0 2 升，即2 0 0 m l 。本课题按照三黄泻心汤汤剂：大黄4 4 5 5 9 ，黄连 2 2 7 5 9 ，黄芩2 2 2 7 5 9 ，以水6 0 0m l ，煮取2 0 0 m l 而得三黄泻心汤汤剂，并 可加工成相应的复方颗粒剂( 或浸膏) 。 1 药材的鉴别和含量测定 1 1 大黄药材的鉴别和含量测定 大黄药材( 批号2 0 0 9 0 3 0 1 ) 购自贵阳中医学院一附院药房，经贵阳中医学 院第一附属医院贺祝英主任药师鉴定为大黄为蓼科植物掌叶大黄r h e u mp a m a t u m 的干燥根及根茎。按照中围药典2 0 0 5 年版一部，大黄含量测定项下的规定， 本品按干燥品计算，芦荟大黄素( c ，。h l l 0 j ) 、大黄酸( c 。j h 。0 j ) 、大黄酚( c ，j h 。0 ) 、 大黄素( c i 。h 。0 ；) 、大黄素甲醚的总量不得少于1 5 。本实验按照中国药典 2 0 0 5 年版一部大黄药材项下，采用高效液相色谱法进行测定，结果见表1 - 1 。 6 贵阳中医学院硕i ：学位论义 表卜1 人黄药材的含餐测定结果 根据测定结果符合2 0 0 5 版药典对大黄药材的质量要求。 1 2 黄连药材的鉴别和含量测定 黄连药材( 批号2 0 0 9 0 3 0 1 ) 来自贵阳中医学院一附院药房，经贵阳中医学 院第一附属医院贺祝英主任药师鉴定为毛茛科植物黄连c o p t i sc h i n e n s i s ：r a n c h 的干燥根茎。按照中国药典2 0 0 5 年版一部黄连含量测定项下的规定，本品按 干燥品计算，含盐酸小檗碱( c ：。h 。n o 。) 不得少于3 6 。本实验按照中国药典 2 0 0 5 年版一部黄连药材项下，采用薄层色谱扫描法进行测定，结果见表i - 2 。 表卜2 黄连药材含鼍测定结果 根据测定结果符合2 0 0 5 版药典对黄连药材的质量要求。 1 3 黄芩药材的鉴别和含量测定 黄芩药材( 批号2 0 0 9 0 3 0 3 ) 来自贵阳中医学院一附院药房，经贵阳中医学院 第一附属医院贺祝英主任药师鉴定为唇形科植物黄芩的s c u t e l l a r i ab a i c a l e n s i s g o e r g i 干燥根。按照中国药典2 0 0 5 年版一部黄芩含量测定项下的规定，本品 按干燥品计算，含黄芩苷( c 2 2 h 2 0 0 。) 不得少于9 0 9 6 。本实验按照中国药典2 0 0 5 年 版一部黄芩药材项下，采用高效液相色谱法进行测定，结果见表1 - 3 。 表卜3黄芩药材含量测定结果 0 3 0 4 21 0 4 3 72 4 6 7 02 4 6 7 7 贵阳中医学院硕i ：学位论文 0 3 0 3 8 0 3 0 3 9 1 0 3 9 9 1 0 4 1 3 2 4 3 5 0 2 4 3 9 0 2 4 3 52 4 4 7 2 4 3 9 根据测定结果符合2 0 0 5 版药典对黄芩药材的质量要求。 2 三黄泻心汤复方颗粒( 浸膏) 的制备 三黄泻心汤复方颗粒的制备是在三黄泻心汤传统汤剂的基础上通过煎 煮、滤过、浓缩、干燥制成的复方颗粒( 浸膏) 。汤剂是我国应用最早最广 泛的一种药物剂型，已有数千年的历史。汤剂的疗效与其煎煮质量密切相关， 徐灵胎日：“煎药之法，最宜深讲，药之效不效，全在乎此。 李时珍指出： “凡服汤药，虽品物专精，修治如法，而煎药者鲁莽造次，水火不良，火候 失度，则药亦无功。”说明古人己认识到煎煮过程中有诸多因素影响煎煮质 量。由于三黄泻心汤原书中没有具体的煎煮方法。考虑民间百姓传统煎煮中 药的实际习惯，以及对该方中各味药的药性、药味进行综合分析，并结合现 代化研究的手段，确定该课题传统煎煮汤剂的煎煮方法为：浸泡药材1 5 m ir l ， 用6 0 0m l 水分两次煎煮，合并煎液取2 0 0 m l 。 2 1 煎煮器具的选择 煎煮器具的选择对药液质量有重大影响。历代医家对此都很重视。陶弘 景日：“温汤忌用铁器。 李时珍说：“儿煎药并忌铜铁器，宜用银器瓦罐。” 由于铜铁器等化学性质不稳定，在煎煮过程中能与中药中所含的多种化学成 分发生化学变化，并且使用铜器煎煮中药，在其煎出液中还可检出铜离子， 故都不是理想的煎煮器具。而使用银器煎药，其化学性质稳定，但由于价格 昂贵、得之不易，且导热性强、锅底温度高、不耐高温的成分易破坏，水分 蒸发快，易产生药材糊底焦化现象，故也无实际应用意义。现代研究发现， 日常生活中常见的铝锅也不是理想的煎煮器具，它不耐强酸、强碱，p h 值 从1 2 或p h 值为l0 的煎液中可检出铝离子。有研究认为人体某些疾病可 能与体内铝的含量过高有关。目前，最常用的煎煮器具是砂锅，其导热均匀， 化学性质稳定，保温性好，水分蒸发量小。也可用陶瓷、白色搪瓷器皿、玻 璃器皿等，家庭煎药可以采纳使用。考虑实验室中煎煮条件及煎煮的量，采 用性质稳定的3 0 0 0m l 玻璃烧杯，其受热快、耐酸、耐腐蚀，而且化学性质 稳定。 贵阳中医学院硕1 j 学位论义 2 2 煎煮时间 中药煎煮一般用武火煎至微沸，再用文火煎煮，煎煮时间是以文火煎煮 时间考察的。中药药剂学中对汤剂煎煮时间和次数是这样规定的：一般 性药，头煎2 0 - - - 6 0 m i n ，二、三煎1 5 3 0 m i n 。几次煎液合并混匀分服。据 研究报道，经化学成分测试、煎液比重、煎出物试验、药理试验表明煎煮二 次是合理的。一次久煎不能代替两次分煎。三黄泻心汤出自东汉时期金匮 要略，大黄二两，黄连一两，黄芩一两，以水三升，煮取一升。故确定本 试验以水三升分两次煎煮3 0m i n ，合并两次煎液取一升，过滤，浓缩，干 燥，得三黄泻心汤复方颗粒( 浸膏) ，备用。 3 三黄泻心汤复方颗粒( 浸膏) 的制备工艺流程图 三黄泻心汤出自东汉时期金匮要略，为：大黄二两，黄连一两，黄 芩一两，以水三升，煮取一升。查阅有关方剂教科书得知，东汉时的一两等 于现代的0 4 4 5 5 市两，1 市两等于5 0 9 ，也就是东汉时的一两等于现代的 2 2 2 7 5g 。东汉时的一升等于现代的0 2 升，即2 0 0 m l 按现代换算：大黄 二两( 4 4 5 5 9 ) ，黄连一两( 2 2 2 7 5 9 ) ，黄芩一两( 2 2 2 7 5 9 ) ，加水6 0 0m l ， 煮取2 0 0 m l 。现扩大处方量5 倍制备三黄泻心汤复方颗粒剂，见图卜1 。 加水1 5 0 0 r a l ，微沸前煮3 0m i n 过滤，保留滤液 l 三黄泻心汤复方 浓缩、干燥 l 颗粒剂十浸膏粉回竺困 l 传统汤剂 l卜l 合并滤液 l l ， 0 弃 图1 - 1 三黄泻心汤复方颗粒( 浸膏) ，的制备i ：艺流榉图 4 三黄泻心汤单味中药颗粒( 浸膏) 的制备 为了考察三黄泻心汤复方颗粒剂与配方颗粒剂间主要有效成分含量的差 异，本课题的单味浓缩颗粒的制备工艺均直接采用贵州宏宇药业有限公司提 供的制备工艺，其单味浓缩颗粒的提取工艺路线己较为成熟，并且制备的单 味浓缩颗粒已广泛用于临床，故该课题不对单味药的浓缩颗粒工艺进行考 察。直接采用贵州宏宇药业有限公司提供的工艺参数进行单味浓缩颗粒的制 9 贵阳中医学院硕i j 学位论文 备，具体提取工艺参数见表1 - 4 。 表卜4 单味浓缩颗粒提取i ：艺参数 第一次第二次 药材名称 加水倍数煎煮时间煎煮温度加水倍数煎煮时间煎煮温度 黄连8倍6 0 m i n1 0 0 6 倍 6 0 m i n1 0 0 c 黄芩8 倍6 0 m i n1 0 0 6 倍6 0 m i n 1 0 0 c 人黄8 倍6 0 m i n1 0 0 6 倍6 0 m i n1 0 0 称取药材，按上述方法分别制备处方中所需三味药材( 黄连、黄芩、大 黄) 单味浓缩颗粒。每味药材经工艺提取后，合并其两次提取液，浓缩，并 在常压，6 0 c 条件下干燥，粉碎得其单味药材浸膏粉，直接使用单味药材的 干浸膏粉进行实验，各药材单味颗粒( 浸膏粉) 的制备数据见表卜5 。 表1 - 5 各约材单味颗粒( 浸膏粉) 的制备 ，。，、。，、 每克约材相当丁干1 个处方药材所需的干浸膏粉量 约材名称称样量( g ) 浸青量( g ) 羞喜勰( g t 吾1 啖万约删紧懒洲亘佞骨粉嗣重g j( g ) 黄连4 0 0 5 0 8 80 1 32 8 3 黄芩4 0 0 1 0 8 0 30 2 7 31 0 2 1 大黄4 0 0 1 8 3 3 80 4 61 2 0 3 5 三黄泻心汤中药配方颗粒( 浸膏) 的制备工艺流程，见图1 - 2 。 荇药分别第一次加8 俏量水，第_ 二次加6 倍量水， 合并滤液 大黄、黄芩、黄连 l 前煮曲次，每次要6 0 m i n_ ， ，一 。 浓缩十焰 口，l 七i p m i a 1r 似处j p f l 五i - i 三黄泻心汤中药配方分别制得甲味药材的十 j 1 颗粒汤剂十浸膏粉浸膏粉 图1 - 2 三黄泻心汤中约配方颗粒剂的制备i ：艺流程图 6 干燥条件的优选 6 1 真空干燥法 6 3 得膏率 真空干燥得膏率为：1 1 4 3 ；常压干燥为1 2 1 1 6 4 黄连干燥条件优选 分别精密称取用真空干燥法和常压干燥法制得的干燥三黄泻心汤复方 浸膏粉约o 4 9 ，于具塞三角锥形瓶中，精密加入l o o m l l ：1 0 0 的能酸一甲醇 后称重，于6 0 c 水浴锅中加热l5 分钟，取出超声处理3 0 分钟，室温过夜， 称重补足损失量，摇匀，过滤，取续滤液，再用0 4 5 p - m 微孔滤膜过滤，即 得供试品溶液。本实验采用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱含量，结果见表 1 6 。 表1 - 6中药复方颗粒剂盐酸小檗碱干燥方法优选 实验数据方差分析 采用t 检验：双样本等方差假设分析比较两种干燥方法之间有无差异性，处理 结果见表卜7 。 表1 - 7实验数据方著分析 结果表明，常压干燥方法时盐酸小檗碱含量最高，差异性显著，故选用常压 干燥进行干燥。 6 5 黄芩干燥条件优选 分别精密称取用真空干燥法和常压干燥法制得的三黄泻心汤复方浸膏 贵阳中仄学院顾j j 学位论义 粉约0 2 9 ，加7 0 7 1 醇5 0 m l 加热回流3 小时，放冷，滤过，滤液置1 0 0 m l 量瓶中，用少量7 0 7 , 醇分次洗涤溶液和残渣，洗液滤入同一量瓶中并定容 至刻度，摇匀，用0 4 5 帅微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。本实验按照中 国药典2 0 0 5 年版一部黄芩药材项下，。采用高效液相色谱法测定黄芩苷含量， 结果见表卜8 。 表卜8 中药复方颗粒汤剂黄芩茁干燥方法优选 干燥方法 黄岑茁= 含量( m g g )平均含量( r a g g ) r s d 1 6 4 常压干燥 1 6 71 6 60 8 8 1 6 6 1 5 8 真空干燥 1 5 91 5 80 7 7 1 5 7 实验数据方差分析 采用t 检验：双样本等方差假设分析比较两种干燥方法之f n j 有无差异性，处理 结果见下表卜9 。 表1 9 实验数据方差分析 结果表明，常压干燥方法时黄芩苷含量最高，差异性显著，故选用常压干燥 法进行干燥。 6 6 大黄干燥条件优选 分别精密称取用真空干燥法和常压干燥法制得的三黄泻心汤复方浸膏 粉约0 1 5 9 ，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇2 5 m l ，称定重量，加热回流1 小时， 放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5 m l ， 置烧瓶中，挥去溶剂，加8 盐酸溶液1 0 m l ，超声处理2 分钟，再加三氯甲烷1 0 m l ， 加热回流l 小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷沈涤容器，并入分液漏 斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3 次，每次1 0 m l ，合并三氯甲烷 液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至1 0 0 m l 量瓶中，加甲醇至刻 度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试液。本实验按照中国药典2 0 0 5 年版一部 1 2 贵| ；几中医学院顾l ：学位论文 大黄药材项下，采用高效液相色谱法测定芦荟大黄素、大黄素、大黄酚含量， 结果见表卜1 0 、卜1 2 、卜1 4 。 表1 - 1 0中药复方颗粒剂芦荟人黄素干燥方法优选 实验数据方差分析一 采用t 检验：双样本等方差假设分析比较两种干燥方法之间有无差异性，处理 结果见表卜1 1 。 表1 - 1 1 实验数据方差分析 贵阳中医学院硕 j 学位论义 实验数据方差分析 采用t 检验：双样本等方差假设分析比较两种干燥方法之间有无差异性，处理 结果见表卜1 3 。 表1 - 1 3 实验数据方差分析 p ( t = t ) 筹异源平均值方著合并方差t 舣尾临界 舣尾 常压干燥0 0 0 2 5 2 9 1 1 4 f - 0 80 0 11 6 1 22 7 7 6 4 4 5 6 9 e 一0 9 真，空干燥0 0 0 2 2 32 3 5 e 一0 9 表1 - 1 4中药复方颗粒剂人黄酚干燥方法优选 干燥方法人黄酚含量( m g g )平均含量( m g g ) r s d 9 1 l 常压干燥 8 9 8 9 0 30 7 5 9 0 1 8 2 3 真空干燥8 2 58 2 3 0 2 4 8 2 1 实验数据方差分析 采用t 检验：双样本等方差假设分析比较两种干燥方法之间有无差异性，处理 结果见表卜1 5 。 表卜1 5 实验数据方差分析 p ( t = t ) 差异源平均值方差合并方差t 双尾临界 双尾 常压干燥0 0 0 8 9 9 3 3 3 e - 0 92 5 e 一0 52 7 7 6 4 4 5 1 8 l e 0 9 真空干燥0 0 0 8 2 2 3 2 9 7 e - 1 0 结果表明，常压干燥方法时芦荟大黄素、大黄素、大黄酚含量最高，差异性 显著，故选用常压干燥方法作为样品干燥方法。 1 4 贵阳中医学院顾i ? 学位论文 本章小结 对药材进行含量测定，结果均符合2 0 0 5 年版中国药典标准。同时对煎煮 过程中煎煮器具、煎煮时间进行考察，从而确定三黄泻心汤中药复方颗粒剂的 制备工艺。因为操作时存在操作误差，同一批中药材，同样的处方量，相同 煎煮方法制得浸膏粉，其指标性成分含量通常存在差异，有时差异还较大。 因此，为了减少差异，本实验根据三黄泻心汤出处金匮要略记载，取处 方药材比例，加大称样量，按照以上方法一次性制备中药复方浸膏，考察时 按相应的量制成供试品溶液，这样可消除每次煎煮过程中产生的误差，使测 定结果有较好的重复性。本章还对中药复方颗粒汤剂中五种指标性成分的干 燥条件分别进行了考察，结果显示盐酸小檗碱、黄芩苷、芦荟大黄素、大黄 素、大黄酚最佳干燥条件均为常压干燥( 6 0 ) ； 贵阳中医! 学院颁 ? 学位论文 第二章三黄泻心汤中药复方颗粒剂和中药配方颗粒剂中五种指 标性成分含量测定的方法学考察及含量测定 黄连主要有效成分有生物碱类小檗碱、黄连碱、甲基黄连碱、巴马亭、 阿朴啡型生物碱等，黄酮类( 槲皮素) 等。黄芩主要有效成分有黄芩苷等。 大黄主要有效成分有芦荟大黄素、大黄酸、大黄素j 大黄酚、大黄素甲醚等。 盐酸小檗碱、黄芩苷、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚为三黄泻心汤中各味药 物的主要有效成分，其含量相对较高，性质稳定，检测方法方便可靠，故拟 选取方中盐酸小檗碱、黄芩苷、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚成分作为比较 三黄泻心汤中药复方颗粒剂和中药配方颗粒剂的考察指标7 1 。 本实验分别采用了高效液相色谱法、高效毛细管电泳法、薄层扫描法对 盐酸小檗碱进行了含量测定的方法学考察和含量测定；采用高效液相法对黄 芩苷、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚进行了含量测定的方法学考察及其含量 测定。 1 盐酸小檗碱的含量测定 1 1 高效液相色谱法 1 1 1 仪器、试药 美国a g i l e n t1 1 0 0 高效液相色谱仪，a g i l e n t g 1 3 1 5 a 二元泵，g 1 3 1 5 b 二极管理阵列检测器，g 1 3 1 3 自动进样器，g 1 3 1 6 a 柱温箱，g 1 3 2 2 a 真空脱 气机，a g il e n t a 0 8 0 3 8 4 7 化学工作站；超声波清洗机；盐酸小檗碱对照 品( 批号：1 10 7 13 2 0 0 2 0 8 中国药品生物制品检定所) ；三黄泻心汤中药复 方颗粒汤剂与中药配方颗粒汤剂( 自制) ；乙腈为色谱纯，磷酸二氢钾、磷 酸均为分析纯，水为娃哈哈纯净水。 1 1 2 色谱条件 色谱柱：d ia m o n is lc 。柱( 5 p r o2 5 0x4 6 m m ) ：流动相：乙腈一0 0 5 m o l l 磷酸二氢钾溶液( 用磷酸调p h 至3 0 ) ( 3 0 ：7 0 ) ，检测波长为3 5 0 n m ，流速为 l m l m i n ，柱温2 5 。 贵阳中医学院顾- 学位论文 1 1 3 供试品溶液的制备 1 1 3 1 提取方法优选 1 1