（分析化学专业论文）铜（Ⅱ）镉（Ⅱ）、几种小分子同血清白蛋白的相互作用研究.pdf

摘要 铜( i i ) 镉( i i ) 、几种小分子同血清白蛋白的 相互作用研究 摘要 蛋白质是细胞内的功能分子，在所有的生命过程中起着关键的作用，具有运载和 储存功能，其特定结构与其生物功能密切相关。血清白蛋白是血浆中最丰富的蛋白质， 它由一条单独的氨基酸多肽链构成，其三级结构主要为a 一螺旋结构，其中包含3 个结 构域，b p d o m a i ni 、d o m a i ni i 和d o m a i n 。每个结构域包含a 、b 两个亚区，以槽 口相对的方式形成一种圆筒状结构。其中位于d o m a i ni i 和d o m a i nm 的s i t ei 和s i 钯i i 两个结合位点与许多小分子化合物具有较强结合能力，能够与许多内源性物质和外源 性物质结合，起到存储和转运的作用。血清白蛋白具有许多重要的生理功能，可与许 多化学物质( 如金属离子、脂肪酸、氨基酸、激素、药物及污染毒物等) 以不同方式结 合，并携带着这些物质通过血液在体内进行转运、运输、分配和代谢。通过研究化学 物质与血清白蛋白相互作用，可获取化学物质在体内被转运、分配和代谢过程的重要 信息。在金属离子、药物药理和毒理研究、污染毒物的危害机理及基因变异研究等方 面具有重要意义。该领域已经成为从事生命科学、化学、临床医学科研工作者共同关 注的课题之一。本论文基于开展小分子与蛋白质相互作用的重要意义及国内外研究趋 势，在前人工作的基础上，综合利用荧光光谱、紫外一可见吸收光谱、傅里叶变换红 外光谱( ( f r l r ) 、同步荧光光谱和三维荧光光谱，从以下几方面进行了研究： 在第一章的绪论中介绍了五个方面的内容：1 概述；2 小分子与蛋白质相互作 用的研究方法；3 小分子与蛋白质相互作用获取的信息；4 小分子与蛋白质相互作 用的研究现状；5 立题依据和研究内容。重点介绍了小分子与蛋白质相互作用的研 究方法和手段及能够获取的信息。阐述了本论文的目的和意义，并对该方面未来的发 展进行了预测和展望。 在第二章中在模拟生理条件下利用紫外光谱法和荧光光谱法研究了c u ( i d 与牛血 清白蛋白的相互作用。利用荧光光谱法研究了不同温度下c l l ( i i ) 对牛血清白蛋白的猝 灭情况，采用s t e r n - v o l m e r 方程和l i n e w e a v e r - b u r k 双倒数方程对数据进行处理，并 利用热力学公式推导了两者之间的相互作用力。研究中发现，c u ( i i ) 对牛血清白 i 摘要 蛋i 刍b s a 的内源荧光猝灭以静态猝灭为主，二者之间生成了不发荧光的复合物是导致 荧光猝灭的主要原因。c u ( i i 卜斗血清蛋白相互作用过程是一个熵增加、吉布斯自由 能降低的自发超分子作用过程，二者之间的作用力以疏水作用力为主。c u ( i d 会导致 血清蛋白色氨酸残基和酪氨酸残基附近微环境极性增加，疏水性略有降低，使得牛血 清白蛋白的肽链伸展，吐螺旋含量减少。紫外光谱法进一步验i 正t c u ( i i ) 与牛血清白 蛋白之间的相互作用。通过改变激发波长，采用荧光光谱法研究了c u ( ) 和c d ( i i ) 对 人血清白蛋白和牛血清白蛋白上的2 种荧光基团的猝灭情况及结合位点，紫外光谱法 研究了二者共存时与血清白蛋白共有的结合位点的竞争。研究中发现，c l l ( i d 和c d ( h ) 对血清白蛋白的色氨酸残基和酪氨酸残基均具有猝灭作用，c u ( i i ) 的猝灭程度远远强 于c d ( i i ) 。c u o i ) 只与血清蛋白中2 1 4 位色氨酸残基发生作用，而c d ( i i ) 除了与血清白蛋 白的2 1 4 位发生作用外，还和牛血清蛋白独有的1 3 5 位色氨酸残基发生作用。c l l ( i d 与 c 叩i ) 同时存在时c u ( i i ) 与牛血清白蛋白的结合占主导作用。 在第三章中在模拟生理条件下利用紫外光谱法和荧光光谱法研究了杂多酸盐 k 7 口鸭w l 0 0 4 0 】6 h 2 0 ( p m 1 9 ) 与牛血清白蛋白和人血清白蛋白的相互作用。利用荧 光光谱法研究了不同温度下p m 1 9 对两种血清蛋白的猝灭情况，采用s t e m v o l m c r 方 程和l i n e w e a v e r - b u r k 双倒数方程和双对数方程对数据进行处理，获取了结合常数和 结合位点数。并利用热力学公式研究了p m 1 9 与蛋白作用的热力学参数及主要作用力 类型。采用f 6 r s t e r 非辐射能量转移理论计算了p m 1 9 与牛血清白蛋白和人血清白蛋白 结合时结合位置与蛋白质分子中荧光发射基团之间的距离。采用同步荧光光谱法探讨 了p m 1 9 对血清蛋白构象的影响。研究中发现p m 1 9 对血清蛋白的内源荧光具有强烈 的猝灭作用，静态猝灭和非辐射能量转移是导致血清蛋白的内源荧光猝灭的主要原 因。p m 1 9 和血清蛋白形成的复合物的结合常数在1 0 4 1 0 6 l t o o l 1 ，表明两者的结合较 稳定，说明p m - 1 9 可被血清蛋白存储和运输。与牛血清白蛋白和人血清白蛋白的结合 位点数分别为0 8 9 和0 8 5 。p m 1 9 与牛血清白蛋白之间的主要作用力为静电作用力； p m 1 9 与人血清白蛋白之间的主要作用力为氢键和范德华力。p m 1 9 与牛血清蛋白的 结合距离为为4 1 4 r i m ；p m - 1 9 与人血清白蛋白中色氨酸残基结合位置距离为4 2 1 n m 。 p m 一1 9 与血清蛋白的作用点位靠近色氨酸残基，二者结合并不影响血清蛋白中荧光基 团色氨酸残基和酪氨酸残基附近的微环境，并不改变血清蛋白的构象。 在第四章中，采用紫外、荧光、同步荧光和三维荧光光谱法研究了4 硝基苯胺与 摘要 血清白蛋白的相互作用。利用荧光光谱法研究了不同温度下4 硝基苯胺对牛血清白蛋 白和人血清白蛋白的猝灭情况，采用s t e m - v o l m e r 方程和双对数方程对数据进行处 理，并利用热力学公式研究了舢硝基苯胺与蛋白作用的热力学参数及主要作用力的类 型。采用f o r s t e r 非辐射能量转移理论计算了4 硝基苯胺与牛血清白蛋白和人血清白蛋 白结合时结合位置与蛋白质分子中荧光发射基团之间的距离。采用紫外光谱法探讨了 4 硝基苯胺对血清蛋白构象的影响。采用同步荧光光谱法和三维荧光光谱法探讨了4 - 硝基苯胺对血清蛋白构象的影响。研究中发现4 硝基苯胺与血清蛋白发生作用生成了 新的复合物。其猝灭机理为静态猝灭，同时伴随非辐射能量转移。确定4 一硝基苯胺与 血清蛋白有一个结合位点，其结合常数数量级为1 0 4 l m o l 1 。4 - 硝基苯胺与血清蛋白 相互作用过程是一个熵增加、吉布斯自由能降低的自发超分子作用过程，二者之间主 要靠静电作用力和疏水作用力结合。4 硝基苯胺与牛血清蛋白的结合距离为3 8 7 r i m ： 4 硝基苯胺与人血清白蛋白中色氨酸残基结合位置距离为3 7 6 n m 。4 - 硝基苯胺对血清 蛋白中的色氨酸和酪氨酸残基均具有猝灭作用，并使得色氨酸残基附近极性降低，疏 水环境增强。4 硝基苯胺与血清蛋白的结合位点更接近于色氨酸残基。三维荧光光谱 进一步证明了4 硝基苯胺的加入使血清白蛋白的色氨酸残基所处的微环境极性减弱， 破坏了血清白蛋白的有序结构，使得整个大分子更趋向于折叠态。 第五章中采用紫外、荧光、同步荧光和三维荧光光谱法研究了2 ，4 - 二硝基苯胺 与牛血清白蛋白的相互作用。采用荧光方法中常用的s t e m - v o l m e r 方程和双对数方程 对数据进行处理。采用f 6 r s t e r 非辐射能量转移理论计算了2 ，禾二硝基苯胺与牛血清 白蛋白结合时结合位置与蛋白质分子中荧光发射基团之间的距离。采用紫外光谱法研 究了不同浓度的2 ，4 二硝基苯胺对血清蛋白紫外吸收光谱的影响。采用同步荧光光谱 法和三维荧光光谱法探讨了2 ，4 二硝基苯胺对血清蛋白构象的影响。研究中发现2 ，4 一 二硝基苯胺与血清蛋白发生作用生成了新的复合物。其猝灭机理为静态猝灭，同时伴 随非辐射能量转移。确定2 ，4 二硝基苯胺与b s a 的结合位点数为1 1 7 ，2 , 4 一二硝基苯胺 与牛血清蛋白的结合距离为为3 1 3 r i m 。2 , 4 二硝基苯胺对牛血清蛋白中的色氨酸和酪 氨酸残基均具有猝灭作用，并使得酪氨酸残基附近极性降低，疏水环境增强。三维荧 光光谱进一步证明t 4 一硝基苯胺的加入破坏了血清白蛋白的有序结构，使得整个大分 子更趋向于折叠态。 第六章中，采用荧光光谱法分别研究了不同温度下十六烷基三甲基溴化铵c t a b m 攘簧 及十二烷基苯磺酸钠s d b s 与牛赢清白蛋白的作用。采用红外光谱法研究了十六烷旗 三警基溴纯铵对簪斑清白蛋囊搀象的影响。磅究中发现c t a b 帮s d b s 均辩b s a 内源 荧光其有荧光猝灭作用。僵两者对蛋自的猝必程度有所不同，s d b s 对瀑自的内源荧 光猝灭作用较强。两者均与蛋囱有两类结合部位。基于荧光猝灭理论得出第一类结龠 部缓戆荧光猝灭为静态猝灭。袭霆活性裁籁譬斑涛蛋鑫鞠麓终雳以氢键靼范薅华穆嬲 力为主，其作用过程一个熵减、吉布斯自由能降低的自发怒分子作用进程。并使得包 氨酸残基附近极饿降低，疏水环境增强。采用红外光谱法进一步证实了加入表面活饿 捌嚣弓| 起7 蛋鑫矮二缀结构豹变纯，导致了夸盘涛鑫蛋巍孛静螺旋含爨豹辫羝。 第七章为总结论。 关键词：铜( 珏) ，镛( i i ) ，小分子，血清彝蛋白，耀互作用，分子光谱 i v r e s e a r c ho ni n t e r a c t i o no f c o p p e r ( i i ) ， c a d m i u m ( i i ) a n ds e v e r a ls m a l lm o l e c u l e sw i t h s e r u ma l b u m i n a b s t r a c t p r o t e i n 嬲t h ee s s e n t i a lb i o l o g i c a lm a t e r i a li nt h ec e l l sh a sb e e np l a y i n gm a n yv i t a l r o l e sf o ra l lk i n d so fb i o l o g i c a lp h e n o m e n a i th a sm a n yi m p o r t a n tf u n c t i o n ss u c h 嬲 t r a n s p o r t a t i o na n dd i s t r i b u t i o n , w h o s eb i o l o g i c a lf u n c t i o ni sd e p e n d e n to ni t ss p e c i a l s t r a c t u r e s e r u ma l b u m i n ( s a ) i st h em o s ta b u n d a n tc a r r i e rp r o t e i ni nb l o o d s e r u m a l b u m i n ( s a ) i sas m a l lp r o t e i nw i t has i n g l ep o l y p e p t i d ec h a i n , w h i c hi sl a r g e l ya - h e l i c a l i tc o n s i s t so ft h r e es t r u c t u r a l l yh o m o l o g o u sd o m a i n s ：d o m a i ni 、d o m a i ni ia n dd o m a i n 皿e a c hd o m a i ni sc o m p o s e do ft w os u b - d o m a i n s ( aa n db ) ，w h i c hf o r m sac o l u m n a r c a v i t yw i t hg r o o v e st o w a r d se a c ho t h e r s i t eia n ds i t ei il o c a t e x ii nd o m a i ni ia n dd o m a i n a r ek n o w n 船l o c a t i o n so f h i g ha f f i n i t yb i n d i n ga b i l i t yf o rm a n ys m a l lm o l e c u l e ss u c h 嬲 e n d o g e n o u sa n de x o g e n o u sl i g a n d s s e r u ma l b u m i nh a sm a n yi m p o r t a n tp h y s i o l o g i c a l f u n c t i o n s f o re x a m p l e ，b yb i n d i n gt oc h e m i c a l ss u c h 嬲m e t a l l i ci o n s ，f a t t ya c i d s ，s t e r o i d s ， a m m oa c i d s , d r u g s ，s e r u na l b u m i nr e a l i z et h e i rt r a n s p o r t a t i o n , d i s t r i b u t i o na n dm e t a b o l i s m i nt h eb o d y a sar e s u l t , i n v e s t i g a t i o no ft h ei n t e r a c t i o no fs e n 皿a l b u m i nw i t hc h e m i c a l s n o t e dp r e v i o u s l yc a no f f e ru sv e r yi m p o r t a n ti n f o r m a t i o nf o ru n d e r s t a n d i n gt h ea b s o r p t i o n , t r a n s p o r t a t i o n , d i s t r i b u t i o na n dm e t a b o l i s mo f t h ec h e m i c a l si nv i t r o i ti si m p o r t a n tt os t u d yt h ei n t e r a c t i o no fs m a l lm o l e c u l e sa n dm e t a l l i ci o nw i t ht h e p r o t e i n b e c a u s e p r o t e i n - d r u gb i n d i n gp l a y sa ni m p o r t a n tr o l e i n p h a r m a c o l o g y , p h a r m a c o d y n a m i c s ，t o x i c o l o g ya n dg e n em u t a t i o n t h e r e f o r e ，i th a sb e e na ni n t e r e s t i n g r e s e a r c hf i e l do fl i f es c i e n c e s ，c h e m i s t r ya n dc l i n i c a lm e d i c i n e i nt h i sd i s s e r t a t i o n , o nt h e b a s i so ft h ep r e v i o u sl e s e a r c l l ，t h ef l u o r e s c e n c es p e c 仃o s c o p y i n c l u d i n gs y n c h r o n o u s f l u o r e s c e n c ea n dt h r e e - d i m e n s i o n a lf l u o r e s c e n c ec o m b i n e dw i t hu - v i s i b l ea b s o r p t i o n s p e c t r o s c o p y , f o u r i e rt r a n s f o r mi n f r a r e d ( f t - m ) s p e c t r o s c o p yw e r eu s e dt oi n v e s t i g a t et h e i n t e r a c t i o no fc u ( i i ) ，c d ( i i ) a n ds e v e r a ls m a l lm o l e c u l e sw i t hs c l u ma l b u m i n t h e f o l l o w i n gm a j o rw o r k sw e r ec a r r i e do u t ： i nt h ef i r s tc h a p t e r , t h e r ea r ef i v ep a r t sa r ei n t r o d u c e d f i r s to fa l l ，ab r i e fi n t r o d u c t i o n o fk n o w l e d g eo fp r o t e i na n dc h a r a c t e r i s t i c so fs c r u n la l b u m i ni so f f e r e d s e c o n d l y , c o m m o nm e t h o d sa n di n s l n n n c n t sa r ee l a b o r a t e l yi n n 0 d u c e di nt h i sr e s e a r c hf i e l d t h i r d l y , i n f o r m a t i o no b t a i n e db ys p e c t r o s c o p yw a se x h i b i t e d , i n c l u d i n gb i n d i n gc o n s t a n t sk b i n d i n gs i t e sna n dm a j o rf o r c ec t c i nt h ef o u r t hp a r t , c u r r e n tr e s e a r c hs i t u a t i o nw a s d i s c u s s e d e v e n t u a l l y , o u rr e s e a r c hc o n t e n t s ，i t si n n o v a t i o n , p u r p o s ea n dt h e o r e t i c a l s i g n i f i c a n c ew e r es t a t e d a m o n gt h e m ，e m p h a s i sw a sp l a c e du p o nr e s e a r c hm e t h o d sa n d o b t a i n e di n f o r m a t i o n i na d d i t i o n , f u t u r ew a sp r e d i c t e da n dp r o s p e c t e d i nt h es e c o n dc h a p t e r ，t h eb i n d i n go fc u ( i i ) t ob o v i n es e r u ma l b u m i n ( b s a ) w a s i n v e s t i g a t e db ys p e c t r o s c o p i c ( f l u o r e s c e n c es p e c t r o s c o p y , s y n c h r o n o u sf l u o r e s c e n c ea n d u l t r a v i o l e ts p e c t r u m ) t e c h n i q u e su n d e rs i m u l a t i v ep h y s i o l o g i c a lc o n d i t i o n s q u e n c h i n gf o r i n t r i n s i cf l u o r e s c e n c eo fs e i u ma l b u m i nb yc u ( 1 0w a si n v e s t i g a t e di nd i f f e r e n t t e m p e r a t u r e sb yf l u o r e s c e n c es p e c t r o s c o p y d a t aw e r eh a n d l e db yu s i n gs t e m - 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1 9 ) w 浊b o v i n es e r u ma l b u m i n ( b s a ) w e r e i n v e s t i g a t e db yf l u o r e s c e n c es p e c m l ma n da b s o r p t i o ns p e c t r o s c o p y q u e n c h i n gf o r i n t r i n s i cf l u o r e s c e n c eo fs e n l ma l b u m i n b yp m - 1 9w a si n v e s t i g a t e d i nv a r i o u s t e m p e r a t u r e sb yf l u o r e s c e n c es p e c t r o s c o p y , d a t aw e r eh a n d l e db ys o m ee q u a t i o n s t h e r m o d y n a m i cp a r a m e t e r s 矗臻a g , a s 嘲c a l c u l a t e da n dt h e i ri n t e r a c t i o nf o r c e sw e r e r e v e a l e d n 豫d i s t a n c erb e t w e e nd o n o r ( s e r u ma l b u m i ns a ) a n da c c o p t o r ( p m - 1 9 ) w a s o b t a i n e da c c o r d i n gt of l u o r e s c e n c er e s o n a n e 圯e n e r g yt r a n s f e r ( f r e t ) t h ee f f e c to f p m 一1 9 o nt h ec o n f o r m a t i o no fs e n 强a l b u m i nh a sb e e na 矗a l y z e db ys y n c h r o n o u sf l u o r e s c e n c e s p e c t r o s c o p y i tw a sp r o v e dt h a tt h ef l u o r e s c e n c eq u e n c h i n go fs ab yp m - 1 9i sm a i n l y 鑫 m s d to fs t a t i cq u e n c h i n ga n dn o n - r a d i a t i o ne n e r g yt r a n s f e r t h eb i n d i n gc o n s t a n t so ft h e c o m p l e xf o r m e db yp m - 1 9a n ds a i s1 0 4 _ 1 0 6 l - m o r l ，w h i c hi l l u s t r a t e dt h a tt h ec o m p l e xi s m o r es t a b l e ri n d i c a t e dt h a tp m - 1 9c a nb es t o r e da n dt r a n s p o r t e db ys a e l c c 臼o s t a t i c f o r c ep l a y e da ni m p o r t a n tr o l ei nt h eb i n d i n gr e a c t i o n ；h y d r o g e nb o n d sa n dv a nd e rw a a l s i n t e r a c t i o n sp l a yam a j o rr o l ei ns t a b i l i z i n gt h ec o m p l e x 。i na d d i t i o n , t h eb i n c u n gi n s t a n c e ， i s 4 ，1 4 n m 圆s a - p m - 1 9 ) a n d4 。2 1 n m ( h s a - p m - 1 够r e s p e c t i v e l y f u r t h e r m o r e s y n c h r o n o u sf l u o r e s c e n c es p e c t r as h o w e dt h a tt h eb i n d i n gs i t e sf o rp m - 1 9i sc l o s et o t r y p t o p h a nr e s i d u e ( t r p2 1 2 ) o fb s aa n dt r p2 1 4o fh s a t h em i c r o e n v i r o n m e n to ft h e t y r o s i n ea n dt r y p t o p h a nr e s i d u eh a sn o to b v i o u sc h a n g e d ，w h i c hi n d i c a t e d t h a t t h e i n t e r a c t i o no f p m 1 9 晰ms ad o e sn o ta f f e c tt h ec o n f o r m a t i o no f s e r u ma l b u m i n i nt h ef o u r t hc h a p t e r , t h ei n t e r a c t i o nb e t w e e n4 - n i t r o a n i l i n ea n ds e r u ma l b u m i n ( s a ) h a sb e e ns t u d i e d b y f l u o r e s c e n c e s p e c t r o s c o p y ,a b s o r p t i o ns p e c t r a ,s y n c h r o n o u s f l u o r e s c e n c ea n dt h r e ed i m e n s i o n a lf l u o r e s c e n c e s p e c t r a q u e n c h i n go f i n t r i n s i c f l u o r e s c e n c eo fs aw a si n v e s t i g a t e da td i f f e r e n tt e m p e r a t u r e s t e m - v o h n e ra n dd o u b l e l o g a r i t h me q u a t i o n sw e r eu s e dt os t u d yv a r i o u sb i n d i n gp a r a m e t e r s t h et h e r m o d y n a m i c p a r a m e t e r sh a da l s ob e e nc a l c u l a t e d t h eb i n d i n ga v e r a g ed i s t a n c e , rb e t w e e nt h ed o n o r ( s a ) a n da c c e p t o r ( 4 - n i t r o a n i l i n e ) w a sd e t e r m i n e db a s e do nt h ef 6 r s t e r st h e o r y t h e e f f e c to f 4 - n i t r o a n i l i n eo nt h ec o n f o r m a t i o no f s e r u ma l b u m i nh a sb e e na n a l y z e db ym e a n s o fs y n c h r o n o u sa n dt h r e ed i m e n s i o n a lf l u o r e s c e n c es p e c t r o s c o p y as t r o n gf l u o r e s c e n c e q u e n c h i n gr e a c t i o no f4 - n i t r o a n i l i n et os aw a so b s e r v e da n dt h eq u e n c h i n gm e c h a n i s m w a ss u g g e s t e da ss t a t i cq u e n c h i n ga n dn o n r a d i a t i o ne n e r g yt r a n s f e r i na d d i t i o n , f o rb s a , a t 壤痨e fl i g a n dc o n c e n t r a t i o n , t h es t c m - v o l m e rp l o te x h i b i t sa l lu p w a r dc o r v a t u 托, c o n c a v et o w a r d st h ey - a x i s i ti l l u s t r a t e db o t hd y n a m i ca n ds t a t i cq u e n c h i n gw a si n v o l v e d t h e r ei sa b e mo n ec l a s sb i n d i n gs i t e sf o rb i n d i n go f4 - n i t r o a n i l i n et os a t h e r m o d y n a m i c a n a l y s i ss h o w e dt h a te l e c t r o s t a t i ca n dh y d r o p h o b i ei n t e r a c t i o n sw e r et h em a i n l yb i n d i n g f o r c en e g a t i v eg i b b sf r e ee n e r g y ( a ，p o s i t i v ee n t r o p y ( 矗黪a n dn e g a t i v ee n t h a l p y ( 氐国 v a l u e si n d i c a t e dt h ei n t e r a c t i o nb e t w = n4 - n i t r o a n i l i n ea n ds ai ss p o n t a n e o u s t h eb i n d i n g i n s t a n c e ，i s3 8 7 r a nf o rb s aa n d3 7 6 n mf o rh s a r e s p e c t i v e l y f u r t h e r m o r es y n c l | i o n o 懈 f l u o r e s c e n c es p e c t r as h o w e dt h a tt h eb i n d i n gs i t e sf o r4 - n i t r o a n i l i n ei sc l o s et ot r y p t o p h a n r e s i d u eo fs a i ti sa l s oi n d i c a t e dt h a tt h ep o l a r i _ i ya r o u n dt h et r y p t o p h a nr e s i d u e sw e r e d e c r e a s e da n dt h eh y d r o p h o b i c i t yw a si n c r e a s e d t h et h r e ed i m e n s i o n a lf l u o r e s c e n c e s p e c t r ap r o v e dt h a t4 - n i t r u a n i l i n ed e s t r o y e do r d e r e ds m m t u r eo fs a ，r e s u l t i n gi nf o r m a t i o n o f m o r ef o l d i n go f s a i nt h ef i f t h c h a p t e r , a b s o m t i o n f l u o r e s c e n c e ，s y n c h r o n o u sf l u o r e s c e n c ea n dt h r e e d i m e n s i o n a lf l u o r e s c e n c e s p e c t r a w e r eu s e dt o i n v e s t i g a t e t h ei n t e r a c t i o no f 2 , 4 - d i n i t r o a n i l i n ew i t hb s a d a t aw a st r e a t e db ys e v e r a le q u a t i o n s t h ed i s t a n c erb e t w e e n a c c e p m ra n dd o n o r w a sc a l c u l a t e du s i n gf 6 r s t e r st h e o r y i na d d i t i o n , t h ei m p a c to fl i g a n d o nc o n f o r m a t i o no fb s aw a ss t u d i e d 。r e s u l t sr e v e a l e dt h a t8 扭t i cq u e n c h i n go c c b r s t o g e t h e rw t l ln o n - r a d i a t i o ne n e r g yt r a n s f e r a sar e s u l t , 2 , 4 - d i n i t r o a n i l i n ec a u s e dt h e f l u o r e s c e n c eq u e n c h i n go f b s a b yt h ef o r m a t i o no f c o m