巨分子酶研究进展.ppt

肝功能和生化检测,上海长征医院王爱华,临床生物化学检测是实验诊断学的重要组成部分.为临床诊断、鉴别诊断、病情观察、预后判断和指导治疗提供重要依据.,生化检测主要包括:肝功能、肾功能、血脂、电介质、血糖、心肌酶谱,第一部分肝功能检测,肝脏的基本功能是物质代谢功能在体内蛋白质、氨基酸、糖、脂类、维生素、激素等物质代谢中起着重要作用,肝功能检测常用的实验室项目,蛋白（总、白、球蛋白）胆红素（总、直、间接胆红素）酶类（ALT、AST、LDH、GGT、ALP）胆汁酸,1.总蛋白(由肝脏合成),减低：血液稀释营养不良慢性消耗性疾病合成功能障碍丢失过多,增高：血液浓缩合成增加,2.白蛋白(由肝脏合成),减低：摄入不足合成不足消耗增多丢失增多血液稀释,增高：血液浓缩Addison病,3.球蛋白(由B淋巴细胞及浆细胞产生),球蛋白为血清总蛋白去除白蛋白以外的物质，亦称总球蛋白。球蛋白=总蛋白-白蛋白,球蛋白,减低：免疫功能抑制先天性低-球蛋白血症,增高：慢性肝脏疾病M蛋白血症自身免疫性疾病慢性炎症和慢性感染,白蛋白/球蛋白比值(A/G),参考范围：成人1.5-2.51临床意义：减低或倒置严重肝功能损害M蛋白血症,4.血清蛋白电泳,原理碱性环境中，血清蛋白带负电荷，在电场中向阳极泳动。,参考值白蛋白：0.62-0.711球蛋白0.03-0.042球蛋白0.06-0.10球蛋白：0.07-0.11球蛋白：0.09-0.18,5.胆红素检测,血清总胆红素（STB）非结合胆红素（UCB）间接胆红素结合胆红素（CB）直接胆红素,胆红素的来源,衰老红细胞（7580%）血红素蛋白（2025%）P450，细胞色素，过氧化物酶未成熟红细胞,胆红素测定临床意义,发现隐性黄疸了解黄疸的发展和转化鉴别黄疸种类,胆红素增高伴非结合胆红素溶血性黄疸胆红素增高伴结合胆红素胆汁淤积性黄疸三者均增高肝细胞性黄疸,6.胆汁酸的生理功能,促进脂类的消化吸收调节胆固醇的代谢促进胆汁分泌,胆汁酸测定的临床意义,胆汁酸合成缺陷肝胆疾病胆道梗阻：胆汁淤积，胆汁反流和门脉分流总胆汁酸水平上升肠道疾病胆汁酸的肠肝循环受阻总胆汁酸水平下降,肝脏疾病常用血清酶检测,转氨酶测定（谷丙、谷草）乳酸脱氢酶及其同工酶-L-岩藻糖苷酶测定碱性磷酸酶及其同工酶-谷氨酰基转移酶及其同工酶胆碱酯酶测定谷氨酸脱氢酶测定,诊断肝胆疾病常用酶的分类,肝细胞实质性损害：AST、ALT、LDH胆道疾患：ALP、GGT肝脏实质纤维化：MAO肝脏肿瘤AFU,转氨酶,转氨酶或称氨基转移酶是一组催化氨基酸与-酮酸间转移的酶类丙氨酸氨基转移酶ALT、GPT天冬氨酸氨基转移酶AST、GOT,转氨酶测定的临床意义1,急性病毒性肝炎早期或轻型肝炎时，0.56（3.0,急性肝炎：早期诊断，预后（ALT）ALT/AST比值：正常人1,转氨酶测定的临床意义2,ALT与黄疸分离：重症肝炎ALT与AFP关系：肝炎：AFP，ALT肝硬化：AFP低水平升高肝癌：AFP进行性升高,酶胆分离,ALT逐渐下降，胆红素进行性上升,碱性磷酸酶,Alkalinephosphatase，ALP、AKP磷酸单酯磷酸水解酶膜结合糖蛋白：含锌的糖蛋白肝、骨、肾、肠、胎盘、胆汁、白细胞,血清ALP增高的常见原因,有助于黄疸的鉴别,80%的阻塞性黄疸ALP升高，ALT仅轻度升高肝细胞性黄疸ALT很高，ALP正常或稍高。肝内局限性胆道阻塞时，ALP明显升高，ALT无明显增加，胆红素不高。,-谷氨酰基转移酶,Glutamyltransferase-GT、GGT-谷氨酰转肽酶,-GT临床意义,肝胆阻塞性疾病病毒性肝炎和肝硬化酒精性和药物活动性肝炎其他,-GT与ALP联合测定,当ALP增高时，可用于鉴别增高的ALP是来源于肝还是骨。,第二部分脂类电介质糖类检测,一.脂类脂质代谢异常与动脉粥样硬化的发生有密切联系血脂异常是心脑血管疾病的重要危险因素,血浆脂质的组成十分复杂1.消化道吸收而来2.体内合成3.体内组织中转运而来4.饮食环境和机体生理状态等影响,血脂检测的主要目的发现高血脂评价患CHD的危险度监测饮食或药物疗效,目前临床常做的血脂检测项目,总胆固醇TC甘油三酯TG高密度脂蛋白HDL-C低密度脂蛋白LDL-C载脂蛋白AAPO-AI载脂蛋白BAPO-B脂蛋白(a)Lp(a),总胆固醇(TC)包括:游离胆固醇(FC约占30%)胆固醇酯(CE约占70%)水平并非取决于饮食中摄取的脂质量,主要为体内自身合成。高TC与AS有更直接的关系,高密度脂蛋白（HDL-C）是血清中颗粒最小，密度最大的一组脂蛋白。在胆固醇由末梢组织向肝脏的逆转运中起重要作用。有抗AS作用，被称为好“胆固醇”，在脂蛋白代谢中起重要作用。,低密度脂蛋白（LDL-C）是富含胆固醇的脂蛋白其蛋白成分为APO-B100是AS发生、发展的主要脂类危险因素来源:VLDL异化代谢转变而来肝脏合成直接分泌入血降介:是通过LDL受体途径进行,当LDL受体缺陷时,会导致血浆中LDL水平升高。,脂蛋白（a)Lp（a)是不同于其它脂蛋白的一种独立的脂蛋白和LDL一样携带大量的胆固醇结合于血管壁不仅促进AS形成，且障碍血管内凝块溶解Lp（a)水平高低主要由遗传因素决定,载脂蛋白AI(APO-AI)存在于脂蛋白中直接反应HDL-C水平、颗粒的多少与AS和CHD关系密切(下降),载脂蛋白B(APO-B)存在于脂蛋白中直接反应LDL-C水平、颗粒的多少与AS和CHD关系密切(升高),二.电介质人体体液中无机物与部分以电介质形式存在的有机物统称为电介质.它们参与体液渗透压和酸碱平衡,维持神经肌肉的正常兴奋性,其在血液中浓度的稳定有利于人体各种生化反应的进行.,血清中重要的电介质有:钾(K+)、钠(Na+)、氯(CI-)、碳酸氢盐(HCO3)、磷(P2-)等.它们是机体不可缺少的组成部分,钾(potassium)是细胞内液的主要阳离子.98%的钾离子分布于细胞内液,少量存在于细胞外液,血钾实际反应了细胞外液钾离子的浓度变化.,增高:高钾饮食、急性肾衰少尿期、某些药物、组织损伤和血细胞破坏等.减低:低钾饮食、肾衰多尿期、钾的细胞内转移.,钠(sodium)是细胞外液的主要阳离子.44%存在于细胞外液,9%存在于细胞内液,其余分别在骨胳中.血清钠多以氯化钠的形式存在.,增高:高钠饮食且伴有肾功能不全、体内水分摄入不足或丢失过多等.减低:低盐饮食或丢失过多、水钠储留但水多于钠、酸中毒(钠从细胞外液转移到内液)等.,氯(chloride)是细胞外液的主要阴离子.在细胞内外均有分部.是血浆、胃、小肠及大肠分泌液中最丰富的离子.血氯的调节是被动的,与钠的水平有关.,增高:过量补充含氯液体、肾功不全少尿期、换气过度所致呼吸性碱中毒等.减低:低盐饮食或丢失过多、水钠储留但水多于钠、酸中毒(钠从细胞外液转移到内液)等,磷(phosphorus)70%-80%的磷以磷酸钙的形式沉积于骨胳中,只有少部分存在于体液中.血液中的磷有无机磷和有机磷两种形式,临床所检测的为无机磷.,增高:甲减、肾功能不全所致磷酸盐排出障碍、摄入过多的维生素D促进钙、磷吸收.减低:吸收障碍、呕吐、腹泻等.,三.糖类检测本节介绍糖代谢的主要实验室检查及其临床应用包括:血糖、糖耐量、糖化血红蛋白、糖化血清蛋白.,1.空腹血糖是诊断糖代谢紊乱的最常用和最重要的指标.是目前诊断糖尿病的主要依据.,糖尿病,诊断标准：三多一少血糖浓度升高空腹血糖7.0mmol/L或随机血糖11.1mmol/L,临床意义,增高糖尿病内分泌疾病应激性高血糖药物影响肝源性高血糖生理性升高,减低胰岛素过多对抗胰岛素的激素分泌不足肝糖原贮存缺乏生理性低血糖,2.葡萄糖耐量试验,是检测葡萄糖代谢功能的试验.正常人服用一定量葡萄糖后,血糖浓度暂时升高,由于刺激了胰岛分泌胰岛素增多,促使大量葡萄糖合成肝糖原,临床意义,糖尿病糖耐量减低2型糖尿病痛风肥胖病,糖耐量曲线低平胰岛细胞瘤腺垂体功能减退症低血糖肝源性低血糖功能性低血糖,3.糖化血红蛋白,Glycosylatedhomoglobin，GHb血红蛋白A1（HbA1）中的HbA1C，是血红蛋白生成后以其链末端氨基酸与葡萄糖类进行缩合反应形成的HbA1C酮氨化合物。生成速度取决于血糖浓度及血糖与Hb的接触时间不受短时间内血糖水平波动的影响,临床意义,糖尿病诊断和监测的重要指标鉴别糖尿病性高血糖及应激性高血糖,4.糖化血清蛋白,Glycocylatedserumprotein，GSP血清中葡萄糖与白蛋白及其他蛋白分子N末端发生非酶促糖化反应生成的酮胺结构蛋白质,临床意义,反映患者过去1-2周内平均血糖水平糖尿病诊断和近期控制水平的指标,第三部分心肌酶谱心肌蛋白(包括同工酶检查),心肌内含有多种酶,当心肌损伤时这些酶可由损伤的心肌释放入血,使血内相应酶的活性增高。了解有否心肌损伤及损伤的程度对心肌病变进行诊断,临床常用心肌酶及其同工酶肌酸激酶及其同工酶(CK同工酶)门冬氨酸氨基转移酶及其同工酶(AST同工酶)乳酸脱氢酶及其同工酶(LDH同工酶),同工酶的定义,3、分子结构不同,1、同工酶是以多种分子形式存在于机体的酶,2、催化功能相同,同工酶检测的目的,1、检测同工酶活力比单测定酶的总活力更具有脏器特异性和高灵敏性等优点，因而提高了临床诊断价值,2、早期诊断某些疾病，阳性率高，特异性强。,3、可以估计病情严重性和判断预后。,常用心肌酶及同工酶临床意义,一肌酸激酶同工酶(creatinekinase,)简称CK.,国际酶学委员会的统一编号为EC2.7.3.2，系统命名为ATP；肌酸磷酸转移酶）,肌酸激酶(CK)同工酶的组成CK是由M和B两种亚单位组成的二聚体CK-MM：骨骼肌CK-MB：心肌CK-BB：脑组织,CK同工酶的临床意义1急性心肌梗死（1）CK总活性在急性心肌梗塞后的4小时便开始升高，至20-30小时达高峰，3-5天后下降至基础水平。此酶为诊断心肌梗死的一个极灵敏指标。,4小时,20-30小时,3-5天,（2）CK-MB主要存在于心肌细胞内，急性心肌梗死后先于CK总活力1-2小时升高，12-20小时达峰值，如无并发症3天后回复至正常水平，如果胸痛病人患者在48小时内CK-MB尚在正常水平活力不足总CK的2%，即可排除急性心肌梗死的诊断若已下降的CK-MB再度上升，提示可能有新的心肌梗死发生。,1-2小时,12-20小时,3天后,（1）肌营养不良骨骼肌中富含CK，以CK-MM为主，故各型肌营养不良均可引起CK活力升高，发病年龄越早，予后也越差。其中半数以上可检出CK-MB，（CK-MB/CK5%)而心电图都无阳性发现，说明并非心肌受累。,2神经肌肉系统疾病,二.乳酸脱氢酶同工酶,(LactateDehydrogenase),简称LDH,LD,EC1.1.1.27组成与分布LDH15H,M,MW140,000.LDH1,2:心肌,肾,红细胞LDH3:肺,脾,胰,甲状腺,肾上腺,淋巴结LDH4,5:骨骼肌,肝LDHx:睾丸,精子,LDH同工酶的临床意义,1.急性心肌梗死,总LDH活性:1218h3d714dLDH1:6h24hLDH1/LDH2=124h轻症:总LDH正常,同工酶有变化同时有心衰,心源性休克,LDH5%,2.肝病:急肝:LDH1,2,LDH5肝硬化:LDH2,LDH53.肿瘤:M100%LDH593.7%LDH466.1%LDH34.生殖细胞恶性肿瘤和肾胚细胞瘤:LDH1,12,三.天冬氨酸氨基转移酶同工酶,AspartateTransaminase,简称AST,GOT,EC2.6.1.1,组成与分布线粒体:ASTm,细胞质:ASTs.AST广泛分布于人体各组织器官,此酶在人心,肝,肾和骨骼中含量特别丰富.,琼脂糖电泳法,参考值:正常人不能检出ASTm酶带仅见非深染的ASTs酶带.,ASTm,ASTs,1.AMI:总AST68h4860h45dASTm:亚细胞水平损害晚5h37d:ASTm/总AST25.7%我院:ASTm:12h36h120h死亡:ASTm84.957.8U/L存活:24.716.3U/L2.肝病:急、慢性肝炎,活动性肝硬变ASTm，评价预后3.肿瘤:局灶性肝恶性变ASTs:ASTm