（免疫学专业论文）cd74基因转染对人脐静脉内皮细胞ecv304特性的影响.pdf

原创性声明 l i i ii ii i1 1 1i ii ii 11 1l 18 3 3 5 71 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明 学位论文作者： 明。本声明的法律责任由本人承担。 日期：仞。年。 2 有统计意义 从下图可以看出，待测基因c d 7 4 的扩增曲线平滑，重复性比较好，与对照 转染前c d 7 4 和b a c t i n 相比，转染后c d 7 4 基因的表达明显高于对照转染前 c d 7 4 基因的表达 q 山b d 蛆唑 i ii ；| | | | ：可衫形忻” + 气 、 + 美 转染后c 叭 p 抟染前! l ! c r r r 4 f ! 一一j _ l 1 _ 刃 、 图6b a c t i n 、转染前c d 7 4 、转染后c d 7 4 扩增曲线 a 翻童函妊也q 越 t 。if 瓜 一 t i n = 8 5 8 f 一 q j - - j f v “mn竹 l r m l c l 图7c d 7 4 熔解曲线 6 w e s t e r nb l o t 检测转染前后脐静脉内皮细胞c d 7 4 的表达结果 通过c d 7 4 转染脐静脉内皮细胞后，脐静脉内皮细胞c d 7 4 表达增高。见图8 。 2 0 结果 i - c d 7 4 ， 1 234 图8b - a c t i n 和c d 7 4 w e s t e n b l o t 显色图 1 为转染前b a c t i n 显色结果，2 为转染后b a c t i n 显色结果；3 为转染前 c d 7 4 显色结果，4 为转染后c d 7 4 显色结果。 7 转染前后e c v 3 0 4h l a - a 、h l a - d r 、i f n g r 的表达 r e a l t i m er t - p c r 定量结果见下表，从下表中可以看出通过与对照和b a c t i n 相比，经过c d 7 4 转染后h l a a 基因表达增高有统计学意义，而经过c d 7 4 转 染后i f n g r 和h l a d r 基因表达增高无统计学意义，说明经过c d 7 4 转染后h l a a 基 因表达明显增高，而i f n g r 和h l a d r 基因表达增高不明显。 表5实时定角= r 1 ：p c r 验证结果( i f n g r 、h l o d r - 和h l o a ) 2a a c t 2 有统计意义 从下图可以看出，待测基因i f n g r 、h l a d r 和h l a a 的扩增曲线平滑，重 复性比较好，与对照和b - a c t i n 相比，转染后h l a a 基因的表达明显高于对照 h l a a 基因的表达，而i f n g r 和h l a d r 表达增加不明显。 2 1 结果 皇 曼 q b 凸珏唑 一 。j f l t it 1r 1 1 _ 1 1r t 1 t 一 目 sf f 衫汐勿疹髟一 j 蔓j j 醇钐移徽。l l ，1 1 1 1 l jr r u 物熟嬲矿， w 夭 f 】n _ j 一? 雠 ll + tl ： - 】 - h - - c _ h i - h _ 图9b - a c t i n 、i f n g r 、h l a - d r 和h l a - a 的扩增曲线 盈_ _ 正岫a - 啦“妇 t i n = 8 3 2 盎 迨锶矗毫粕 代 t h - _ 商 图1 0i f n g r 熔解曲线 - - r ， t = 81 8 c 1 f- - l j i l r d n 立岫 t - _ _ - 图1 1h l a d r 熔解曲线 图1 2h l a - a 熔解曲线 8 转染后e c v 3 0 4i l 6 、i c a m 1 、i c a m 2 、v c a m 1 、i l 4 、m c p 1 、i l 8 和i l - 1 的表达 提取转染后的e c v 3 0 4 细胞r n a ，经r t p c r ，琼脂糖凝胶电泳结果见图1 3 。 结果显示：e c v 3 0 4 细胞可检测出i l - 6 、i c a m 一1 、i c a m - 2 、v c a m 一1 、i l 一4 、m c p - 1 、 i l 一8 和i l - 1 的表达。 2 2 结果 图1 3r t - p c r 扩增产物琼脂糖凝胶电泳结果：1 、i l - 6 ；2 、i c a m 2 ；3 、i c a m 1 ：4 、 m c p 一1 ；5 、i l 一4 ；6 、v c a m 一1 ；7 、i l - 8 ：8 、i l - 1 ：m 、m a r k e r ( d l 2 0 0 0 ) 讨论 讨论 c d 7 4 分子是主要组织相容性复合物( m a j o rh i s t o c o m p a t i b i l i t yc o m p l e x ， m h c ) i i 类分子的恒定链，基因位于5 号染色体长臂3 区1 带至3 区3 带 ( 5 q 3 1 q 3 3 ) ，又被称为主要组织相容复合物i i 类抗原相关恒定多肽( c d 7 4 抗 原) ，h l a d r y ，i a - 相关恒定链，类抗原相关y 链，m h ch l a d ry 链。 多年研究已证明，c d 7 4 分子是m h c i i 类分子的恒定链( i i ) ，参与m h c i i 类分子的组装及抗原肽m h ci i 类分子复合物的形成，其功能与m h c i i 类分子 高度相关，在抗原提呈过程中起重要作用。c d 7 4 是翻译后的糖基化产物，并且 存在同源性蛋白质。因为通过免疫共沉淀和琼脂糖电泳发现有不同的条带出现， 并且通过化学去糖基化，仅见到通过其它翻译起始和剪接的产物的同源蛋白质。 最常见的同源蛋白质是3 3 k d a ( p 3 3 ) ，但是同源蛋白质p 3 5 、p 4 1 和p 4 3 也存在【l 】。 同源蛋白质p 3 5 和p 3 3 的主要功能是调节m h ci i 类分子的抗原提呈，而同源蛋 白质p 4 1 则可能在t 细胞在胸腺【2 】内的选择起到重要作用。c d 7 4 常见的翻译后 修饰是加一个糖胺多糖侧链，这种同源蛋白质的作用主要是通过与t 细胞表面 的c d 4 4 相互作用来活化t 细胞【3 1 。 。 ， c d 7 4 是一种具有多种免疫功能的多态糖蛋白，它为大家所知的功能是其对 m h ci i 类分子在抗原提呈细胞的转运的调节作用。近来发现，c d 7 4 是m i f 的 受体复合物的不可缺少的一部分，m i f 作为一种多功能的细胞因子样分子，不 但调节先天性和获得性免疫能力，而且在慢性炎症性疾病和致癌方面也起到很 大的作用。通过研究发现，c d 7 4 在作为m i f 的受体转导信号时需要与c d 4 4 相 结合【4 】，而且必须是硫酸软骨素修饰过的c d 7 4 ，因为c d 4 4 只与这种同源蛋白 质相结合。别外一项研究表明，表达于巨噬细胞具有趋化吸引白细胞到感染部 位的i l 8 【4 】，琪受体c x c r 2 也和c d 7 4 形成复合物，至于c x c r 2 在与c d 7 4 形成的复合物上的作用，还需进一步的研究。 c d 7 4 参与信号转导的作用一开始是猜测的，因为发现它与协调信号转导途 2 4 讨论 径的蛋白相连被磷酸化”】。令人感兴趣的是，c d 7 4 缺陷的小鼠有b 细胞分化 的缺陷，从而降低滤泡b 细胞的水平，这让我们进一步认识到通过c d 7 4 转导 的信号在b 细胞分化中起到的重要作用。单独的c d 7 4 胞浆区通过活化n f r b 就可以诱导b 细胞成熟【8 】c d 7 4 具有增强b 细胞活性的功能，因此，它与b 细 胞肿瘤相关，如与幽门螺杆菌相关的胃腺相关的淋巴组织淋巴瘤。通过实验表 明，c d 7 4 可以诱导n f r b 活化和i l 8 产生。在前面已经提到，c d 7 4 在作为 m i f 的受体转导信号时需要与c d 4 4 相结合，在这里m i f 与c d 7 4 结合后，c d 4 4 起到启始活化e r k l 和e r k 2 信号转导途径。有c d 4 4 缺陷或转染以截短的c d 4 4 的细胞不能诱导活化e r k 信号转导途径【4 1 。在b 细胞中，m i f 与c d 7 4 结合诱 导a k t ，s y k 和n f r , b 活化，而且诱导c d 4 4 依赖方式的增生( 9 】。也有研究表 明在单核细胞中c x c r 2 也与c d 7 4 形成复合物【l o 】，在这项研究中显示m i f 直 接与c x c r 2 相连而诱导单核细胞的捕获。这项研究进一步表明m i f 或许与 c x c r 4 在t 细胞上相互作用诱导活化效应t 细胞的捕获，然而，至于c d 7 4 是 如何与c d 4 4 和c x c r 2 组成复合物，既然c x c r 2 和c x c r 4 是g 蛋白偶联受 体，那么通过c x c r 4 又是转导什么样的信号是不清楚的。 c d 7 4 与m i f 结合诱导激活n f r b 信号转导途径并引发接下来的一系列细 胞反应，如炎性细胞因子的分泌。m i f 通过抑制糖皮质激素对炎症免疫反应的 负面影响从而加强炎症反应，如提高i l 1 、i l 8 、t n f o 【】表达。通过c d 7 4 参 与诱导产生的一种主要的炎性细胞因子是i l 8 ，而i l 8 是吸引中性粒细胞到炎 症或感染部位的趋化性因子。一旦到达，中性粒细胞就开始吞噬抗原并形成吞 噬泡，而在这个吞噬泡中会有反应性氧产物和水解酶的释放，这个过程在机体 抗感染的机制中是非常重要的。 最近，发现c d 7 4 也表达于除抗原提呈细胞外的其它细胞表面，如内皮细胞 【1 2 1 。这项研究表明独立于m h ci i 类分子表达的c d 7 4 也可能有其它的功能 13 1 。 为探讨c d 7 4 在内皮细胞的表达及其意义，本文采用人脐静脉内皮细胞株 ( e c v 3 0 4 细胞株) ，对其c d 7 4 基因及分子的表达进行检测，同时观察c d 7 4 2 5 讨论 基因转染对e c v 3 0 4 细胞m h c i 类分子、m h c i i 类分子、i f n g r 等基因表达 的影响，发现c d 7 4 基因和分子在内皮细胞表达增加，不引起m h c i i 类分子和 i f n g r 表达增加，说明在e c v 3 0 4 细胞的c d 7 4 是独立于m h c i i 类分子的表达， 可能有与抗原提呈不同的其他生物学功能。 本研究结果显示，c d 7 4 基因转染e c v 3 0 4 细胞后，m h c i 类分子表达增加。 人类白细胞抗原h l a a t l 4 是m h ci 类分子表面受体亚型的组成部分，其基因 位于6 号染色体短臂，h l a a 分子表达于所有有核细胞和血小板。h l a a 分子 由仅链和较小的p 链组成，其中0 【链由h l a a 基因编码。在所有哺乳动物中， 人的m h ci 类分子在其初级结构有非常大的变化，而h l a a 基因序列是其中 变化最快的。本实验通r e a l t i m er t - p c r 检测c d 7 4 转染前后其表达情况的变化， 结果显示其表达增高显著，具有统计学意义，这表明通过c d 7 4 转染脐静脉内皮 细胞，增强了其表达能力，这可能是c d 7 4 所触发激活的细胞内信号转导系统的 级联反应影响并增强了h l a a 的表达，至于c d 7 4 是怎样影响h l a a 表达增 强的，还需进一步的实验研究。 血管内皮细胞是位于血管内壁的单层细胞，具有分泌血管活性物质、参与 炎症细胞和免疫细胞游走、维持血管舒缩等多方面生物学功能，与机体多种生 理、病理功能相关。通常情况下，血管内皮细胞除表达m h c i 、m h c i i 类分子 外，还可表达细胞间黏附分子1 ( i c a m 1 【”】、c d 5 4 ) 、血管细胞黏附分子1 ( v c a m 1 【1 6 】、c d l 0 6 ) 、单核细胞趋化蛋白1 ( m c p 1 ) 等多种膜分子，并在 一定条件下分泌可溶性细胞因子。这些膜分子和细胞因子的产生将直接与血管 内皮细胞功能相关。因此，为探讨e c v 3 0 4 功能，本文对转染c d 7 4 基因后 e c v 3 0 4 细胞i l - 6 、i c a m - 1 、i c a m - 2 、v c a m - 1 、i l - 4 、m c p - 1 、i l - 8 和i l - 1 等 基因表达进行检测。 i c a m 1 为单链糖蛋白，是l f a 1 的配体 1 7 】，l f a 1 主要表达于t 淋巴细胞 表面，因此，二者结合可能与t 细胞基质细胞相互作用有关。i c a m 2 是l f a 1 的第二种配体 t s 】，也是一种跨膜糖蛋白，可高表达于静止的内皮细胞表面。这 2 6 讨论 种蛋白可能通过抑制l f a 1 的依赖性细胞粘附而在淋巴细胞再循环中发挥作用： v c a m 1 【1 9 】是v l a - 4 配体，可表达于细胞因子活化的内皮细胞表面，其主要功 能是参与单核吞噬细胞和淋巴细胞向炎症部位浸润。i l 6 的产生细胞主要有单 核吞噬细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞、角细胞、和t h 2 细胞等，主要生物 学作用是促进b 细胞增殖分化和分泌抗体、促进肝合成急性期蛋白、也作为内 源性致热源，参与炎症反应。m c p 1 是c c 细胞因子家族的c c l 2 ，可由炎症介 质刺激的单核吞噬细胞、成纤维细胞、b 细胞、内皮细胞及平滑肌细胞等分泌， m c p 1 细胞表面的受体主要是c c r 2 和c c r 4 e 2 0 1 ，m c p 1 对单核细胞有趋化作 用；可趋化和激活嗜碱性粒细胞。m c p 1 在骨质破坏的组织增多，研究发现其 可由破骨细胞通过核因子r , b ( n f l c b ) 而产生m c p 1 。y 干扰素受体( i f n g r ) 【2 1 】分布在除成熟红细胞之外的几乎所有细胞表面，通过与i f n y 结合而发挥作 用【2 2 】，血管内皮细胞表达i f n g r 与i f n y 结合，可激活血管内皮细胞。 本实验初步检测了c d 7 4 转染前后e c v 3 0 4 细胞表达上述细胞因子和粘附分 子的变化。通过r t - p c r 和琼脂糖凝胶电泳显示i l 一6 、i c a m - 1 、i c a m 一2 、v c a m 一1 、 i l - 4 、m c p - 1 、i l - 8 和i l - 1 等基因均有表达，尚有待通过r e a l t i m er t - p c r 和 蛋白检测进一步分析c d 7 4 基因转染对这些基因和分子表达量的影响。 本文在建立了c d 7 4 基因转染人脐静脉内皮细胞( e c v 3 0 4 ) 的基础上，对 转染前后e c v 3 0 4 细胞表达c d 7 4 、m h c i 、m h c i i 、i l 6 、i c a m 1 、i f n g r 、 i c a m 2 、v c a m 1 、i l 4 、m c p 1 、i l 8 和i l 1 的变化进行了研究，为深入探 讨人脐静脉内皮细胞的功能及其功能调控打下了基础。 2 7 小结 小结 人脐静脉内皮细胞e c v 3 0 4 表达h l a a 、f i l a d r 、i f n g r 和c d 7 4m r n a ； p c m v - c d 7 4 转染可增加e c v 3 0 4 细胞c d 7 4 基因和膜分子的表达，增加h l a - a 基因的表达，但不增加h l a d r 和i f n g r 的表达，为深入探讨c d 7 4 基因与内 皮细胞功能的相关性提供实验数据。 2 8 参考文献 参考文献 【l 】w a r m e r d a mp a ，l o n ge o ，r l c h e p a i s l r o r m so ft h ei n v a r i a n ts h a i nr e g u l a t et r a n s p o r to fm h c c l a s si im o l e c u l e st oa n t i g e np r o c e s s i n gc o m p a r t m e n t s jc e l l b i o l19 9 6 ；13 3 ：2 81 - 2 91 【2 】w r i g h tr j ，b i k o f fe k , s t o c h i n g e r b t h ei i 4 1i s o f o r mo fi n v a r i a n tc h a i nm e d i a t e sb o t hp o s i t i v e a n gm e g t i v es e l e c t i o ne v e n t si nt - c e l lr e c e p t o rt r a n s g e n i cm i c e i m m u n o l o g y1 9 9 8 ；9 5 ：3 0 9 - 3 1 3 【3 】n a u j o k a sm f , m o r i nm ，a n d e r s o nm s ，e ta 1 t h ec h o n d r o i t i ns u l f a t ef i r mo fi n v a r i a n tc h a i nc a n e n h a n c es t i m u l a t i o no f tc e l lr e s p o n s e st h r o u g hi n t e r a c t i o nw i t hc d 4 4 c e l l1 9 9 3 ；7 4 ：2 5 7 2 6 8 【4 】s h ix ，l e n gl ，w a n gt e ta 1 c d 4 4i st h es i n g n a l i n gc o m p o n e n to ft h dm a c r o p h a g e i m m u n i t y 2 0 0 6 ；2 5 ：5 9 5 - 6 0 6 【5 】a n d e r s o nh a ，r o c h ep a p h o s p h o r y l a t i o nr e g u l a t e st h ea n t i g e np r o c e s s i n gc o m p a r t m e n t s j i m m u n o l1 9 9 8 ；1 6 0 ：4 8 5 0 - 4 8 5 8 【6 】k u w a n at , p e t e r s o np a ，k a r l s s o nl e x i to fm a j o rh i s t o c o m p a t i b i l i t yc o m p l e xc l a s si i y n v a r i a n t c h a i n p 3 5c o m p l e x e s f r o mt h d e n d o p l a s m i c r e t i c u l u mi sm o d u l a t e d b y p h o s p h o r y l a t i o n p r o c n a t l a c a ds c iu s a1 9 9 8 ；9 5 ：1 0 5 6 1 0 6 1 【7 】s p i r or c ，q u a r a n t av t h ei n v a r i a n tc h a i ni sap h o s p h o r y l a t e ds u b u n i to fc h a s s i im o l e c u l e s j i m m u n o l19 8 9 ；14 3 ：2 5 8 9 - 2 5 9 4 8 】m a t x ad ，w o l s t e i no ，d i k s t e i nr ，e ta 1 i n v a r i a n tc h a i n ，y n d u c e sbc e l lm a t u r a t i o n ，b ya c t i v a t i n g a t a f ( i i ) 10 5 - n f k a p p a b - d e p e n d e n tt r a n s c r i p t i o np r o g r a m j b i o lc h e m 2 0 0 1 ；2 7 6 ：2 7 2 0 3 - 2 7 2 0 6 【9 】g o r ey s t a r l e t sd ，m a h a r s h a kn ，e ta 1 m a v r o p h a g em i g r a t i o ni n h i b i t o r yf a c t o ri n d u c e sbc e l l s u r v i v a lb ya c t i v a t i o no f ac d 7 4 - c d 4 4 r e c e p t o rc o m p l e x jb i o lc h e n2 0 0 8 ；2 8 3 ：2 7 8 4 2 7 9 2 【10 】b e r n h a g e nj , k r o h nk , l u eh ，e ta 1 m i fi s an o n c o g n a t el i g a n go fc x cc h e m o k i n e r e c e p t o r si n i n f l a m m a t o r ya n ga t h e r o g e n i cc e l lr e c r u i t m e n t n a tm e d2 0 0 7 ；1 3 ：5 8 7 - 5 9 6 1 l 】c a l a n d r at , m e t zc n ，s p i e g e ll a ，e ta 1 m i fa sag l u c o c o t i c o i d y n d u c e dm o d u l a t o rl fc y t o k i n e p r o d u c t i o n n a t u r e19 9 5 ；3 7 7 ：6 8 7 1 1 2 b a r r e r ac a ，b e s w i c ke j ，s i e r r aj c ，e ta 1 p o l a r i z e de x p r e s s i o no fc d 7 4b yg a d t r i ce p i t h e l i a l c e l l s jh i s t o c h e mc y t o c h e n2 0 0 5 ；5 3 ：1 4 8l 一1 4 8 9 【1 3 h e n n ec ，s c h w e n kf k o c hn ，m o i l e re s u r f a c ee x p r e s s i o no ft h ei n v a r i a n tc h a i n ( c d 7 4 ) i s i n d e p e n d e n t o fc o n c o m i t a n t d x p r e s s i o n o fm a j o r h i s t o c o m p a t i b i l i t yc o m p l e xc l a s si i 2 9 参考文献 a n t i g e n s i m m u n o l o g y1 9 9 5 ：8 4 ：1 7 7 - 1 8 2 【1 4 】n o b l ej ，v a l d e sa ，b u g a w a nt e ta 1 n eh l a c l a s sial o c u sa f f e c t ss u s c e p t i b i l i t yt ot y p e1 d i a b e t e s h u mi m m u n o l2 0 0 2 ；6 3 ( 8 ) ：6 5 7 - 6 6 4 【15 】y a n gl ，f r o i or m ，s c i u t ot e ，e ta 1 i c a m lr e g u l a t e sn e u t r o p h i la d h e s i o na n dt r a n s c e l l u l a r m i g r a t i o no ft n f a l p h a - a c t i v a t e dv a s c u l a re n d o t h e l i u mu n d e rf l o w b l o o d2 0 0 5 ；10 6 ( 2 ) ： 5 8 4 5 9 2 【1 6 w ut c t h er o l eo f v a s c u l a rc e l la d h e s i o nm o l e e u l e o li nt u m o ri m m u n ee v a s i o n c a n c e rr e s 2 0 0 7 ：6 7 ( 13 ) ：6 0 0 3 - 6 0 0 6 【17 b e l l aj ，k o l a t k a rp r , m a r l o rc w e ta 1 1 1 1 es t r u c t u r eo ft h et w oa m i n o t e r m i n a ld o m a i n so f h u m a ni c a m - 1s u g g e s mh o wi tf u n c t i o n s 鹋ar h i n o v i r u sr e c e p t o ra n da sa nl f a - li n t e g r i n l i g a n d p r o c n a t l a c a d s c i u s a 1 9 9 8 ；9 5 ( 8 ) ：4 1 4 0 _ 4 1 4 5 【18 】h e i s k al ；a i r h a nk g - r 6 n h o l mm ，e ta 1 a s s o c i a t i o no fe z r i nw i t hi n t e r c e l l u l a ra d h e s i o n m o l e c u l e la n d 2 ( i c a m la n di c a m - 2 ) r e g u l a t i o nb yp h o s p h a t i d y l i n o s i t o l4 ，5 - b i s p h o s p h a t e j b i 0 1 c h e m19 9 8 ；2 7 3 ( 3 4 ) ：218 9 3 _ 2l9 0 0 【19 】b a r r e i r o ，o l g a ；y a n e z - m om a f i a ，e ta 1 d y n a m i ci n t e r a c t i o no fv c a m - la n di c a m - 1w i t h m o e s i na n de z r i ni nan o v e le n d o t h e l i a ld o c k i n gs t r u c t u r ef o ra d h e r e n tl e u k o c y t e s j c e l lb i o l 2 0 0 2 ；1 5 7 ( 7 ) ：1 2 3 3 - 1 2 4 5 【2 0 c r a i gm j ，l o b e r gr d c c l 2 ( m o n o c l ec h e m o a t t r a c t a n tp r o t e i n 1 ) i nc a n c e rb o n e m e t a s t a s e s c a n c e rm e t a s t a s i sr e v2 0 0 6 ；2 5 ( 4 ) ：6 1l _ 6 1 9 【21 t h i e ld j ，l ed um h ，w a l t e rr l ，e ta 1 o b s e r v a t i o no fa nu n e x p e c t e dt h i r dr e c e p t o rm o l e c u l e i nt h ec t y s t a ls t r u c t u r eo f h u m a ni n t e r f e r o n g a m m ar e c p t o rc o m p l e x s t r u c t u r e2 0 0 0 ；8 ( 9 ) ：9 2 7 9 3 6 2 2 】b a c he a ，a g u e tm ，s c h r e i b e rr d t h ei f ng a m m ar e c e p t o r ：ap a r a d i g mf o rc y t o k i n e r e c e p t o rs i g n a l i n g a n n ur e vi m m u n o l1 9 9 7 ；1 5 ：5 6 3 - 5 9 6 c d 7 4 表达的生物学作用及其与疾病相关性的研究进展( 综述) 综述 c d 7 4 表达的生物学作用及其与疾病相关性的研究进展 焦扬综述 杜英审校 摘要 c d 7 4 分子是m h c i i 类分子的恒定链( i i ) ，是一种具有多种免疫功能的多态 糖蛋白，它为大家所知的功能是其对m h ci i 类分子在抗原提呈细胞的转运的调 节作用，近来研究还发现c d 7 4 可做为巨噬细胞移动抑制因子的受体，与相应细 胞因子结合激活n f r d 3 和e r k l 2 信号转导途径，进而诱导炎性细胞因子的分 泌，研究还发现，c d 7 4 除了表达于抗原提呈细胞，与抗原提呈有关外，c d 7 4 分子还在内皮细胞、肿瘤细胞表达，与相应疾病的发生、发展有关。 关键词：c d 7 4 ；m i f ；m h c 1 1 分子；抗原提呈；信号转导。 近年来由于分子生物学、分子免疫学及其相关高技术学科的飞速发展，使 得人们对白细胞分化抗原的结构与功能有了更深入的了解，对其生物学作用也 有了更深入的研究。它广泛参与机体的各种病理生理过程，受到人们越来越多 的关注。诸多研究已经表明白细胞分化抗原与很多疾病的生物学行为有密切关 系，同时，白细胞分化抗原对很多疾病的免疫辅助治疗有很大的潜在应用价值， 已经成为一个新兴的研究领域。本文对c d 7 4 】的生物学作用及其与疾病的相关 性进行如下综述。 一、c d 7 4 的表达及其生物学作用 c d 7 4 分子是主要组织相容性复合物( m a j o rh i s t o c o m p a t i b i l i t yc o m p l e x ， m h c ) i i 类分子的恒定链2 】【3 1 ，基因位于5 号染色体长臂3 区1 带至3 区3 带 ( 5 q 3 1 q 3 3 ) ，以前又被称为主要组织相容性复合物i i 类抗原相关恒定多肽【4 1 ( c d 7 4 抗原) 5 1 ，还被称为”h l a d r y 【6 】- ，”i 矗相关恒定链【7 】，”i i 类抗原相关 y 链【8 】f i ”m h ch l a d ry 链【9 】t 。 3 1 c d 7 4 表达的生物学作用及其与疾病相关性的研究进展( 综述) 1 、c d 7 4 和m h c 抗原在胎儿组织的共表达 在免疫反应起始阶段，m h c i i 抗原与小分子抗原肽在抗原提呈细胞表面表 达是引起c d 4 + t 淋巴细胞识别和活化的重要因素。在此过程中，m h c 1 1 分子 的恒定链0 i ；c d 7 4 ) 对于m h c 1 1 分子的表达和抗原肽的负载有很大影响，因此 m h c i i 类分子与c d 7 4 共表达在抗原提呈中起到重要作用。文献【i o 】中采用商业 化的i i c d 7 4 ( l n 2 ) 和m h c i i 抗原( l n 3 ) 单克隆抗体，分别对经过福尔马林固定、 石蜡包埋的人流胚胎( 7 1 2 周) 多种组织块进行了组织化学染色，在皮肤、近 端肾小管、小肠粘膜和网状内皮系统细胞发现i i c d 7 4 和m h c i i 抗原的共显色， 但在肺泡上皮和睾丸间质细胞( 1 1 个样本，全阳性) 只有i i c d 7 4 而没有m h c i i 抗原的表达，其显色的分布和强度不随年龄的变化而变化。这项研究通过描 述i i c d 7 4 和m h c i i 抗原在人胚胎组织中的分布，确定i i c d 7 4 和m h c i i 抗 原在大部分胚胎组织共表达，但是也有例外。在所有只有i i c d 7 4 而没有m h c i i 抗原的表达的组织中，肺泡上皮和睾丸间质细胞显得格外引人注目。这项研 究表明i i c d 7 4 分子除了在抗原提呈中起作用外还有其它功能。 2 、c d 7 4 和脂筏对树突状细胞表面c d l a 表达的调节 在不成熟的树突细胞( d c s ) 中，c d l a 仅表达在细胞表面，但我们对这种 膜组织知道的并不多。文献报道了m h c i i 类分子恒定链( i i ) 和c d 9 分子与c d l a 在d c s 中免疫共沉淀，而且c d l a i i 的共同定位依赖于脂筏【l l 】的完整性。在 h e l a - c i i t a 细胞中c d l a 的表达促进i i 向细胞表面迁移，肯定的这对组合的相 关性。而且，沉默d c s 上的i i 诱导c d l a 在质膜表面上明显的聚集，然而c d l a 的表达与对照细胞相似。这些数据表明通过与i i 形成组合可以易化c d l a 的再循 环。通过由于筏阻断而引起的c d l a 抗原提呈的抑制表明c d l a 定位于脂筏与其 功能相关。总的来说，对于不成熟d c s 表面的c d l a 的组织分子和其作为抗原 提呈分子作用的免疫功能的调节，i i 和脂筏起到关键的作用。 3 、c d 7 4 对内体的调节作用 c d 7 4 即m h c 1 1 分子相关恒定链( i i ) ，具有抑制内体内吞转运的作用，这 些特性对抗原的处理和提呈具有明显的影响。通过无细胞内体融合显示，用渥 曼青霉素阻断磷酸肌醇3 激酶后i i 的表达可以提高内体的融合。在活细胞中， 渥曼青霉素不能阻断i i 诱导的内体扩大。h 对内体【1 2 】转动和形态的影响依赖于 其胞浆尾部分。通过诱变分析和以核磁共振为基础的结构分析所得的数据可证 明不参与内部盐桥形成的自由负电荷对和n 尾相互作用和扩大内体的形成是重 3 2 c d 7 4 表达的生物学作用及其与疾病相关性的研究进展( 综述) 要的。相关性表明，是i i 胞浆尾部分的相互作用参与了内体的融合。综合活细 胞、无细胞分析和分子动力模型的数据，表明在不同囊泡内的i i 分子具有促进 内体的对接和融合的作用，因此它可以控制内体对膜蛋白和内体成分的转运。 4 、c d 7 4 参与膜内蛋白加工的过程 不少调节蛋白，其中包括转录因子，一般都是处于休眠状态，只有受到内 外环境的适当刺激才能被激活。近来，一种新的方法是通过蛋白裂解来活化动 员处于休h 民状态的转录因子。这种转录因子开始以无活性的形式合成的并结合 在整合膜蛋白前体上。经过裂解，活性片断被释放并转移进核内驱动调节基因 转录。这种调节膜内蛋白水解( r i p ) 【1 3 】作用控制着原核和真核生物对各种信号反 应的各种生物程序。m h c 1 1 分子伴侣、c d 7 4 ( 恒定链，i i ) 被认为是多种信号 转导途径的信号分子。近来，文献证明了经过膜内裂解，c d 7 4 的胞质片断 ( c d 7 4 i c d ) 被释放并诱导由n f 1 c bp 6 5 r e l a 二聚体和富共激活因子的b 细胞 t a f ( i i ) 1 0 5 介导的转录激活。因此把c d 7 4 归类于越来越多的r i p 蛋白加工家族。 研究表明，c d 7 4 的膜外部分必需在膜内小室内加工裂解才能释放其膜内区域 c d 7 4 i c d 。通过实验表明，c d 7 4 i c d 通过转位到核内来诱导激活n f kb 的 p 6 5 。 5 、m i f 结合c d 7 4 启动m i f 的信号转导 巨噬细胞移动抑制因子【1 4 】( m i f ) 是早期发现的细胞因子之一，近来它被认 为是调节先天性和获得性免疫的重要调节因子。m i f 1 5 】是单核巨噬细胞的上游 激活因子，它主要参与脓毒性休克、关节炎和其它炎症性疾病的致病机制。m i f 蛋白是由高度保守的唯一的单基因编码。通过表达克隆和功能性分析：确定 c d 7 4 是一种i i 型跨膜蛋白，是m i f 的一种高亲合性结合蛋白。m i f 1 6 】与c d 7 4 的细胞外结构域结合，对于m i f 诱导活化的由细胞外信号激酶1 2m a p 激酶调 节的级联反应、细胞增殖和前列腺素e 2 的产生，c d 7 4 是必不可少的。然而， 可溶性c d 7 4 与m i f 1 j 7 】结合可抑制m i f 介导的细胞外信号调节的激酶活性。这 些数据给我们提供了m i f 与靶细胞相互作用的分子基础。 6 、c d 7 4 与c x c r 4 形成功能性复合物介导m i f 的信号传导 m i f t l 8 】是一种趋化性因子样的炎性介质，通过与c x c r 2 1 9 】和c x c r 4 2 0 1 结 合而导致白细胞的聚集，也和单链跨膜受体c d 7 4 相互作用。尽管知道了c d 7 4 与c x c r 2 形成的复合物有聚集白细胞的功能，但是不知道c d 7 4 是否也能与 c x c r 4 相结合。通过c d 7 4 与c x c r 4 在h e k 2 9 3 细胞的共同表达，演示了 3 3 c d 7 4 表达的生物学作用及其与疾病相关性的研究进展( 综述) c d 7 4 c x c r 4 复合物【2 l 】的形成。缺乏e r 保留信号的c d 7 4 的表达证明了 c d 7 4 c x c r 4 在细胞表面形成复合物，重要的是，内源性c d 7 4 c x c r 4 复合物 可以通过免疫共沉淀，从单核细胞中分离得到，最后，m i f 刺激的c d 7 4 依赖的 a k t 激活，受到c x c r 4 和c d 7 4 抗体和a m d 3 1 0 0 的阻断，而c x c l l 2 刺激 a k t 的激活没有被c d 7 4 抗体减低。因此，c d 7 4 与c x c r 4 形成功能性复合物 介导m i f 2 2 】的信号传导。 7 、c d 7 4 与m h c i 类分子的组合 m h c i i 类分子【2 3 1 的分子伴侣恒定链【2 4 】( i i ) 和m h c i 类分子是怎样形成 的组合还不清楚，但它们相互作用的基础是已经确定了的。i i 的c l i p 2 s j 区参与 它们之间的相互作用是已经经过证明的。c l i p 9 1 9 9 残留片断可以稳定多种 m h c i 等位基因，这种稳定作用是通过9 9 号位残留的蛋氨酸与h 2 k ( b ) 结合而 9 1 号位残留的蛋氨酸与r t l a ( a ) 结合。i i 也可以在m h c i 类分子的肽结合区 检测到。这些数据对于h 与m h c i 类分子形成的组合作出了解释。 8 、c d 7 4 是型血管紧张素受体i ( a g t r l ) 的相互作用蛋白 对于蛋白蛋白相互作用通过生物合成途径调节i i 型血管紧张素受体i ( a g t r l ) 2 6 】表达是了解不多的。通过定点突变研究，a g t r l 近膜端胞浆区被 确定为a g t r l 正常折叠和表面表达的重要位点。用a g t r l 羟基术端尾作为诱 饵通过酵母双杂交筛选人肾e d n a 文库，确认恒定链c d 7 4 作为一个新的相互 作用蛋白，这种相互作用通过免疫沉淀和共同定位研究得到肯定。c d 7 4 在 a g t r l 羟基末端尾的结合位点定位于以前被认为是a g t r l 从内质网脱出的重 要位点，存在于许多g 蛋白偶联受体。c d 7 4 和a g t r l 通过在c h o k 1 瞬时共 表达降低了a g t r l 细胞表面密度，而且c d 7 4 和a g t r l 羟基末端尾的相互作 用导致a g t r l 在内质网的滞留并导致其蛋白酶体的降解。这些研