（外科学专业论文）fascin及p27蛋白在胆囊癌中的表达及意义.pdf

目录 一、摘要 中文论著摘要l 英文论著摘要3 二、论文 前言5日u 吾 材料与方法6 结果7 讨论”lo 结 念”l1 三、本研究创新性的自我评价”1 2 四、参考文献”1 3 五、附录 综述”1 4 在学期间科研成绩2 7 致谢”2 8 个人简介2 9 中文论著摘要 f a s c i n 及p 2 7 蛋白在胆囊癌中的表达及意义 目的 通过检测胆囊癌及胆囊息肉组织中f a s c i n 蛋白和p 2 7 的表达情况，探讨胆囊 癌中f a s c i n 蛋白表达与胆囊癌的肿瘤分级、临床分期、肿瘤大小等及胆囊癌中p 2 7 表达的相关性。寻找与胆囊癌发生发展有关的分子标记物，为胆囊癌的早期诊断、 恶性行为评估及预后治疗研究提供新的思路。 方法 收集我院2 0 0 7 年1 月一2 0 0 9 年1 2 月的手术切除胆囊癌标本3 0 例，3 0 例胆 囊息肉，均有术后病理证实。所有组织均用1 0 中性福尔马林固定，石蜡包埋， 连续切片，厚度4 9 m 。应用免疫组织化学方法( s p 法) 检测所有标本中f a s c i n 、 p 2 7 的表达情况。统计分析胆囊癌中f a s c i n 蛋白和p 2 7 与胆囊癌临床病理指标及 p 2 7 表达的相关性。 结果 胆囊息肉组织中无f a s c i n 表达，3 0 例胆囊癌标本中有3 0 例表达阳性，f a s c i n 蛋白在胆囊息肉和胆囊癌中的表达具有明显差异性( p 0 0 5 ) 。 结论；口匕 f a s c i n 蛋白和p 2 7 在胆囊癌中表达上调，其表达与胆囊的生长、恶性进展密 切相关。f a s c i n 蛋白可以作为胆囊癌的一个分子标记物，联合检测p 2 7 可用于胆 囊癌的早期诊断、恶性评估及预后分析，并有可能成为一个新的靶点，用于胆囊 癌的分子靶向治疗。 关键词 胆囊癌；f a s c i n 蛋白；p 2 7 ；免疫组化； 2 英文论著摘要 e x la n d g n i f i c a n c qo ff a s c i na n dpxpression a ns i 2 n f l i c a n c eo la s c | na n d2 7i nzl g a l l b l a d d e r c a n c e r o b j e c t i v e t oo b s e r v et h ee x p r e s s i o no ff a s c i na n d p 2 7i ng a l l b l a d d e rc a n c e ta n dc h o l e s t e r o l p o l y p ，a n a l y s ei t s c o r r e l a t i o nw i t ht u m o rg r a d e ，c l i n i c a ls t a g e ，t u m o rs i z e ，a n dt h e e x p r e s s i o no fp 2 7 i ng a l l b l a d d e rc a n c e r m e t h o d s at o t a lo f3 0p a t i e n t sw i t hg a l l b l a d d e rc a n c e rt r e a t e da tt h ed e p a r t m e n to f g e n e r a l s u r g e r y , t h ef i r s ta f f i l i a t e dh o s p i t a lo fc h i n am e d i c a lu n i v e r s i t yb e t w e e n2 0 0 7a n d 2 0 0 9w e r ei n c l u d e di n t ot h e s t u d y a l ls p e c i m e n sw e r ef i x e di n 10 f o r m a l i i l e m b e d d e di np a r a f f i n ，a n dc u ti n t o4 心【i ls e r i a ls e c t i o n s i m m u n o h i s t o c h e m i s t r yw a s u s e dt oo b s e r v et h ee x p r e s s i o no f f a s c i n ，p 2 7i n3 0t i s s u e so fg a l l b l a d d e rc a n c e ra n d3 0 c h o l e s t e r o l p o l y p t h er e l a t i o n s h i p b e t w e e nt h e e x p r e s s i o n o f f a s c i na n d c l i n i c o p a t h l o g i c a lp a r a m e t e r s , e x p r e s s i o no f p 2 7w e r ea n a l y s e ds t a s t i c a l l y r e s u l t o v e r a l l ，n o n - f a s c i ne x p r e s s i o nw a sf o u n di nn o r m a lc h o l e s t e r o lp o l y p 3 0i n e a s e so f g a l l b l a d d e rc a n c e rs p e c i m e n ss h o wp o s i t i v ef a s c i ne x p r e s s i o n t h ee x p r e s s i o n o f f a s c i ni nc h o l e s t e r o lp o l y pa n dc a r c i n o m at i s s u e sh a v ea nd i f f e r e n c e 畎o 0 0 1 ) t h e e x p r e s s i o no ff a s c i ni sp o s i t i v e l yc o n n e c t e d 晰t hd i n i c a ls t a g e ( p = - 0 0 01 ) ，l y m p h a t i c m e t a s t a s i s 俨o 0 11 ) ，e x p r e s s i o no f p 2 7 ( p = 0 0 0 1 ) ，a n dh a sn oc o n n e c t i o nw i t ha g e ，s e x ， t u m o rg r a d ep 0 0 5 ) ，1 - l ：0 m c l u s i o u f a s c i np r o t d na n di n c r e a s e de x p r e s s i o no fp 2 7i ng a l l b l a d d e rc a r c i n o m aa n di t s 3 e x p r e s s i o na n dt h eg r o w t ho ft h eg a l l b l a d d e r , i sc l o s e l y r e l a t e dt o m a l i g n a n t p r o g r e s s i o n f a s c i np r o t e i nc a nb eu s e da sam o l e c u l a rm a r k e ro fg a l l b l a d d e rc a r c i n o m a ， t h ej o i n td e t e c t i o no fp 2 7c a nb eu s e df o re a r l yd i a g n o s i so fg a l l b l a d d e rc a n c e r , m a l i g n a n te v a l u a t i o na n dp r o g n o s i s ，a n dm a yb e c o m ean e wt a r g e tf o rm o l e c u l a r t a r g e t e dt h e r a p yo fg a l l b l a d d e rc a r c i n o m a k e vw o r d s g a l l b l a d d e rc a n c e r ；f a s c i n ；p 2 7 4 论文 f a s e i n 和p 2 7 蛋白在胆囊癌中的表达及意义 刖看 原发性胆囊癌是胆道肿瘤中最多见的一种类型，其发病率近年来有增高的趋 势，由于该病缺少特有的临床表现，一经发现多属中晚期，根治切除率低( 2 0 - 3 8 ) ， 疗效及预后极差，5 年的生存率仅5 以下，影响胆囊癌的预后的主要原因为早期诊 断率低与肿瘤早期的浸润和转移。目前，肿瘤自发侵袭转移的治疗仍是十分艰巨 的任务。由于基因不稳定和基因变异的积累，影响了促进因子和抑制因子之间的 平衡，使肿瘤侵袭性增强、新生血管形成，最终引起转移。这其中涉及多个癌基 因与抑癌基因的改变，并与激活的癌基因及抑癌基因之间的平衡有关。癌基因的 活化、过度表达及抑癌基因的失活，在肿瘤发生过程中发挥了重要作用。因此， 深入了解肿瘤侵袭转移相关基因的功能，有助于人类利用分子技术手段，如基因 治疗等，改变肿瘤细胞基因遗传性或纠正基因突变，从而逆转甚至消除肿瘤扩散 转移等恶性行为【4 】。 f a s c i n 蛋白是肌动蛋白结合蛋白家族中的一员，定位于运动细胞钉状突起和 片状突起的肌动蛋白束的核心【1 1 。它具备两个肌动蛋白结合位点，分别起到调节 f a s e i n 蛋白与f 肌动蛋白的结合活性以及细胞膜表面丝状伪足和微棘的形成的作 用【2 1 。近年来研究发现，f a s c i n 蛋白在许多上皮来源的肿瘤细胞系及肿瘤组织中表 达上调，如乳腺癌、食管癌等。并与肿瘤侵袭及转移有关。这提示f a s e i n 蛋白的 上调表达在上皮肿瘤组织中可能具有组织特异性，并与肿瘤的侵袭和转移有关【3 4 1 。本研究旨在检测胆囊癌组织中f a s e i n 蛋白及p 2 7 的表达情况，并探讨f a s c i n 蛋白及p 2 7 表达与胆囊癌发生及生物学行为的关系。 我们在此理论基础上应用免疫组化方法研究f a s e i n 蛋白和p 2 7 在胆囊癌中的 表达情况，旨在分析探讨f a s e i n 蛋白和p 2 7 与胆囊癌发生发展等生物学行为的关 系，为胆囊癌的早期诊断、恶性行为评估及预后治疗的研究提供更多的理论依据。： s 实验材料 收集我院2 0 0 7 2 0 0 9 年间手术切除的原发性胆囊癌标本3 0 例。患者男1 7 例， 女1 3 例，年龄3 2 - 7 7 岁( 中位年龄5 9 岁) 。按w h o 病理学分类：腺癌3 0 例。 组织学分级：高分化1 4 例，中分化1 1 例，低分化5 例。n e v i n 分期：i 期7 例， i i 期8 例，3 例、期7 例，v 期5 例。胆囊息肉3 0 例，全部为胆囊胆固醇息 肉作为对照，全部患者术前均未接受化疗及放疗。 主要试剂 l 、鼠抗人f a s c i n 单克隆抗体： 构自美国m i l l i p o r e 公司( 克隆号：5 5 k - 2 ) 2 、鼠抗人p 2 7 单克隆抗体： 购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 3 、s p 二抗试剂盒及d a b 显色剂： 购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 实验方法 1 、免疫组化检测( s p 法) 染色步骤： ( 1 ) 组织经1 0 福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，厚度4 啪；将组织切片贴 附于载玻片上并烤干。 ( 2 ) 按顺序进行切片脱蜡：二甲苯i ( 2 0 m i n ) , - - 二甲苯i i ( 2 0 m i n ) - - - 无水乙醇i ( 1 0 m i n ) 无水乙醇i i ( 10 r a i n ) - - 9 5 7 , 醇i ( 3 m i n 卜9 5 乙醇i i ( 3 n 岫卜7 5 乙醇( 3 r a i n ) - 水 洗( 3 m i n ) 蒸馏水洗( 一过) p b s 浸泡( 5 r a i n ) 。 ( 3 ) 抗原热修复：蒸馏水冲洗，2 m i n x 3 次，将切片放入盛有抗原修复液的容器中， 置微波炉内加热使容器内液体温度保持在9 6 一9 8 c 之间，1 5m i n 。取出容 器，室温冷却2 0 - - 3 0m i n ，p b s 浸泡5m i n 。 ( 4 ) 3 过氧化氢室温孵育1 0 m i n ，p b s 冲洗，5 m i n x 3 次。 ( 5 ) 正常山羊血清封闭，室温孵育3 0 m i n 。 ( 6 ) 滴加l ：1 0 0 0 稀释的f a s c i n 抗体工作液，p 2 7 抗体稀释比1 ：2 0 0 ，4 过夜，p b s 6 冲洗，5 m i n x 3 次。 ( 7 ) 滴加生物素化二抗工作液( i g g b i o ) ，3 7 。c 孵育3 0 m i n ，p b s 冲洗，5 m i n x 3 次。 ( 8 ) 滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液( s a m r p ) ，3 7 c 孵育3 0 m i n ，p b s 冲洗， 5 m i n x 3 次。 ( 9 ) d a b 显色剂显色。 ( 1 0 ) 自来水充分冲洗、复染、脱水透明、封片。 2 、结果判定： f a s c i n 蛋白表达定位于癌细胞的胞浆中，指标表达通过两方面评价：表达面积 和表达强度。按照表达面积分为5 组：无表达细胞( o ，阴性) 、表达的细胞数占 切片总细胞数 7 5 ( 4 + ) 。按照表 达强度分为3 组：用以确定为阳性的转移性乳腺癌标本的反应强度作为对照，弱 于它( 1 + ) 、与其相同( 2 + ) 、表达强度比之强( 3 + ) 。每张切片3 种指标综合表达 情况用表达面积与表达强度的乘积表示，即o 1 2 。并分为4 个级别：0 、1 + ( 1 - 4 ) 、 2 + ( 5 8 ) 、3 + ( 9 1 2 ) 。p 2 7 蛋白表达的判定：阳性细胞为细胞核和或胞浆内可见棕 黄、棕褐及浅黄色颗粒。每张切片分别取上、下、左、右及中共5 个区域进行细 胞计数，每个区计数2 0 0 个细胞，共计数1 0 0 0 个细胞，对照阳性切片，计算染色阳性细 胞所占比例。结果分为：阳性细胞 1 0 为( 一) ；1 0 s 阳性细胞 2 5 为( + ) ；2 5 冬 阳性细胞 5 0 ( + + ) ；阳性细胞5 0 为( 卅) 。阳性细胞比例5 0 视为高表达， 阳性细胞比例 5 0 视为低表达【1 3 1 。 3 、统计学分析： f a s c i n 蛋白在胆囊癌和胆囊息肉组织中的表达差别及f a s c i n 蛋白表达与胆囊 癌生物学行为及相关蛋白指标的关系应用s p s s l 3 0 软件进行卡方检验进行分析， 所有结果认为当p o 0 5 有意义。 齄里 当日7 r 1 、f a s c i n 及p 2 7 的表达： 在3 0 例胆囊癌中有3 0 例( 1 0 0 ) f a s c i n 蛋白呈阳性表达，1 6 例p 2 7 ( 5 3 。3 ) 呈阳性表达。3 0 例胆囊息肉中有3 0 例p 2 7 ( 1 0 0 ) 呈阳性表达，凤c i i l 无表达。 7 2 、f a s c i n 蛋白表达和p 2 7 ，临床病理指标的关系： f a s c i n 蛋白在胆囊癌中的表达与其在胆囊息肉中的表达均具有显著差异性( p o 0 5 ) 。f a s c i n 蛋白表达强度与以下因素具有相关性：n e v i n 分期( p o 0 5 ) ，淋巴 结转移( p o 0 5 ) - 与p 2 7 呈负相关( p 0 0 5 ) 。f a s c i n 蛋白表达与年龄，性别，肿瘤大小， 组织学分类无相关性见( 表1 ) 表1 ，f a s c i n 在胆囊癌中的表达及与胆囊癌癌生物学行为的关系： 8 论文图片 免疫组化( s p 染色) f a s c i n 在胆囊 息肉组织中呈( ) x 2 0 0 免疫组化( s - p 染色法) f a s c i n 在胆囊癌 组织中呈( - - - h - ) x 2 0 0 免疫组化( s - p ) p 2 7 在胆囊癌 组织中呈阴性x 2 0 0 9 免疫组化( s - p 染色法) f a s c i n 在胆囊癌组织中呈( + ) x 2 0 0 免疫组化( s - p ) p 2 7 在胆囊 息肉组织中呈阳性x 2 0 0 免疫组化( s - p ) p 2 7 在胆囊癌 组织中呈阳性) 【2 0 0 讨论 胆囊癌作为担道系统常见的恶性肿瘤，其初期表现隐匿，早期诊断比较困难， 其高度的生物学恶性行为已越来越引起人们的注意。由于胆囊癌早期无明显特异 性体征，确诊时多数患者已失去根治手术的机会。近年来在分子生物学及基因技术 领域的研究，为胆囊癌的早期诊断、早期治疗及预后判断提供了新的途径。寻找肿 瘤治疗的新靶点，保护正常组织细胞，调节脱离正常细胞周期轨道的肿瘤细胞回到 正常轨道上来是今后肿瘤治疗的新途径【5 1 。f a s c i n 蛋白作为肌动蛋白结合蛋白家 族中的一员，近年来研究发现，其在大多数脊椎动物组织中表达，特别是在脑、 卵巢及睾丸中高表达。但在不同细胞类型中表达不均一，在几种上皮细胞系中低 或不表达，而在神经元和神经胶质细胞系、骨骼肌和平滑肌细胞系、内皮细胞系 和一些上皮性肿瘤细胞系中高表达，并与肿瘤侵袭及转移有关【5 1 。在人体组织中， f a s c i n 蛋白在乳腺癌、卵巢癌、肺癌、食管癌、胃癌、结肠癌、胆管癌等肿瘤组 织中均出现高频率的阳性表达，并与高肿瘤级别、高增殖分数相关【6 】。这些均提 示f a s c i n 蛋白的上调表达在上皮肿瘤组织中可能具有组织特异性，并且与恶性肿 瘤存在显著的相关关系。本研究应用免疫组织化学方法检测f a s c i n 蛋白和p 2 7 在 胆囊癌中的表达，通过对染色强度、阳性细胞计数评分总体的分析，突出了对趋 势的判定。证实了f a s c i n 蛋白在胆囊癌中表达上调，提示f a s c i n 蛋白的高表达可 能有助于胆囊癌早期的诊断。目前认为f a s c i n 蛋白在肿瘤中上调表达的分子机制 可能存在多条途径。有研究者认为，f a s c i n 蛋白可能是c - e r b b 2 在细胞骨架上的一 种效应蛋白，c - e r b b 2 具有酪氨酸蛋白激酶活性，可通过n f k b 和t a t a 核心因子 ( t a t a c o r ef a c t o r , t c f ) 激活f a s c i n 基因的转录【刀。另外g r o t h e y 等【8 1 通过免疫组 织化学方法研究5 8 例原发性乳腺癌患者，发现雌激素受体及孕激素受体水平与 f a s c i n 表达呈负相关，提示受体缺失可能促成f a s c i n 表达上调，而f a s c i n 蛋白表达上 调可能导致其侵袭行为。杨强掣9 】发现，结、直肠癌中f a s c i n 蛋白表达与p 5 3 表达 相关，而p 5 3 基因缺失是癌变过程后期发生的重要分子水平改变。关于f a s c i n 蛋白 在肿瘤中上调表达的具体途径仍有待进一步研究，以便有助于实现其分子靶向治 疗。，：? 1 0 研究证明接受f a s d n 基因转染的结直肠癌细胞株s w l 2 2 2 ，随着f a s c i n 蛋白 表达的增加，细胞膜表面突起增多，细胞间连接发生解离，细胞分化程度降低， 细胞增殖旺盛，肌动蛋白骨架重建，细胞运动性相应增强。在三维基质中细胞侵 袭能力增加2 5 倍【1 0 】。我们的研究同样发现f a s d n 蛋白在胆囊癌中的表达强度随 n e v i n 分期的升高而升高，淋巴结转移组表达程度明显高于无淋巴转移组与p 2 7 呈负相关。目前认为f a s c i n 基因促进肿瘤侵袭转移主要通过两种途径实现，一为 f a s c i n 基因编码产物f a s c i n 蛋白通过与f 肌动蛋白结合，使细胞膜表面突起增多， 进而改变细胞骨架、细胞与细胞、细胞与细胞外基质的黏附促进肿瘤细胞转移【l l 】。 另一个是f a s c i n 基因的s e r 3 9 位点磷酸化，一方面虽然f a s c i n 蛋白与f 肌动蛋白 结合受到一定程度的抑制，但却可以促进p k c 信号传导通路的激活，形成 f a s c i n p k c 复合物，通过p k c 通路促进肿瘤细胞侵袭转移【1 2 】。以上结果均提示高 表达f a s c i n 蛋白的恶性肿瘤组织组织可能具有更强的侵袭性和转移性。如何提早 明确其作用方式，并在其分子路径上限制其作用，将会有助于恶性肿瘤的早期诊 断及治疗。 结论 从目前的研究来看，f a s c i n 蛋白在胆囊癌的发生进展过程中发挥着很大作用， 其可以作为一个生物学标记，联合检测用做胆囊癌的早期诊断和预后评估。并有 可能成为胆囊癌治疗的一个新靶点。 本研究创新性的自我评价 本研究在国内是首次探讨f a s c i n 蛋白在胆囊癌中的表达情况，首创性地分析 在胆囊癌中f a s c i n 蛋白表达与p 2 7 表达的相互关系。从而能进一步说明f a s c i n 蛋 白表达与胆囊癌发生发展及预后治疗的关系。这为在胆囊癌乃至人体恶性肿瘤中 f a s c i n 蛋白的研究及恶性肿瘤浸润进展等生物学行为的研究积累了更多了资料。 1 2 参考文献 1g a ox ，w ud h f a s c i ne x p r e s s i o ni nh u m a ne p i t h e l i a lt u m o r sa n di t sc l i n i c a ls i g n i f i c a n c e n a n f a n gy ik ed ax u ex u eb a o , 2 0 0 8 ，2 8 ( 6 ) ：9 5 3 - 9 5 5 2 o p a s s i r ikp o m t h o n gb ，a k i y a m at ，e ta 1 as t r e s s - i n d u c e dr i c e ( o r y z a s a t i v a l ) b e t a - g l u c o s i d a s er e p r e s e n t s an e ws u b f a m i l yo fg l y c o s y lh y d r o l a s ef a m i l y5c o n t a i n i n ga f a s c i n - l i k ed o m a i n b i o e h e mj ，2 0 0 7 ，4 0 8 ( 2 ) ：2 4 1 2 4 9 3 k o s t o p o u l o ue ，d a p o n t ea ，te l z i $ a ，e ta 1 f a s c i ni no v a r i a ne p i t h e l i a lt u m o r s h i s t o l h i s t o p a t h o l ，2 0 0 8 ，2 3 ( 8 ) ：9 3 5 9 4 4 4x u el y , s o n gy m ，t o n gt ，e ta 1 e x p r e s s i o no ff 蹈c i na n dc y t o k e r a t i n1 4i ne s o p h a g e a l s q u a m o l l sc e l lc a r c i n o m a z h o n g h u a y ix u ez az h i ，2 0 0 7 ，8 7 ( 3 5 ) ：2 4 9 4 - 2 4 9 8 5 b l a g o s k l o n n y m v , p a r d e ea b e x pl o i t i n gc a n c e rc e l lc y c l i n gf o r s e l e c t i v epr o t e c t i o no fn o r m a l c e l l s 【j 】c a n c e rr e s ，2 0 0 1 ，6 1 ( 1 1 ) ：4 3 0 1 4 3 0 5 6 a d a m sj c r o l e so ff a s c i ni nc e l la d h e s i o na n dm o t i l i t y c u r ro p i nc e l lb i o l ，2 0 0 4 ，16 ( 5 ) ： 5 9 0 5 9 6 7 k a b u k c u o g l us ，o n e ru ，o z a l ps s ，e ta 1 p r o g n o s t i cs i g n i f i c a n c eo ff a s c i ne x p r e s s i o ni n e n d o m e t r i o i dc 觚c i n o m a e u rjg y n a e e o lo n c o l ，2 0 0 6 ，2 7 ( 5 ) ：4 81 - 4 8 6 8 g r o t h e ya ，h a s h i z u m eks a h i n 地e ta 1 f a s c i n ，a na e t i n - b u n d - l i n gp r o t e i na s s o c i a t e d 诵t h c e l lm o t i l i t y , i su pr e g u l a t e di nh o r m o n er e c e p t o rn e g a t i v eb r e a s tc a n c e r b rjc a n c e r , 2 0 0 0 ， 8 3 ( 7 ) ：8 7 0 - 8 7 3 9 杨强，卢朝辉，罗玉凤，等f a s c i a 蛋白在结、直肠腺瘤和癌中的表达及意义诊断病理学杂 志，2 0 0 6 ，1 3 ( 5 ) ：3 5 9 3 6 1 1 0j a w h a r ia u ，b u d aa ，j e n k i n sm ，e ta 1 f 勰c i n ，a na e t i n - b u n d l i n gp r o t e i n , m o d u l a t e sc o l o m c e p i t h e l i a lc e l li n v a s i v e n e s sa n d d i f f e r e n t i a t i o ni n 、，i 仃d a mjp a t h o l ，2 0 0 3 ，16 2 ( 1 ) ：6 9 - 8 0 1 l k u r e i s h yn ，s a p o u n t z ivp r a gs f a s c i n s ，a n dt h e i rr o l e si nc e l ls t r u c t u r ea n df u n c t i o n b i o e s s a y s ，2 0 0 2 ，2 4 ( 4 ) ：3 5 0 3 6 1 12h a s h i m o t ozi t o 乃i n o u eh ，e ta 1 p r o g n o s t i cs i g n i f i c a n c eo ff a s c i no v e r e x p r e s s i o ni nh u m a n e s o p h a g e a ls q u a m o u sc e l le 鲫c i n o m a c l i nc a n c e rr e s ，2 0 0 5 ，11 ( 7 ) ：2 5 9 7 - 6 0 5 1 3 陶绪雄，王卫星，陈志丹，等p 2 7 和p c n a 在原发性胆囊癌中的表达和相关性【j 】武汉大 学学报( 医学版) ，2 0 0 6 ，2 7 ( 3 ) ：3 6 1 3 6 2 ，? 1 3 综述 f a s c i n 与p 2 7 基因的研究现状 上世纪7 0 年代b r y a n 等【l 】从海胆卵母细胞胞质中分离得到一种蛋白，由于此 蛋白与f - a c t i n 形成紧密稳定的丝状结构，被命名为f a s c i n ( 聚束蛋白) 。9 0 年代 在人、果蝇、蠕虫以及其他脊椎动物细胞中f a s c i n 相继被发现。人类f a s c i n 现已 知有3 种不同形式【2 1 ，即脊椎动物f a s c i n 或f a s c i n - 1 ( 通常简称为f a s c i n ) ，分布在大 多数脊椎动物组织内；视网膜f a s c i n 或f a s c i n 2 局限在视网膜；睾丸f a s c i n 即 f a s c i n - 3 ，特有地在睾丸表达【3 卅。 1 、f a s c i n 基因的生物学特性 f a s c i n 蛋白是肌动蛋白结合蛋白家族中的一员，f s c i n 基因c 末端的4 9 3 个氨 基酸多肽的序列与其他肌动蛋白结合蛋白明显不同川。通过基因序列分析及 f a s c i n 蛋白晶体结构研究发现f a s c i n 蛋白属于1 3 三叶虫结构蛋白家族中的一员， 含有四个p 三叶虫结构域。 人类f a s c i n 基因定位于染色体7 q 2 2 ，编码一种分子质量为5 5k u 的能与f 肌 动蛋白结合的细胞骨架蛋白，定位于细胞质张力纤维和细胞膜皱褶( r u f f l e s ) 边缘的 丝状伪足、微棘( m i c r o s p i k e s ) 的核心肌动蛋白束中【引。f a s c i n 蛋白具备两个肌动蛋 白结合位点：其中一个位于氨基端第一个p 三叶虫结构域的3 3 4 7 氨基酸之间； 另外一个位点位于第2 7 7 _ _ 4 9 3 氨基酸之间。f a s c i n 基因n 端1 1 5 0 之间的氨 基酸残基高度保守，其中第3 9 位的丝氨酸( s e r - 3 9 ) 为蛋白激酶c ( p r o t e i nk i n a s e c ，p k c ) 的磷酸化位点【9 1 。s e r - 3 9 位于f a s e i n 基因肌动蛋白结合位点1 ，该位点 的磷酸化一方面可调节f a s c i n 蛋白与f 肌动蛋白的结合活性以及细胞膜表面丝 状伪足和微棘的形成【1 0 1 。f a s c i n 的第二个作用位点位于第三、四个1 3 三叶虫结构 域的第2 3 6 - - - 4 9 3 氨基酸之间，能与包浆区的p 7 5 n t r ( p 7 5 神经营养因子受体) 结 合发挥相应功能。 2 、f a s c i n 基因的相关表达研究一-。 1 4 f a s c i n 在大多数脊椎动物组织中表达，特别是在脑、卵巢及睾丸中高表达。 但在不同细胞类型中表达不均一，在t 细胞和几种上皮细胞系中低或不表达，而 在神经元和神经胶质细胞系、骨骼肌和平滑肌细胞系、内皮细胞系和一些上皮性 肿瘤细胞系中高表达【1 1 】。 ( 1 ) f a s c i n 在哺乳动物正常组织的表达 在小鼠胚胎发育8 - 1 6 5 天，f a s c i n 1 主要在发育中的神经系统和发育中的 体节以及其他中胚层衍生的组织中表达【1 2 】，小鼠胚胎8 天时f a s c i n 1 在胚胎的前 后轴的神经上皮组织中高表达，随着发育，脑、脊髓和其它外周神经系统也都高 表达f a s c i n 1 ，胃平滑肌和骨骼肌细胞以及脑神经节和其它外周神经节细胞等持 续迁移和分化的细胞都高表达f a s c i n 1 ，但上皮组织不表达【1 3 】。成年哺乳类正常组 织血管内皮细胞、神经元细胞和成纤维细胞高表达f a s c i n - 1 ，在免疫系统，f a s c i n - 1 仅在成熟的树突状细胞中表达，在胃、胆、乳腺、结肠、卵巢和胰腺的柱状细胞 中，用免疫组化的方法均检测不到f a s c i n - 1 的表达。在食道和表皮组织的基地细 胞层中，f a s c i n - 1 低水平表达，在上层的鳞状细胞层中f a s c i n - 1 不表达【1 4 】。 ( 2 ) f a s c i n 在人类肿瘤中的表达及其与预后的关系研究 f a s c i n 蛋白在正常上皮中不表达或低表达，但在恶性肿瘤细胞中却截然不同。 近年来研究发现f a s c i n 在许多上皮来源的肿瘤细胞系及肿瘤组织中也表达上调， 并与肿瘤侵袭及转移有关 n d 5 】。f a s c i n 蛋白的表达上调具有组织特异性，在不同 组织来源的癌细胞中f a s c i n 蛋白的表达率差异很大( 表1 ) 。 f a s c i n 与乳腺癌 研究发现，在c e r b b 2 h e r 2 高表达的人类乳腺癌细胞系m d a m b 4 3 5 中f a s c i nm r n a 及蛋白水平明显增加，并表现出a c t i n 细胞骨架明显重排且细胞 运动性明显增加。提示f a s c i n 蛋白可能是c e r b b 2 在细胞骨架上的一种效应蛋 白，c e r b b 2 具有酪氨酸蛋白酶活性，可通过核因子( n f k s ) 和t a t a 核心因子 仃a t ac o r ef a c t o r ，t c f ) 激活f a s c i n 的转录，从而促进这些细胞动力学改变并增 加细胞的运动性和恶性程度 1 6 1 。此外，乳腺癌细胞系m c f 7 中i g f i r 激活可引 起f a s c i n 棘和突起短暂形成，但并不改变f a s c i n 蛋白水平。在乳腺癌组织标本 中，f a s c i n 表达上调并与e r 阴性、p r 阴性、肿瘤级别、分期相关，而且f a s c i n ： 1 5 阳性者存活时间短，并与e r p r 状态或级别相判1 7 1 。 f a s c i n 与卵巢癌 h u 掣1 8 】应用免疫组化方法发现3 4 例卵巢癌原发灶及相应转移灶中f a s c i n 蛋 白表达差异有显著性，进一步研究发现，有转移卵巢癌原发灶中，f a s c i n b r m s l m r n a 表达的比值是无转移癌原发灶的2 2 8 倍，在卵巢癌转移灶中f a s c i n b r m s l 比值是无转移癌原发灶的4 6 5 倍，以上差异均有显著性，可见随卵巢癌转移表型 的出现，f a s c i n 运动相关蛋白作为癌转移的正调控基因表达增高，而b r m s l 基因 作为负调控基因表达减低，f a s c i n b r m s l 比值随之上升，提示该比值在反映基因 表达调控变化的同时也可成为提示卵巢癌发生转移的一个指标【l9 】。f a s c i n 在正常 卵巢上皮不表达，但在所有卵巢上皮病变( 包括交界性肿瘤、原发及转移性卵巢癌) 中出现，而转移性卵巢癌中表达更为弥漫。卵巢癌细胞系中f a s c i n 的表达上调虽 然与组织学类型、肿瘤级别或d n a 倍性无明显关系，但明显与其接种至腹膜后 的生长能力相关。这都说明f a s c i n 与肿瘤细胞的侵袭性有关6 , 2 0 。 f a s c i n 与肺癌 f a s c i n 在非小细胞肺癌中表达上调，并与高肿瘤级别、高增殖分数相关。而 且在大多血管癌栓中特有地普遍表达，在大多数肿瘤微血管内皮细胞而不是大血 管中表达，且与肿瘤类型无关。细支气管肺泡癌成分多的腺癌常比侵袭性肿瘤反 应少，腺癌中对侧胸或远处转移与f a s c i n 弥漫表达明显相关。这些结果提示， f a s c i n 参与了肿瘤侵袭和血管侵犯【3 1 。 f a s c i n 与皮肤肿瘤 f a s c i n 在皮肤的大多数细胞广泛表达，但在癌中的表达与肿瘤来源有关1 2 1 1 ， 即局部浸润且很少转移的如基底细胞癌中弥漫并强表达，而高转移风险癌如恶性 黑色素瘤中没有或弱表达；而且所有这些有转移可能的恶性肿瘤中都有f a s c i n 阴 性的上皮内佩吉特细胞成分2 2 1 。提示f a s c i n 表达和局部浸润有联系，而f a s c i n 丧失与肿瘤细胞在真皮及全身散布相关。f a s c i n 在这两种过程中的作用可能与 a c t i n 细胞骨架、细胞基质连接的相互作用有关。f a s c i n 表达丧失可使肿瘤容易通 过外力，如生长的上皮、淋巴或血流而转移。这种可能可以解释皮肤癌的转移机 制【l l 】。 一 ：? 1 6 另外，研究发现，在侵袭性胰腺导管癌中有9 5 ( n = 2 5 ) 出现f a s c i n 基因高表 达【2 3 】；在胆管癌2 4 ，2 5 1 、食管癌【2 6 1 、结肠癌【2 0 1 、胃癌【1 明中均出现高频率的f a s c i n 基因阳性表达，而在相对应的正常上皮组织中除了食管上皮基底层可检测到 f a s e i n 基因低表达之外，其他部位的上皮组织均未见f a s c i n 基因阳性表达。另外， f a s c i n 基因在许多上皮来源的肿瘤细胞系，如宫颈癌h e l a 、胃癌a g s 、结直肠 癌l i m l 2 1 5 和s w 4 8 0 ，胰腺癌b x p c 3 和t 3 h 4 中均表达上调，这提示f a s c i n 基因的上调表达在上皮肿瘤组织中可能具有组织特异性，并且与恶性肿瘤可能存 在显著的正相关关系【2 7 1 。 3 、f a s c i n 在肿瘤细胞中过表达的机制 现在还不清楚导致f a s c i n 在肿瘤中过表达的分子机制是发生在转录水平还是 转录后水平。由于不同的肿瘤中f a s c i n 的表达情况也不一致，因此现在有观点认 为，不同组织来源的肿瘤中f a s c i n 表达的机制可能不一样。 肿瘤中基因产物过度表达普遍是由于染色体的异常所造成。比如，h e r 2 n e u 的编码产物是表皮生长因子受体家族的一个成员。该受体在约3 0 的乳腺癌有过 表达并和病人预后相关。而乳腺癌中这种蛋白的过度表达与其编码基因h e r 2 n e u 的扩增有着密切的关系【2 7 1 。然而，在别的类型的肿瘤，h e r 2 n e u 蛋白过度表 达的几率变异很大而且经常比预测的水平高，这提示了还存在别的调控失衡机制。 对于f a s c i n ，从m i t e l m a n 的肿瘤染色体变异数据库的检索结果显示，7 p 区域的扩 增并不是所有的f a s c i n 过度表达肿瘤的共同特征，虽然这并不足以排除f a s c i n 的 过表达与染色体的变异有关，但现有的研究结果提示转录水平或和转录后水平的 调控异常发生的可能性更大。 比较基因转录水平变化的另一种方法是检测基因表达谱即基因芯片。这种方 法正被广泛应用于肿瘤生物学的研究，而各种数据库也随之诞生。比如o n e o m i n e 数据库。该数据库收集了其它一些不同数据库中肿瘤和相应正常组织的基因表达 数据。a d m 嬲【9 】等在该数据库搜索了f a s c i n 在各种肿瘤中m r n a 的水平，结果显 示胰腺肿瘤和结肠肿瘤中f a s c i n 的m r n a 水平比正常组织的高，而其余组织来源 的肿瘤如肺癌、乳腺癌和卵巢癌等f a s c i n 的m r n a 水平比正常组织低或者差异没 有统计学意义( 表2 ) 。这些结果提示转录水平的上调或者m r n a 稳定性的改变 1 7 只在部分肿瘤中存在。 m o s a l i o s 等人研究了树突状细胞中f a s c i n - 1 基因转录水平的调控机制。f a s c i n 蛋白是树突状细胞发育成熟的一个可靠的标记，探索其在d c 细胞中的表达调控 有助于揭开f a s c i n 在肿瘤中过表达的机制。他们的研究结果显示f a s c i n 的启动子 位于基因的5 侧3 k b 区域内，其表达由顺式作用元件控制。这个启动子在d c 和 f a s c i n 表达阳性的神经元细胞系内有很强的活性，并且这个启动子的活性随着d c 细胞的成熟状况而提高。通过累进式5 缺失，在距起始密码子约2 0 0 b p 内己鉴定 一个核心启动子区域，它含有一个公认的g c