甾体和其苷.ppt

第八章甾体及其苷类SteroidsandRelatedSaponins,强心苷类,第八章甾体及其苷类,概述,甾体化合物,甾体皂苷,1,2,3,4,1,2,3,4,甾体的定义,甾体的分类,立体构型,甾类成分的颜色反应,第一节概述,1.定义：甾体又名类固醇化合物(steroids)，其结构中都具有环戊烷骈多氢菲的母核，1936年给这类化合物提出一个总称“甾体化合物”。2.结构特征：A:都具有环戊烷骈多氢菲的母核;B:甾核四个环有不同的稠合方式；C:C-10、C-13上各有一个甲基，称为角甲基；C-17位有侧链;D:C-3位有OH取代，可与糖成苷。,一、甾体的定义,各种类型的甾体,二、甾体的分类,在甾体母核上，大都存在C-3羟基，可和糖结合成苷。而C-17侧链有显著差别，根据C-17侧链结构的不同，可将天然甾类分为不同类型。,母核的构型：甾体化合物的四个环之间，每两个环以碳碳单键稠合时，可以是顺式的，也可以是反式的。A/B环有顺式(5-H)或反式(5-H)稠合。B/C环是反式稠合(8-H/9-H)。C/D环有顺式(14-H)或反式稠合(14-H)。,三、立体构型,取代基的构型：天然甾类成分C-10、C-13和C-17侧链大多为-构型，以实线表示。由于C-3上有羟基，所以有两种类型的异构体：3-OH,CH3-10顺式:-型(实线表示)3-OH,CH3-10反式:-型或epi-型(表-型，虚线表示),四、甾类成分的颜色反应,甾类成分在无水条件下，用酸处理，能产生各种颜色反应，可用这些反应来初步鉴别该类成分。1.Liebermann-burchard反应：样品溶于冰醋酸，加浓硫酸-醋酐(1:20)，产生红紫蓝绿污绿等颜色变化，最后褪色。（三萜皂苷紫红色；甾体皂苷绿色）2.Salkowski反应：样品溶于氯仿，沿管壁滴加浓硫酸，氯仿层显血红色或青色，硫酸层显绿色荧光。,题目：用Liebermann-Burchard反应可区别甾体皂苷和三萜皂苷是因为A、甾体皂苷颜色较浅B、三萜皂苷颜色较浅C、甾体皂苷最后呈污绿色D、三萜皂苷最后呈绿色E、二者的变色时间不同答案：C,4.Rosen-Heimer反应：样品,25%三氯醋酸乙醇液,红色紫色,分子中有共轭双烯结构或经三氯醋酸作用，生成物具共轭双烯结构。,3.三氯化锑或五氯化锑反应：将样品醇溶液点于滤纸上，喷以20%三氯化锑(或五氯化锑)氯仿溶液(不应含乙醇和水)干燥后，6070加热，显黄色、灰蓝色、灰紫色斑点。,第二节甾体化合物,C21甾体类化合物,海洋甾体化合物,一、C21甾体类化合物,1.定义C21甾(C21-steroides）是一类含有21个碳原子的甾体衍生物，由植物中分离出的C21甾类都是以孕甾烷(pregnane)或其异构体为基本骨架。是目前广泛应用于临床的一类重要药物，具有抗炎、抗肿瘤、抗生育等方面生物活性。,2.结构特点,A/B反；B/C反；C/D顺。C-5和C-6间大多有双键；C-20位可能有羰基；C-17位上的侧链多为a构型。C-3、C-8、C-12、C-14、C-17、C-20等位置可能有b-OH；C-11位可能有a-OH。C-11、C-12羟基可能和醋酸、苯甲酸、桂皮酸等结合成酯。,3.存在与分布,游离苷元的形式存在；与糖结合成苷C21甾体苷类：其苷类糖链多和C21甾体的3-OH相连，少数连于20-OH上。其苷类分子中的糖除2-OH糖外，还有2-去氧糖。C21甾苷类大都与皂苷、强心苷共存于中药中，多分布于玄参科、夹竹桃科、毛茛科和萝摩科等植物中。,杜楝中的甾体化合物,杜楝,二、海洋甾体化合物,Cephalostatin1,Squalamine,第三节强心苷类,一、概述,1.定义强心苷(cardiacglycosides)是存在于植物中具有强心作用的甾体苷类化合物，由强心苷元和糖缩合而产生的一类苷。目前临床应用的有二、三十种，用于治疗充血性心力衰竭及节律障碍等心脏疾病，如西地兰、地高辛、毛地黄毒苷等。但强心苷类有剧毒，若超过安全剂量时，可使心脏中毒而停止跳动。某些强心苷对动物肿瘤有效，主要是细胞毒作用。,见血封喉,Antiaristoxicaria,2.分布到现在已从十几个科一百多种植物中发现强心苷类，主要有夹竹桃科、玄参科、萝摩科、卫矛科、百合科和大戟科等。较重要的植物有黄花夹竹桃、紫花洋地黄、毛花洋地黄、杠柳、铃兰、海葱、福寿草、羊角拗等。动物中尚未发现有强心苷类成分，蟾蜍中所含的蟾毒也对心肌有兴奋作用，具强心作用，但其非苷类，而属甾体酯类。,二、化学结构和分类,1.苷元部分B/C环是反式，C/D环是顺式；A/B环大多数为顺式，少数为反式;C-3和C-14位上都有羟基：3-OH多为-型，少数为-型，命名时冠以“表”字；14-OH都是-型；C-10和C-13多为-CH3；C-17位侧链为不饱和内酯环；C-11,C-12和C-19位可能连羰基，4,5、5,6、9,11、16,17可能有双键。,2.结构类型,根据C-17位侧链的不饱和内酯环不同分为：甲型强心苷：17-位侧链为五元环的()-内酯;乙型强心苷：17-位侧链为六元环的(),()-内酯；这两类的侧链大都是-构型，个别为-构型，-型无强心作用。,甲型强心苷元,甲型强心苷元的C-17位上连五元不饱和内酯环，即()-内酯强心甾烯型。以强心甾(cardenolide)为母核命名。,乙型强心苷元,乙型强心苷元的C-17位上上连六元不饱和内酯环，即(),()-内酯，称为海葱甾二烯和蟾酥甾二烯。以海葱甾(scillanolide)或蟾酥甾(bufanolide)为母核命名。,3.糖部分,构成强心苷的糖有20多种，根据C-2位上有无-OH分为-OH糖及-去氧糖两类。-羟基糖除广泛分布于植物界的D-葡萄糖和L-鼠李糖外，还有：6-去氧糖如：D-鸡纳糖和D-弩箭子糖等。6-去氧糖甲醚如：L-黄花夹竹桃糖和D-毛地黄糖等。,-去氧糖2,6-二去氧糖如：D-毛地黄毒糖等。2,6-二去氧糖甲醚如：L-夹竹桃糖、D-加拿大麻糖等。,4.结构举例,甲型强心苷,紫花毛地黄,乙型强心苷,海葱,三、强心苷的理化性质,(一)性状和溶解度强心苷多为无色结晶或无定形粉末，中性物质，有旋光性。强心苷的溶解性与所连糖的种类和数目有关，一般可溶于水、甲醇、乙醇和丙酮等极性溶剂，略溶于含醇氯仿和乙酸乙酯，难溶于乙醚、苯、石油醚等非极性溶剂。,(二)脱水反应,强心苷中的5-OH和14-OH均系叔羟基，极易脱水，故强心苷混合强酸(3%5%HCl)加热水解时，苷元往往发生脱水反应，得到次生的脱水苷元。如果3-OH氧化成酮基，则5-OH更容易脱水，温热下即可反应，形成烯酮。同样，16-羟基被氧化成酮基，也可促使14-OH脱水得到烯酮。,(三)水解反应,1.酸水解(1)温和酸水解：用稀酸（0.020.05mol/L)的盐酸或硫酸在含水醇中经短时间(半小时至数小时)加热回流，可水解去氧糖的苷键，2-羟基糖的苷在此条件下不被水解。对苷元影响较小，不会引起脱水反应。(2)强烈酸水解:用较浓酸(3%5%)，长时间加热回流或同时加压，可水解2-羟基糖。但此法常引起苷元失去1分子或数分子水，形成脱水苷元。,(3)氯化氢丙酮法(Mannich水解)：将强心苷置于丙酮溶液中，室温条件下与HCl长时间反应(约两周，反应液中含HCl0.41%)，可得到糖的衍生物和原来的苷元。2.酶水解含强心苷的植物中，有水解葡萄糖的酶，无水解-去氧糖的酶，所以能水解除去分子中的葡萄糖而保留-去氧糖。蜗牛酶几乎能水解所有的苷键，将强心苷分子的糖逐步水解，直至获得苷元，常用来研究强心苷的结构。,3.碱水解法强心苷的苷键为缩醛结构，可被酸或酶水解，而不被碱水解。碱试剂主要使分子中的酰基水解、内酯环裂开、20(22)双键转位及苷元异构化等。甲型强心苷在醇性KOH溶液中，通过内酯环的质子转移，双键转位，14-OH与C-20亲电加成生成内酯型异构化物，再经皂化作用开环而生成开链型异构化物。,乙型强心苷在醇性KOH溶液中，不发生双键转移，但内酯环开裂生成酯，再脱水形成开链型异构化苷。,(四)颜色反应,强心苷颜色反应很多，根据颜色反应发生在分子的不同部位可分为三类：1.作用于甾体母核的反应：(1)Liebermann-burchard反应(2)Salkowski反应(3)三氯化锑或五氯化锑反应(4)Rosen-Heimer反应：,25%三氯醋酸乙醇液3%氯胺T水溶液(4:1).,样品,荧光反应,毛地黄强心苷类的区别,毛地黄毒苷类：黄色羟基毛地黄毒苷类：蓝色异羟基毛地黄毒苷类：灰黄色,2.作用于,-不饱和内酯环的反应：甲型强心苷在碱性醇溶液中，发生双键转移，生成活性亚甲基，故可与活性亚甲基试剂作用而显色。乙型强心苷无此类反应。(1)Legal反应(亚硝酰铁氰化钠试剂):取样品12mg，溶于23滴吡啶中，加一滴3%亚硝酰铁氰化钠溶液和一滴2mol/L的NaOH溶液，样品液呈深红色并渐渐褪去。(2)Kedde反应(3,5-二硝基苯甲酸试剂):取样品的甲醇或乙醇溶液于试管中，加入3,5-二硝基苯甲酸试剂34滴，产生深红或红色。,(3)Raymond反应(间二硝基苯试剂):取样品约1mg，以少量的50%乙醇溶解后加入0.1ml1%的间二硝基苯乙醇溶液，摇匀后再加入0.2ml20%的NaOH溶液，呈紫红色或蓝色。(4)Baljet反应(碱性苦味酸试剂):取样品的甲醇或乙醇液于试管中，加入碱性苦味酸试剂数滴，呈现橙或橙红色。有时需放置15min后显色。,3.作用于-去氧糖的反应(1)Keller-Kiliani反应:取样品1mg溶于5ml冰乙酸中，加一滴20%三氯化铁水溶液，倾斜试管，沿试管壁加入5ml浓硫酸。若有-去氧糖存在，乙酸层渐呈蓝或蓝绿色，硫酸层因苷元不同而呈现草绿、洋红或黄棕色等不同颜色。该反应只对游离的2-去氧糖或在反应条件下能水解出2-去氧糖的强心苷显色。,(2)对-二甲氨基苯甲醛反应：可在滤纸上反应，样品滴在滤纸上，喷对二甲氨基苯甲醛试剂，90加热，反应后呈灰红色斑点。(3)占吨氢醇反应:取样品加入占吨氢醇试剂，置沸水浴上加热3min，呈红色。(4)过碘酸-对硝基苯胺反应：样品反应后呈深黄色斑点，紫外灯下为棕色背底上现黄色荧光斑点。本反应可作为TLC的显色方法。,四、强心苷的波谱特征,1.UV甲型：max220nm(lg4.34)乙型：max295-300nm(lg3.93)2.IR不饱和内酯环的羰基峰:18001700cm-1两个峰。甲型:1756cm-1和1783cm-1(强度随溶剂极性增加而减弱)乙型:1718cm-1和1740cm-1(强度随溶剂极性增加而减弱),3.MS羟基脱水，醛基脱CO、脱甲基、脱17-内酯侧链和RDA裂解的碎片。甲型：m/z111,124,163和164等含有内酯或内酯环加D环的碎片乙型：m/z109,123,135和136等碎片,若分子量500，应用FAB-MS可将糖-苷元打断，灵敏度高；分子离子峰较强；提供糖链连接顺序和糖的种类信息；样品用量少。,4.1H-NMRCH3：19-Me10-CHO：9.510.0;10-CH2OH：酰化后4.04.5,ABq,J=12Hz;H-3：3.90(m)，成苷后向低场位移；H2-16(若无含氧基团取代)：2.02.5,m;H-17：2.80,m或dd,J=9.5Hz;,内酯环五元内酯环六元内酯环5.糖单元上的质子端基氢：-D-glcaaJ=68Hz-L-rhaaeJ=2Hz6-去氧糖1.0-1.5d峰2-去氧糖aa和aedd峰甲氧基糖3.50,5.13C-NMR一般用比较的方法。伯碳仲碳叔碳季碳醇碳烯碳羰基碳12-2420-4135-5727-4365-91119-172177-210可判断A/B环的稠合方式C-19A,B环上的碳5-甾体245-甾体12较5-甾体低场2-8,1.提取原生苷：抑制酶的活性(冷冻干燥、快速提取或快速干燥)，用MeOH或70%EtOH提取；次生苷：利用酶的活性，用EtOH或EtOAc提取。2.纯化1.溶剂法：用石油醚、乙醚脱脂，醇提；2.用铅盐法除去水溶性杂质；3.吸附法：活性炭或Al2O3吸附色素、糖类和皂苷；3.分离常用方法：萃取法、逆流分配法、重结晶、色谱法,五、强心苷的提取分离,毛地黄毒苷的提取分离,六、强心苷的生理活性.,强心苷为心脏兴奋剂，主要作用是延长传导时间，兴奋心肌。其强心作用主要取决于苷元部分，但糖部分可增加强心苷对心肌的亲和力，故对强心苷的生理活性也有影响。1.苷元结构与强心作用的关系强心苷元甾体母核必须具有一定的构象，A/B顺或反，C/D顺，14-OH只有是-构型的才有效；C-17位连接的不饱和内酯环及其-构型是不可缺少的，若异构化为-型、开环、不饱和内酯环被氢化或双键位移，均无活性或活性显著降低。,A/B环顺式的甲型强心苷元，C3-OH必须是-构型，-型无活性。10-CH3氧化成羟甲基、醛基或羧酸后，可影响强心作用的强度或毒性，但不是决定因素。无论在苷元或糖基上增加乙酰基都有增强活性的作用。2.糖与强心作用的关系强心苷中糖的性质和数目，可以影响到其油/水分配系数，从而影响强心苷的活性和毒性。一般来说，2,6-二去氧糖的苷对心肌和中枢神经系统的亲和力比葡萄糖苷强，其强心活性、毒性和亲脂性成平行关系。,第四节甾体皂苷,1.定义甾体皂苷是一类由螺甾烷类化合物与糖结合形成的寡糖苷。甾体皂苷分子中不含羧基，呈中性，故又称中性皂苷。2.分布甾体皂苷数目非常庞大，主要分布薯蓣科、百合科、玄参科、菝葜科和龙舌兰科等单子叶植物中。,一、概述,抗生育：主要用作合成甾体避孕药和激素类药物的原料；地奥心血康胶囊含由黄山药中提取的8种甾体皂苷，总量在90%以上，治疗冠心病。心脑舒通由蒺藜果实中提取的总甾体皂苷，用于心脑血管疾病的防治。降血糖，降低胆固醇和免疫调节抗肿瘤、抗真菌、杀虫等,3.生物活性,二、化学结构,1.结构特点分子有27个碳构成分子内具螺缩酮的结构A/B顺或反；B/C反,C/D反C-10,C-13具-CH3C-3有-OH取代C-5、C-6有时具双键；C-12有时具羰基侧链中有三个手性碳：C-20、C-22和C-25,螺甾烷醇类(spirostanols)20-CH3为型，即20-CH3位于E环平面的背面，但对F环来说是型，用20F表示。C-22含氧侧链也为型，用22F表示。25-甲基位于F环平面上的直立键，为型，其绝对构型为S型(25S，25L，25F，neo);S型即为螺旋甾烷，由其衍生的皂苷为螺甾烷醇皂苷类(spirostanolsaponins)。,2.结构分类,25-甲基位于环平面上的平伏键，为型，其绝对构型为R型(25R，25D，25F，iso);R型即为异螺旋甾烷，由其衍生的皂苷为异螺甾烷醇皂苷类(isospirostanolsaponins)。,异螺甾烷醇类(isospirostanols),薯蓣,剑麻,呋甾烷醇类(furostanols)F环为开链衍生物,F环裂解的双糖链皂苷对Ehrlich试剂(盐酸对二甲氨基苯甲醛试剂，E试剂)显红色；对茴香醛试剂(Anisaldehyde，A试剂)显黄色；F环闭环的单糖链皂苷和螺旋甾烷衍生的皂苷元只对A试剂显黄色，对E试剂不显色。,菝葜,菝葜皂苷,变形螺甾烷醇类(pseudo-pirostanols)F环为五元四氢呋喃环,刺茄,三、甾体皂苷的理化性质,1.性状：甾体皂苷元有较好晶形；皂苷多为无定形粉末，味苦而辛辣，对人体黏膜有强烈的刺激性；皂苷多具旋光性，且多为左旋；2.溶解性：甾体皂苷元能溶于亲脂性溶剂；不溶于水。皂苷一般可溶于水、稀醇易溶于热水、稀醇，难溶于石油醚、苯、乙醚等亲脂性溶剂。,3.表面活性及溶血作用：甾体皂苷多具有发泡性，其水溶液振荡后产生持久性泡沫。甾体皂苷具有溶血作用。4.能与碱式铅盐、钡盐形成沉淀。5.颜色反应：甾体皂苷在无水条件下，遇某些酸类可产生与三萜皂苷相类似的颜色反应。甾体皂苷与醋酐硫酸的颜色反应，最后出现绿色；三萜皂苷最后出现红色。三萜皂苷三氯醋酸加热到100显色，而甾体皂苷加热到60就显色。,6.甾体皂苷可与甾醇形成分子复合物：甾体皂苷的乙醇溶液可被甾醇(常用胆甾醇)沉淀。除胆甾醇外，凡是C-3位有-OH的甾醇都可与皂苷结合生成难溶性分子复合物。若3-OH为构型，或者是当3-OH被酰化或生成苷键，就不能与皂苷生成难溶性的分子复合物。生成的分子复合物用乙醚回流提取时，胆甾醇可溶于醚，但皂苷不溶，从而达到纯化皂苷和检查是否有皂苷成分的存在。,四、甾体皂苷元的波谱特征,1.UV(nm)孤立双键205-225900孤立羰基285500,-不饱和酮24011000共轭双键235C14-OH的判断：max307-309nm,2.IR甾体皂苷元含有螺缩酮结构的侧链，在IR中几乎都能显示出980cm-1(A)、920cm-1(B)、900cm-1(C)、860cm-1(D)附近的四个特征吸收带，且A带最强。在25S型皂苷或皂苷元中，B带C带。在25R皂苷或皂苷元中则是B带19-CH321,27-CH31.0,d;21-CH327-CH3H-16和H2-26是联氧碳上质子，位于较低场，容易辨认。,I,II,5.13C-NMR18,19,21,27四个甲基的20，但是A/B顺式稠合时，C-19为23左右。羟基取代，低场位移；苷化之后，引起相应的苷化位移；双键在115150之间；羰基在170220；C-16为80左右；C-22为109左右；,五、甾体皂苷的提取与分离,1.甾体皂苷元的提取在植物组织中将皂苷水解，然后用低极性溶剂提取皂苷元。先用极性溶剂如甲醇、乙醇、丁醇将皂苷提出，再加酸加热水解，滤出水解物，然后用低极性溶剂提取皂苷元。,2.甾体皂苷的提取,正丁醇法,大孔树脂法,皂苷类化合物的分离多采用硅胶柱色谱或HPLC分离。,题目：区别甲型强心苷元和甾体皂苷元用A、Legal反应B、Keller-Kiliani反应C、Liebermann-Burchard反应D、Salkowski反应E、Molish反应答案：A,题目：活性皂苷化合物一般不做成针剂是因为A、有溶血作用B、久置产生沉淀C、不能溶于水D、产生泡沫E、增加黑色素答案：A,题目：