实验四福医大白细胞计数、网织红细胞计数、血沉.ppt

实验四白细胞计数、网织红细胞计数及血沉测定,目的1掌握显微镜白细胞计数的方法。2掌握网织红细胞手工计数的方法。3血沉测定（示教）。,一、显微镜白细胞计数（临检指导P32）,1.概述人外周血白细胞单核细胞白细胞淋巴细胞中性分叶核粒细胞粒细胞中性杆状核粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞,一、显微镜白细胞计数,2原理用白细胞计数稀释液（2%冰醋酸加入1%美蓝或结晶紫数滴）0.38ml，将血液（20l）稀释20倍，在破坏成熟红细胞的同时固定白细胞，后充入改良牛鲍计数板，在低倍镜下计数四角4个大方格内的白细胞数，经换算求得每升血液中白细胞数。,一、显微镜白细胞计数,3.操作步骤（1）加稀释液：白细胞稀释液0.38ml（2）稀释血液：末梢采血20l，加入稀释液中混匀（3）溶血：混匀后静置，待液体变为棕褐色（4）充池：同红细胞计数（5）计数：低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数。,一、显微镜白细胞计数,4.计算WBC=N/41020106=N/20109/L5.参考值成人：（410）109/L初生儿：（1520）109/L6月2岁：（1112）109/L,6.注意事项（1）器材：微量吸管及牛鲍计数板的校正（2）标本采集和稀释应准确（3）加盖玻片方式：WHO推荐“推式”法（4）充液的影响：同红细胞计数（5）计数原则,一、显微镜白细胞计数,（6）计数室内的细胞分布要均匀：各大方格间细胞数相差不超过10%，否则应重新重池。（7）调整计数白细胞的数量或稀释倍数:细胞数量过少，可扩大计数域(计8或9个大方格)或加大取血量；细胞数量过多，可增加稀释液至0.79ml或仅加血10l。（8）去除有核红细胞的影响：实际白细胞数/L=100校正前白细胞数/（100+有核红细胞）,7.方法学评价显微镜计数法是传统的白细胞计数法，并可用于校准血细胞分析仪，但其精密度和重复性欠佳。用于校准血液分析仪时应在严格规范的条件下进行。而校准的血液分析仪在严格规范的条件下，精密度和准确性较高。,一、显微镜白细胞计数,血液分析仪检测速度快，适合大规模健康人群普查，但需特殊仪器，当某些人为或病理情况（如外周血有核红细胞、巨大血小板和血小板凝集等）可干扰白细胞计数。,一、显微镜白细胞计数,8.临床意义白细胞在生理或病理情况下均可有差异。多数与中性粒细胞数量变化一致。,二、网织红细胞计数（临检指导P26）,1.原理网织红细胞（Ret）是晚幼红细胞脱核后到完全成熟的红细胞间的过渡细胞。其胞质中残存核糖核酸等嗜碱性物质，故经煌焦油蓝/新亚甲蓝染液活体染色后，可见有蓝绿色点状、线状、颗粒状或网状结构，故名网织红细胞。,二、网织红细胞计数,2.操作步骤（玻片法）（1）加染液：于载玻片的中央滴加煌焦油蓝乙醇溶液，自然干燥后备用。（2）加血液：取血1滴，滴在染料上，用推片角轻轻将血滴与染料混匀，然后用另一载玻片垂直盖在此玻片上（尽量不留气泡），室温下静置1520min。（3）制备涂片。（4）油镜下计数1000个红细胞中的网织红细胞数（一般连续计数3个视野即可）。,（5）也可用米勒氏窥盘（Milleroculordisc）置入接目镜内进行计数（如下图）。具体方法是以窥盘的A区计数红细胞，B区计数网织红细胞，由于B区的面积为A区的9倍，故计算如下：网织红细胞（%）=B区网织红细胞数/A区红细胞数9100%,二、网织红细胞计数,3.计算网织红细胞分数数=计数的网织红细胞数/1000网织红细胞绝对数=红细胞数/L网织红细胞分数数4.参考值正常成人：0.5%1.5%新生儿：2%6%成人网织红细胞绝对值：（2484）109/L,5.注意事项（1）只有活体染色后才能看到网织红细胞，故必须将新鲜血滴与染液相混合，染液与血液之比一般约为1：1，但若贫血严重也可按1：2关系处理。注意混匀，否则有时凝固。（2）染色时间不得短于10min，否则可能着色不佳。计数前注意多部位观察，可与涂片的体尾交界处选染色好，红细胞分布既不分散又不重叠的区域进行计数。经此种染色后红细胞呈清晰的蓝绿色，凡胞质中含有蓝绿色点状、短线状结构者为网织红细胞。,二、网织红细胞计数,网织红细胞,（3）计数时需注意与异物或假象相区别。如有异物残渣，多呈黑色，转动微螺旋时可见其折光性。接目镜中粉尖重叠于红细胞上所致的假象，则随接目镜转动而移位。勿将皱缩红细胞较深染的皱缩点勿认为网织结构，皱缩红细胞其边缘处均匀的锯齿状可供作鉴别。（4）染色后的涂片应尽快观察计数，否则其网织结构可因久置而溶解消失（尤其在夏天湿度大的季节）。,6.方法学评价玻片法取血量少，且易于使混合血液中的水分蒸发，造成染色结果偏低，但携带方便，适宜床边采血检查。,二、网织红细胞计数,二、网织红细胞计数,7.质量控制1.显微镜法网织红细胞目视计数误差较大，影响因素主要有：操作人员对网织红细胞认识不同；血涂片质量好坏，计数红细胞数量的多少和计数方法等。,2.仪器法虽可计数红细胞1000050000个，但受到H-J小体、有核红细胞、巨血小板等影响，可出现假阳性。,三、血沉测定（示教）（临检指导P29）,1原理(魏氏法)将一定量的抗凝全血灌注于特制的血沉管中，垂直立于血沉架上1h后读取红细胞下沉后所暴露出的血浆段高度（mm/h）。,三、血沉测定,2方法（1）取静脉血1.6ml，加入含109mmol/L枸橼酸钠0.4ml的抗凝管中混匀。（2）吸血入血沉管中至刻度“0”处，将血沉管直立于血沉架上。1h后观察结果。,三、血沉测定,3.参考值50岁：男性015mm/h女性020mm/h,4注意事